estudios microscópicos y ultramicroscópicos de semen canino

estudios microscópicos y ultramicroscópicos de semen canino

Acta Microscopica Vol 16 No1-2,(Supp.2)2007
Cusco-Peru September 2007
194
ESTUDIOS MICROSCÓPICOS Y ULTRAMICROSCÓPICOS DE SEMEN CANINO FRESCO Y
CONGELADO-DESCONGELADO CON UN DILUYENTE TRIS BASE CON EL AGREGADO DE
TREALOSA
M.A. Stornelli1,2, S.B Jurado3, C.A. Savignone1,2, P. Sarmiento4, C.M. Tittarelli1, MC Stornelli1,2, R.L. de la
Sota1,2
1
Instituto de Teriogenología, 2Laboratorio Central, 3Servicio Central de Microscopía Electrónica. Facultad de
Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata. B1900AVW. La Plata. Argentina. cc 296. 4Servicio
de Microscopía Electrónica de Barrido. Facultad Ciencias Naturales y Museo. Universidad Nacional de La
Plata. Paseo del Bosque s/n. La Plata. B1900AVW. Argentina.
E-mail: [email protected]
Diferentes diluyentes han sido estudiados para criopreservar semen en caninos (1). Los trisacáridos han sido
incluidos en diluyentes Tris-Base (TB) con el fin de estabilizar las membranas mediante la interacción de
estos azúcares con los fosfolípidos de la misma (4). Los efectos deletéreos ocurridos durante los procesos de
congelación-descongelación pueden observarse mediante microscopía electrónica de transmisión (MET) y de
barrido (MEB) (2,3). El objetivo fue evaluar la acción del agregado de trealosa a un diluyente TB. Se realizó
la recolección manual del eyaculado de cuatro perros Ovejero Alemán de entre 2 y 5 años de edad. Luego de
la obtención de la fracción espermática del eyaculado se separó una alícuota de semen fresco, la cual fue
procesada inmediatamente para MET y MEB, el resto fue congelado con diluyente TB solo (Tris 2,4 g, ácido
cítrico 1,4 g, fructosa 0,8 g, glicerol 5 ml, yema de huevo 20% v/v, penicilina sódica 0,06 g, sulfato de
estreptomicina 0,1 g, agua destilada csp 100ml) o con el agregado de 2,5% y 7% de trealosa (TBT). El semen
descongelado fue procesado para MET y MEB y evaluado junto con el semen fresco. En el estudio
ultramicroscópico del semen fresco la mayoría de los espermatozoides mostraron una morfología normal. Se
observó la presencia de algunas anormalidades: lipping acrosomal, macrocefalia, vacuolas nucleares, varias
colas rodeadas por una membrana plasmática común y defecto de Dag. En las muestras de semen
descongelado se observaron espermatozoides que presentaron diferentes alteraciones ultraestructurales. Se
observó: separación, hinchamiento y formación de pliegues en membrana plasmática con desprendimientos (a
nivel de cabezas y colas) y rupturas (en cabeza), hinchamiento de la membrana acrosomal, contenido
acrosomal distribuido en forma no uniforme, formación de vesículas en la membrana acrosomal externa y
plasmática a nivel de la cabeza así como ruptura e hinchamiento de la membrana plasmática a nivel de la cola.
El semen diluido con TB mostró índices de descongelación superiores a los obtenidos con el semen diluido
con TB y el agregado de trealosa (TB vs. TBT 2,5%, y TBT 7%; (motilidad, vigor, integridad de membrana,
acrosomía) P<0,001). Así mismo, el semen diluido con un diluyente TBT 2,5% mostró índices de
descongelación superiores a los obtenidos con semen diluido con TBT 5% (motilidad, vigor, integridad de
membrana, acrosomía) [P<0,05]. No se observó ningún efecto de perro ni interacción entre perro y diluyente
en los índices pos-descongelación evaluados. El índice de descongelación mas bajo fue observado en el
porcentaje de motilidad progresiva al descongelado (63% vs 73%). El estudio ultramicroscópico reveló un
mayor porcentaje de espermatozoides con alteraciones espermáticas en las muestras de semen descongelado
en comparación con las muestras de semen fresco siendo las diferencias significativas (P<0,001). En el semen
descongelado los espermatozoides alterados mostraron ruptura de membrana plasmática a nivel de la cola.
Nuestros resultados muestran que el semen canino diluido en un diluyente Tris-Base con el agregado de
fructosa, pero sin trealosa posee al descongelado mayores porcentajes de motilidad progresiva, vigor,
acrosomas intactos, y espermatozoides vivos y con membrana plasmática íntegra si lo comparamos con el
semen congelado con diluyente Tris-Base con el agregado de fructosa y trealosa. Así mismo el índice de
descongelación más bajo observado fue motilidad, los altos índices de motilidad observados en el diluyente
con fructosa sin el agregado de trealosa se relacion con lo observado por Yildis (4). Esta observación se
correlaciona con los hallazgos observados con MET y MEB.
Bibliografía
[1] W, Fastard. Theriogenology (2000) 53: 175-186.
[2] H, Rodriguez Martinez et al. J. Reprod. Fertil. Suppl. (1993) 47: 279-85.
[3] MA, Stornelli et al. Theriogenology (2006) 66: 664-665.
[4] C, Yildiz et al. Theriogenology (2000) 54: 579-585.
Semen congelado y descongelado con diluyente Tris base con el agregado de trealosa. Figura 1- Se
observan espermatozoides con la cabeza separada de la cola (flechas). Figura 2- En el recuadro se señala la
ruptura de la membrana plasmática de la cola. G: gota citoplasmática. C: cabeza de espermatozoide. Figura
3- Vesiculación de la membrana plasmática de la cabeza de un espermatozoide. V: vesículas. N: núcleo.
Figura 4- Membrana plasmática (MP) de la cola hinchada y rota (flechas).