Monografia Calendula-es

CALENDULA, flor
Calendulae flos
La droga consiste en las flores liguladas completamente abiertas, separadas del
receptáculo, desecadas, enteras o fragmentadas, obtenidas de los capítulos simples o
semidobles de Calendula officinalis L., acompañadas de escasas flores tubulosas,
brácteas involucradas y raramente frutos. Debe contener no menos de 0,4% de
flavonoides totales, calculados como hiperósido (C21H20O12, 464,4) en relación al
material desecado.
ENSAYOS DE IDENTIFICACIÓN
A-Descripción macroscópica- Flores liguladas, femeninas, de 15 a 30 mm de longitud
y 5 a 7 mm de ancho en la parte media de la lígula, amarillentas, amarillo-naranjas a
pardo-anaranjadas, con tubo corto externamente piloso y con lígula tridentada en el
ápice, 4 o 5 nervaduras paralelas; flores ocasionalmente acompañada de un estilete
filiforme y un estigma bífido; ovario de color pardo-amarillento a pardo-anaranjado;
frutos, cuando presentes, aquenios curvos, naviculares, con el dorso cubierto de
espinas cortas y de coloración pardo-verdosa. Flores tubulosas hermafroditas, escasas,
con corola de aproximadamente 5 mm de longitud, pentalobuladas, de color amarillo,
rojo-anaranjado o rojo-violáceo; tubo externamente piloso en la porción inferior. Papus
ausente.
B-Descripción microscópica- En el material diafanizado, en vista frontal, la epidermis
de la corola ligulada muestra una cutícula estriada sobre células rectangulares y
alargadas, de contorno levemente sinuoso, ausencia de estomas en la cara superior
(adaxial) y presencia de escasos estomas anomocíticos en la cara inferior (abaxial). En
la región basal de la cara inferior (abaxial) presencia de tricomas tectores largos,
multicelulares, biseriados, cónicos, de ápice redondeado y tricomas glandulares
multicelulares, de pedicelo uniseriado, con 3 a 5 células, o biseriado con 3 o 4 células
en cada fila, ambos con cabeza ovalada, multicelular, generalmente biseriada. En el
parénquima, por transparencia, se observan prismas y pequeños aglomerados de
cristales y numerosas gotas de aceite de color amarillo-anaranjado a amarillo-claro. El
parénquima de la lígula es atravesado longitudinalmente por 4 o 5 haces vasculares,
con elementos de vaso presentando engrosamientos anillados y helicoidales. Junto a
las células parenquimáticas de las corolas tubulosas se encuentran 5 haces vasculares
bifurcados debajo de la zona de soldadura de los pétalos. El ovário presenta tricomas
glandulares, iguales a los presentes en las corolas liguladas.
C-Descripción del polvo- El polvo debe cumplir con todas las exigencias establecidas
para la especie, menos los caracteres macroscópicos. Examinar al microscopio,
utilizando solución de hidrato de cloral R. Son características: color pardo-amarillento;
fragmentos de corolas conteniendo gotas de aceite de color amarillo-claro, algunos con
estomas anomocíticos grandes, otros con prismas y drusas de oxalato de calcio;
tricomas glandulares con pedicelo uniseriado o biseriado (pluricelulares); granos de
polen esféricos, de 40-45 m de diámetro, con exina fuertemente equinada con tres
poros germinales, en ocasiones se presentan fragmentos de estigmas con papilas
cortas y bulbosas.
D. Cromatografía
Proceder según lo descripto para Cromatografía en capa fina en los Métodos
Generales.
Fase estacionaria: Emplear una placa recubierta con sílica gel GF254 de 0,25 mm de
espesor.
Fase móvil: ácido fórmico anhidro, agua y acetato de etilo (10:10:80).
Solución muestra: Calentar a reflujo 1,0 g de droga reducida a polvo con 10,0 ml de
metanol durante 10 minutos. Enfriar y filtrar.
Solución de referencia: Disolver 1,0 mg de ácido cafeico, 1,0 mg de ácido clorogénico y
2,5 mg de rutina en metanol, completar a volumen de 10 mL utilizando el mismo
solvente.
Revelador: Utilizar una solución al 1 % de difenilborinato de 2-aminoetilo en metanol,
seguido de una solución de macrogol 400 a 5% (p/v) en metanol.
Procedimiento: Aplicar por separado sobre la placa, en forma de banda, 20 μl de la
Solución muestra y 10 μl de la Solución de referencia.
Dejar secar las aplicaciones y desarrollar el cromatograma. Retirar la placa de la
cámara, secar y nebulizar la placa con Revelador. Dejar secar al aire por 30 minutos y
examinar bajo luz ultravioleta a 365 nm.
Resultados: En el esquema siguiente se muestra la secuencia de zonas presentes en
el cromatograma obtenido con la solución de referencia y la solución muestra. Otras
zonas pueden ocasionalmente estar presentes.
Acido
Acido cafeico:
cafeico: banda
zona de
de
fluorescencia
fluorescencia azul
celeste
verdosa
Acido clorogénico: zona
de fluorescencia celeste
Rutina: zona de fluorescencia
pardo amarillenta
Solución Referencia
zona de fluorescencia verde
amarillenta
zona de fluorescencia
celeste
zona de fluorescencia
celeste
zona de fluorescencia pardo
amarillenta
zona de fluorescencia verde
amarillenta
Solución Muestra
ENSAYOS DE PUREZA
Materia Extraña: No debe contener más de 5 % de brácteas y no más de 2,0 % de
otros elementos extraños.
Cenizas totales
No más de 10,0 %.
Pérdida por secado
No más de 12% con 1 g de droga (500) a 105 ºC durante 2 horas.
ENSAYOS DE CONTAMINANTES
Control microbiológico: Debe cumplir con los requisitos.
Determinación de micotoxinas: Debe cumplir con los requisitos.
Metales tóxicos y arsénico:Debe cumplir con los requisitos.
Residuo de agroquímicos: Debe cumplir con los requisitos.
VALORACIÓN
Preparación muestra - Pesar exactamente cerca de 0,8 g de la droga reducida a polvo
(500), y colocar en un balón de 100 mL. Agregar 1,0 mL de una solución acuosa al 0,5
% de hexametilentetramina (p/v), 20 mL de acetona y 2 mL de ácido clorhídrico R.
Calentar a reflujo durante 30 minutos. Filtrar la mezcla a través de algodón y transferir
el filtrado a un matraz de 100 mL. Retomar el residuo de la droga y el algodón al
mismo balón y agregar 20 mL de acetona . Calentar a reflujo durante 10 minutos. Dejar
enfriar a temperatura ambiente, filtrar a través de algodón a un matraz de 100 mL.
Repetir este procedimiento con otra porción de 20 ml de acetona. Reunir estos
extractos, filtrar con papel de filtro y transferir el filtrado al matraz, completar a volumen
con acetona lavando el balón y el filtro. Transferir 20,0 ml de la solución anterior a una
ampolla de decantación. Agregar 20 ml de agua destilada y extraer con una porción de
15 ml de acetato de etilo. Repetir la operación por tres veces con porciones de 10 ml de
de acetato de etilo R. Reunir las fases de acetato de etilo en una ampolla de
decantación, lavar con dos porciones de 50 ml de agua destilada. Filtrar la fase
orgánica sobre 10 g de sulfato de sodio anhidro y transferir a un matraz aforado de 50
ml. Completar a volumen con acetato de etilo R y homogeneizar.
Solución de cloruro de alumínio: Disolver 2,0 g de cloruro de aluminio en 100 mL de
una solución de ácido acético glacial en metanol 5 % v/v.
Solución problema : Transferir 10,0 ml de la Preparación muestra a un matraz aforado
de 25 mL, agregar 1 ml de Solución de cloruro de aluminio y completar a volumen con
una solución de ácido acético glacial en metanol 5 % (v/v).
Solución blanco: Transferir 10,0 ml de la Preparación muestra a un matraz aforado de
25 ml y completar a volumen con una solución de ácido acético glacial en metanol 5 %
(v/v).
Procedimiento
Determinar la absorbancia de la Solución problema luego de 30 minutos por
comparación con la Solución de compensación, a 425 nm, en cubeta de 1 cm,
utilizando solución blanco para ajustar a cero. Calcular el porcentaje total de
flavonoides expresados como hiperósido, según la fórmula:
% flavonoide s totales
A x 1,25
m
Donde,
A= absorbancia a 425nm de la Solución Problema
m = masa de la droga seca (g) considerando la pérdida por desecación.
ENVASADO Y ALMACENAMIENTO
En recipientes de vidrio, bien cerrados, al abrigo de la luz y del calor.
ROTULO
Observar la legislación vigente.
Figura 1 - Aspectos macroscópicos, microscópicos y microscópicos del polvo en Calendula officinalis L.
Complemento de leyenda de la Figura 1. Las escalas corresponden en A a 1 mm; en B y C a 0,5 mm; en D a H a 100
µm y en I a 1 mm.
A - flor pistilada de la ligulada. B - flor tubulosa del disco. C - anteras de la flor tubulosa, con granos de polen. D -
tricoma multicelular biseriado del tubo de la corola de la flor ligulada. E - fragmento de lígula. F - detalle de la
extremidad del fragmento de la lígula esquematizada en E, con gotas de aceite en el parénquima. G - fragmento de
epidermis de lígula con cutícula estriada. H - fragmento de parénquima de lígula conteniendo gotas de aceite. I aspecto del fruto. J - granos de polen tricolpados.