Servicio de banco de semen y vitrificación de ovocitos

Servicio de banco de semen y vitrificación de ovocitos

BANCO DE SEMEN
VITRIFICACIÓN
SUGERENCIAS…
JAVIER OLTRA CHICOTE
TECNICAS TRA
Transferencia
Vitrificacion
FIV
Congelación
Inseminación DGP
PICSI
embriones
Captación
CONGELAR SEMEN
Medios cultivo
Fragmentación ADN
ICSI
Hatching
IMSI
MACS
PCR
sexado
Vitrificación
ovocitos
embryoscope
Servicio integrado en las T.R.A. que permite
conservar muestras de semen a lo largo del tiempo,
manteniendo parte de la viabilidad inicial, para ser
usado en el momento que se necesite.
Donantes
Factor masculino(azoospermia),mujer sola..
Muestras valiosas
Obtención traumática (biopsia,aspiración..)
Pérdida fertilidad
Tratamiento quimioterapia,radioterapia..
Situaciones profesionales
Ausencia el dia punción..
ORGANIZACIÓN BANCO DE SEMEN
Recursos humanos:
• Médico experto en Reproducción Humana.
• Biólogo formación y experiencia en criopreservación de semen.
• Personal de enfermería.
• Personal sanitario auxiliar.
Áreas:
• Área exclusiva para la recogida de semen.
• Área de almacenamiento y conservación de las muestras.
• Área de almacenamiento y archivo de datos.
Recursos materiales:
• Disponibilidad de nitrógeno líquido.
• Microscopio, centrífuga.
• Recipientes criogénicos.
FUNCI0NAMIENTO BANCO SEMEN
1. Captación de donantes.
2. Recepción de donantes.
3. Selección de donantes.
4. Firma del consentimiento informado.
5. Uso de gametos masculinos para la donación.
FUNCIÓNAMIENTO BANCO SEMEN
1. Captación de donantes.
• Folletos publicitarios.
• Recomendación personal directa de otro
donante.
• Anuncios y artículos relacionados en prensa y
radio
• Universidades y polideportivos.
2. Recepción de donantes.
3. Selección de donantes.
4. Firma del consentimiento informado.
5. Uso de gametos masculinos para la donación.
FUNCIÓNAMIENTO BANCO SEMEN
1. Captación de donantes.
2. Recepción de donantes.
• Pruebas a las que van a ser sometidos.
• Frecuencia con la que deben acudir al Banco.
• Controles serológicos periódicos.
• Necesidad de periodos de abstinencia de 3-5 días.
• Método de recogida de la muestra.
3. Selección de donantes.
4. Firma del consentimiento informado.
5. Uso de gametos masculinos para la donación.
FUNCIÓNAMIENTO BANCO SEMEN
1. Captación de donantes.
2. Recepción de donantes.
3. Selección de donantes.
Historia clínica y personal del donante.
Seminograma completo.
Analítica sanguínea, Cariotipo…
Viabilidad tras congelación/descongelación.
4. Firma del consentimiento informado.
5. Uso de gametos masculinos para la donación.
FUNCIÓNAMIENTO BANCO SEMEN
1. Captación de donantes.
2. Recepción de donantes.
3. Selección de donantes.
4. Firma del consentimiento informado.
5. Uso de gametos masculinos para la donación.
ÉXITO-FRACASO
SELECCIÓN DE DONANTES
CRITERIOS SELECCIÓN
ÉXITO-FRACASO
PROPIOS DE CADA CENTRO
Recuento spz/movilidad
Viabilidad congelación/descongelación
Muestras en fresco 70 -80x106 spz/ml y una motilidad del 40%(A+B)
30-40% NO SOBREVIVE CONGELACIÒN
Para superar prueba congelación/descongelación se debe recuperar
aprox. el 50% de los espermatozoides móviles progresivos iniciales.
Mayoría de candidatos que no satisfacen los requisitos demandados. La mayoría
debido a una pobre calidad seminal y al deterioro de ésta tras el proceso de
congelación/descongelación (Murray y Golombok, 2000).
CONGELACIÓN
La congelación de semen se define como el tratamiento
empleado para la conservación y el mantenimiento de
espermatozoides a temperaturas de –196ºC.
MÉTODO DE CONGELACIÓN
1. Dilución en crioprotector: Proporción variable.
2. Envasado de la mezcla en pajuelas, criotubos, etc.
3. Congelación:
• 20-45 minutos a 4ºC (nevera).
• 30 minutos en vapores de nitrógeno (1-10 cm).
• Nitrógeno líquido.
4. Mantenimiento a bajas temperaturas (bancos de nitrógeno).
5. Descongelación: incubar a 37ºC durante 1-10 minutos y
comprobar la calidad de la muestra.
CONGELACIÓN II
Crioprotector Tª ambiente
Diluir gota a gota/cargar pajuelas
0
0
Almacenar bombona cuarentena
Sellar pajuelas
30 min vapores Nitrógeno
30-40 min
CONGELACIÓN III
TANQUES DE CONGELACION
• Tamaño variable.
• Mantenimiento temperatura.
• Protegido con aislante térmico.
• Resistente y robusto.
• Organización interna clara y fácil acceso.
SISTEMA MARGARITA
MEDIDAS DE SEGURIDAD
• Evitar riesgo de anoxia: uso de medidores de O2
• Evitar quemaduras por salpicaduras/contacto
DESCONGELACIÓN
SACAR DEL TANQUE
BAÑO 1 MIN A 37ºC
CAPACITACIÓN SEMINAL
GRADIENTE
SIEMPRE 37ºC
VALORACION MUESTRA
VITRIFICACIÓN
La vitrificación es una técnica para la congelación ultrarrápida de células
con altas concentraciones de crioprotectores para la posterior inmersión
directa de las muestras en nitrógeno líquido a -196ºC.
El medio acuoso intracelular adquiere una viscosidad evitando la
formación de cristales de hielo que dañan estructuras celulares
Vc
Ve
Formación de cristales de hielo
Vc
Ve
Vitrificación
El uso de grandes concentraciones de crioprotectores nos proporciona por
una lado concentraciones altas que reducen la velocidad de cristalización y
por otro una mejora en la difusión de los mismos.
Además se utilizan volúmenes mínimos y tiempos cortos para paliar los
efectos nocivos de los crioprotectores.
La vitrificación aplicada a ovocitos ha resultado solventar los principales
problemas que presentaba su criopreservación.
Relación S/V muy baja, eleva riesgo de cristalización
Baja criotolerancia
Difícil distribución de los crioprotectores
Desorganización del huso meiótico
Fase equilibrado vitrificación el huso no se ve alterado, el
desmoronamiento que sufre la tubulina debido a la bajada de temperatura se
ve paliado por la deshidratación que se
que aumenta su concentración
yy
produce
VITRIFICACIÓN II
La vitrificación aplicada a ovocitos ha resultado solventar los principales
problemas que presentaba su criopreservación .
PROBLEMAS
Relación S/V muy baja, eleva riesgo de cristalización
Baja criotolerancia
Difícil distribución de los crioprotectores
Desorganización del huso meiótico
SOLUCION
Fase equilibrado vitrificación el huso no se ve alterado, el
desmoronamiento que sufre la tubulina debido a la bajada de temperatura se
ve paliado por la deshidratación que se produce que aumenta su concentración
y la polimerización del huso.
SISTEMAS DE ALMACENAMIENTO
CERRADO
CRYOTIP
Utiliza Mayor Volumen(toxicidad)
ABIERTO
CRYOTOP
Utiliza Menor Volumen
Mayor tasa Enfriamiento
Menor Exposición Medio equilibrado
Aúna calentamiento/ intercambio medios
SISTEMAS DE ALMACENAMIENTO
CERRADO
CRYOTIP
Utiliza Mayor Volumen(toxicidad)
ABIERTO
CRYOTOP
Utiliza Menor Volumen
Mayor tasa Enfriamiento
Menor Exposición Medio equilibrado
Auna calentamiento/ intercambio medios
VITRIFICACIÓN
DESVITRIFICACIÓN
ICSI
INCUBAR
G-IVF
1.30h – 2h
2PN
¿¿QUE ASPECTOS SE PODRIAN MEJORAR??
I
N
S
T
A
L
A
C
I
O
N
E
S
EMBRIOLOGÍA
LABORATORIO
LABORATORIO
PERSONAL……BIÓLOGOS,ENFERMERÍA,GINECOLOGOS PUNCION/TRANSFER
EVITAR PERFUMES,COLONIAS MAQUILLAJES…ETC ETC…
MINIMIZAR EN LO POSIBLE LA ENTRADA AL LABORATORIO
NO INTRODUCIR ELEMENTOS EXTERNOS AL LABORATORIO
TORRE CODA AERO
LABORATORIO ANDROLOGIA
Filtración y eliminación de agentes volátiles
Mayor aislamiento embriología
MACS
Columnas generan un campo magnético
producido por un soporte ferromagnético
al cual se unen las células marcadas.
ANEXINA V afinidad por FOSFATIDILSERINA,
molécula expresada por spz APOPTOTICOS.
Conjugación ANEXINA V microgotas paramagnéticas
RETENCIÓN SPZ APOPTOSIS
MACS
microgotas
paramagnéticas
Anexina V
INDICACIONES USO MACS
Pacientes mala calidad espermática
Abortos de repetición
Transferencias sin gestación
PERSONAL CLINICA