teco diagnostics

TECO DIAGNOSTICS
LÍPIDOS TOTALES
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REACTIVO PARA LÍPIDOS TOTALES:
Para la determinación cuantitativa del índice de lípidos totales en suero usando el
método colorimétrico sulfo-fosfo-vainillina.
7.- Ajuste la longitud de onda del espectrofotómetro a 530 nm y coloque el
instrumento en cero con el blanco. Lea y guarde la absorbancia de todos los
frascos (Rango de longitud de onda: 500-550)
INTRODUCCIÓN.
En la sangre, al menos el 95% de los lípidos existen en combinación con las
proteínas. Esas lipoproteínas pueden ser cuantificadas rompiendo el complejo.
Esta prueba es usada como un método de monitoreo para la hiperlipidemia 1. El
método sulfa-fosfo-vainillina (SFV) para la determinación colorimétrica en
suero de los lípidos totales fue descrita por Charbrol et.al. 2 y modificado por
varios investigadores3,4 omitiendo el acido fosfórico, acortando el tiempo de
reacción e incrementando la estabilidad del reactivo. Nuestro método esta
basado en todas estas modificaciones.
NOTAS DEL PROCEDIMIENTO:
1.- El color final es estable por al menos 60 minutos.
2.- Las muestras con valores arriba de 1300 mg/dL deben diluirse 1:1 con salina,
re-evaluarse y multiplicar los resultados finales por 2.
3.- Las muestras de suero hemolizado deberán evitarse porque causan resultados
elevados falsos.
4.- La mezcla es crucial en este método por la viscosidad del acido sulfúrico
concentrado empleado en este procedimiento.
PRINCIPIO.
Los lípidos reaccionan con el acido sulfúrico para formar iones de carbono, los
cuales subsecuentemente reaccionan con el éster de vainillin fosfato para arrojar
un complejo púrpura que es medido fotométricamente.
REACTIVOS.
1.- Reactivo de color de lípidos totales: vainillina, fosfato de potasio
monobásico, preservativo.
2.- Estándar de lípidos totales: (600 mg/dL): oleato de potasio equivalente a 600
mg/dL de lípidos totales cuando se evalúa de acuerdo a las instrucciones de este
procedimiento.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO:
El heptano, etilbenceno, tetrahidrofurano, detergentes y jabones, interfieren con
el método sulfo-fosfo-vainillina. Los alcoholes con cadenas de carbono mayores
a C2 también interfieren. La reacción es específica únicamente para compuestos
insaturados. Los ácidos grasos saturados no reaccionan. Por estas razones,
Knight et.al.5 sugirió que seria mas apropiado referirse a los resultados como un
índice de los lípidos totales, cuando el método es utilizado.
CALCULOS.
Use las lecturas de la absorbancia del estándar y los valores desconocidos para
calcular los valores de los lípidos totales como sigue:
Abs: Absorbancia.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES.
1.- Practique las precauciones normales requeridas para el manejo de todos los
reactivos de laboratorio.
2.-Evite el pipeteo con la boca.
3.- El acido sulfúrico concentrado causa quemaduras. Extreme precauciones en
el manejo de estos químicos.
ALMACENAJE Y ESTABILIDAD DEL REACTIVO.
1.- Guarde a temperatura ambiente.
2.- Todos los reactivos son estables hasta su fecha de caducidad indicada en el
frasco.
DETERIORO DEL REACTIVO.
No se use si:
1.- Apariencia física. No se use si el reactivo tiene un color café claro o aparece
turbidez, o cristales que no se disuelven rápidamente.
2.- Control de ensayos. Falla al obtener resultados precisos en el material de
control.
COLECTA Y ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA.
1.- Colecte sangre por venipunción y permita que coagule. Centrifugue y
remueva el suero. Las muestras deben ser colectadas de un paciente en ayuno
por 12 horas.
2.- El suero puede ser guardado a temperatura ambiente por 4 horas y a 2-8°C
por 48 horas. No congele el suero.
3.- Evite la hemólisis.
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO PROPORCIONADOS
Acido sulfúrico concentrado, muestra, tubos de prueba o las cubetas, reloj,
baño de calentamiento a 100 °C, suero control, espectrofotómetro.
Nota: El acido sulfúrico concentrado debe ser ACS, grado reactivo no
amarillento.
PROCEDIMIENTO MANUAL.
1.- Etiquete los tubos. Blanco, estándar, control, paciente etc.
2.- Coloque 0.010 ml (10 µL) de muestra en su respectivo tubo, al fondo del
mismo.
3.- Coloque cuidadosamente 1.0 ml de acido sulfúrico concentrado a cada tubo y
mezcle hasta que todo este disuelto.
4.- Coloque todos los tubos en el baño de calentamiento a 100°C por 20 minutos.
5.- Retírelos y colóquelos en agua helada de 3 a 5 minutos.
6.- Agregue 2.0 ml de reactivo de color de lípidos totales por las paredes del
tubo, mezcle y colóquelos en agua helada por 15 minutos. (Nota: La mezcla de
acido sulfúrico con solución acuosa genera grandes cantidades de calor, tenga
mucho cuidado)
Abs. Desconocido x Conc. Est. = Lípidos totales de la muestra
Abs. Est.
(mg/dL)
(mg/dL)
EJEMPLO
A (Paciente)= 0.45
A (Estándar)= 0.50
Concentración del estándar = 600 mg/dL.
0.45 x 600 mg/dL= 540 mg/dL.
0.50
CONTROL DE CALIDAD.
Se recomienda que se incluyan controles en cada grupo de pruebas. Se pueden
usar controles comerciales con valores establecidos para Lípidos totales. El valor
asignado del material de control se debe confirmar con la aplicación
seleccionada. Si no se pueden obtener los resultados dentro del rango apropiado
de valores, es una indicación de deterioro de reactivo, descompostura de
instrumentos o errores del procedimiento.
VALORES ESPERADOS6.
400-800 mg/dL.
CARACTERISTICAS ESPECÍFICAS DE DESEMPEÑO.
1.- Linearidad= 1300 mg/dL.
2.- Sensibilidad: Con base a un instrumento con resolución de A= 0.001, el
presente método tiene una sensibilidad de 3 mg/dL.
3.- Comparación: Un estudio de comparación realizado entre nuestro método y
otro similar resultó en una ecuación de regresión de y=1.0x – 2.76 y un
coeficiente de correlación de 0.98.
4.- Estudio de precisión.
Dentro de la prueba
Media (mg/dL)
DE
CV%
Normal 650
27
4.1%
Anormal 1130
60
5.3%
TECO DIAGNOSTICS
LÍPIDOS TOTALES
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Entre pruebas (N=20)
Media (mg/dL)
Normal 634
Anormal 1138
DE
38
74
CV%
5.9%
6.5%
REFERENCIAS.
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T. (81) 8370 7992
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