tecnica de albumina

Alcohol
Kit de Reactivos
USO:
Para la determinación cuantitativa de alcohol etílico en suero o
sangre entera. Para uso solo en Diagnostico in vitro.
RECOLECCION Y ALMACENAMIENTO DE LA
MUESTRA:
1.
IMPORTANCIA CLINICA:
El Análisis de alcohol se solicita con mayor frecuencia en los
pacientes de sala de emergencias, ayuda en el diagnóstico
diferencial de la depresión del sistema nervioso central, lo cual
puede ser debido a la intoxicación por alcohol. También se
solicita para propósitos de medicina forense.
HISTORIAL DEL MÉTODO:
2.
Un método enzimático para el alcohol etílico, usando alcohol
deshidrogenasa y NAD, fue descrito por primera vez por
Bonnishen. Algunas modificaciones y mejoras de este método
se han informado posteriormente. El presente procedimiento es
una modificación del original
procedimiento enzimático.
Debido a su velocidad y facilidad de uso, el análisis enzimático
de alcohol etílico se ha convertido bastante común en los
laboratorios. Pero debido a problemas médico-legales, los
análisis también debe ser altamente precisos. Por lo tanto, es
generalmente recomendado que los análisis para el alcohol
etílico sean confirmados por otros métodos tales como la
cromatografía de gases.
3.
PRINCIPIO:
2.
4.
El sitio de la venopunción debe ser desinfectado con
desinfectantes liquidos tales como Zefiran o Mentiolate. El
Alcohol u otros desinfectantes volátiles no deben ser
usados.
La sangre entera debe ser recolectada usando citrato,
heparina u oxalate como anticoagulante. Sin embargo, el
fluoruro usado en 5 mg/dl de sangre es el mejor
conservante. Las muestras pueden conservarse a 2-8°C
durante varios días y no siempre muestran pérdida
apreciable de alcohol.
Las muestras de suero se pueden ensayar sin
desproteinización.
La toma de muestras debe llevarse a cabo de acuerdo
con NCCLS M29- T2.5 Ningún método puede garantizar
totalmente que las muestras de sangre humana no
transmiten la infección. Por lo tanto, todas las muestras
de sangre deben ser considerados potencialmente
infecciosas.
INTERFERENCIAS:
1.
La interferencia importante en este ensayo es de alcohol
utilizado en la limpieza de la piel antes de la punción
venosa.
Una comparación de interferencia relativa por diversos
alcoholes se enumeran a continuación.
Reactivo de Alcohol (después de 5 minutos a 30oC)6
Etanol
100%
n-Butanol
38.5%
Isopropanol
6.6%
Metanol
0.0%
Etileno Glicol
1.4%
Acetona
0.0%
El Alcohol dehidrogenasa (ADH) cataliza la oxidación de etanol
a acetaldehído con la concomitante reducción de NAD a
NADH2. El cambio en absorvancia en 340 nm es directamente
proporcional a la concentración de alcohol en la muestra.
REACTIVOS:
3.
Concentraciones referentes a la reconstrucción del reactivo:
Alcohol dehidrogenasa (levadura) 200,000 u/L, NAD 2.6 mM,
Buffer, pH 9.2 + 0.1 Surfactante, conservador.
Materiales Suministrados:
PREPARACION DEL REACTIVO:
Reconstituya el reactivo con agua destilada o desionizada
específicamente en el vial etiquetado. Agite suavemente para
disolver.
ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO:
1.
2.
Almacenar el reactivo a 2-8oC.
Recontituido el reactivo es estable durante siete (7) días si
esta bien tapado y es almacenado a 2-8oC
Rectivo de Alcohol.
MATERIALES
REQUERIDOS
PROPORCIONADOS:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
PRECAUCIONES:
7.
1.
2.
3.
4.
Este reactivo es solo para diagnóstico "In Vitro".
El
reactivo de alcohol es irritante. Manejarse con
precausiones normales. En caso de contacto enjuague
con abundante agua. Consulte la hoja de seguridad (SDS)
para cualquier peligro o información de seguridad.
El reactivo no debe ser usado si la humedad ha penetrado
el vial y alguna aglomeración ha ocurrido o el reactivo
tiene una absorvancia inicial mayor de 0.500 contra un
espacio de agua a 340 nm.
Todos los especímenes y controles deben ser manejados
de acuerdo con las buenas practicas de laboratorio
usando apropiadamente precauciones como se describe
en el manual CDC/NIH, “Bioseguridad en Microbiología y
Laboratorios Biomedicos”, 2ª. Ed. 1988, HHS Publicación No.
(CDC) 88-8395.
Un lista completa de potenciales referencias puede
encontrarla en Young, et al7.
8.
PERO
NO
Instrumentos precisos de pipeteo.
Tubos de ensaye
Temporizador
Espectrofotómetro capaz de leer a 340 nm.
Baño de agua o Baño seco (30oC o 37oC)
Cloruro de sodio, 0.9% (w/v): Para preparar, disolver 0.9
gm de cloruro de sodio en agua destilada o desionizada y
llevar a un volumen de 100ml.
Solución de Acido Tricloroacetico (6.25% w/v) – si la
sangre entera se medirá
Centrifugar si la sangre entera se va a medir.
PROCEDIMIENTO (Automatizado-General)
Longitud de onda
Temperatura
Tipo de ensayo
Muestra/Radio del Reactivo
Dirección de Reacción
Tiempo de incubación
Bajo Normal
Alto Normal
340 nm
37°C o 30°C
Punto final
1:201
Aumentar
5 minutos
0 mg/dl
100 mg/dl
Los parámetros de aplicación de diversos instrumentos automatizados
están disponibles. Por favor comuníquese con el Departamento de
Servicio Técnico del fabricante para obtener información específica.
PROCEDIMIENTO (Manual)
1.
2.
3.
4.
5.
Reconstituya el reactivo de acuerdo a las instrucciones.
Pipetee 1.0 ml. de reactivo en los tubos de ensayo
requeridos.
Lleve el reactivo en los tubos a la temperatura
seleccionada (30°C es recomendable para el ensayo
manual) y añada 5 uL del estándar, pruebe y controle las
muestras en los tubos respectivos. Al tubo vacío añádale
5 uL de 0.9 de solución de cloruro de sodio.
Mezcle suavemente, incube durante 5 minutos.
Al final del periodo de incubación, lea y registre la
absorbancia de todos los tubos contra el vacío de reactivo
en 340 nm. Utilice esta absorbancia en la lectura de los
cálculos.
NOTA: Para medir muestras de sangre entera la muestra debe
ser deproteinizada como sigue:
1. Pipetear 1.8ml de Solución de ácido tricloroacético en un
tubo de centrífuga.
2. Mientras el tubo se agita, agregue lentamente 0.2ml. de la
muestra.
3. Tape el tubo y mezcle enérgicamente. Dejar reposar en la
sala de temperatura durante aproximadamente cinco
minutos.
4. Centrifugar (2.000 rpm) durante cinco minutos para
obtener un sobrenadante transparente.
5. Este
sobrenadante
se
puede
ensayar
como
anteriormente. Sin embargo, para tener en cuenta la
dilución de la muestra, se recomienda utilizar una dilución
1:10 de estándar para calibrar el ensayo.
Niveles de alcohol en sangre
0.1-0.15%
0.15-0.2%
0.2-0.25%
Basados en los resultados promedio de algunos estudios
realizados. Las concentraciones de alcohol en suero son
usualmente 16% mas altas que las muestras de sangre de las
cuales son derivadas.
DESEMPEÑO
1.
2.
3.
CALIBRACIÓN
Utilice un estándard NIST-trazable de Etanol o suero
calibrador. El procedimiento debe ser acorde a las
instrucciones de calibración de fabrica. Si el control resulta
encontrado fuera de rango, el proceso debe ser re-calibrado.
CÁLCULOS:
Etanol conc. (mg/dl) = Abs. Muestra x conc. del Estandar
Abs. Estandard
EJEMPLO: Abs. del paciente = 0.450, Abs. Estánd.= 0.500,
Concentrac. del Estandard = 100
0.450 x 100 = 90 mg/dl
0.500
_____________________
Rango de ensayo: 0 – 400 mg/dl
Comparación:
Estudio
desempeñado
en
100
especímenes comparados con un método similar de
etanol que arrojó un coeficiente de correlación de 0.999
con una ecuación de regresión de y=1.01x-1.01 El rango
de valores de la muestra de 2 a 412(Sy.x=12.84)
Precisión: Estudios de precisión fueron desempeñados
siguiendo una modificación de las directrices contenidas
en el documento de la NCCLS, EP5-T2.
Sin Prueba
Prueba a prueba
Mean.
40.3
93.47
219.8
4.
LIMITACIONES
Las concentraciones de Alcohol mayores de 400 mg/dl deben
ser diluidas 1:1 con salina normal. Multiplique los resultados
por dos para compensar durante la dilución.
S.D.
0.72
1.04
2.17
C.V.%
1.78%
1.11%
0.99%
VALORES ESPERADOS
Los pacientes que se abstienen de alcohol, no tienen niveles
detectables por la mayoría de los métodos enzimáticos o
cromatográficos. Los rangos de alcohol en sangre se muestran
con el porcentaje correspondiente a sujetos designados como
intoxicados. En un estudio con cerca de 6000 sujetos, segun
indicaciones, son muy pocas (cerca del 4%) las personas
intoxicadas en niveles de sangre de 0.05%.
Mean.
40.6
89.0
224.7
S.D.
1.36
3.27
3.71
C.V.%
3.34%
3.67%
1.65%
Sensibilidad: La sensibilidad para el reactivo de alcohol
fue investigada por lecturas en los cambios de
absorbancia en 340nm para una muestra salina, y sueros
con concentraciones conocidas. Diez replicas de cada
muestra fueron desempeñadas. Los resultados de esta
investigación indican que, en los analizadores usados, el
reactivo de alcohol mostró poco o no desviación en una
muestra cero. Además que en absorbancia los cambios
de 0.006 fueron aproximadamente equivalentes a uno
mg/dl de etanol.
REFERENCIAS:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
Bonnishen, R.K., Theorell, H., Scand. J. Clin. Lab. Invest. 3:58, 1951.
Lundquist, F., The Determination of Ethyl Alcohol in Blood and Tissues, IN
Methods of Biochemical Analysis, Vol. VII, D. Glick, Editor, Interscience, New
York, pp. 217-251, 1957.
Jones, D., Gerber, L.P., Drell, W., Clin. Chem. 16:402, 1970.
Hepler, O.E., Manual of Clinical Laboratory Methods, 4th Ed., C.C. Thomas,
Springfield, IL, p. 329, 1949.
NCCLS document “Protection of Laboratory Workers form Infectious Disease
Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue”, 2nd Ed., 1991.
Data obtained by the manufacturer.
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, AACC Press,
Washington, D.C.; Supplement No., 1991.
Dubowski, K.M., Laboratory Management 4:27, 1982.
American Medical Association: Alcohol and the Impaired Driver, 1968.
Shoemaker, M.J., Pathologist, 2:6, 1985.
NCCLS document “Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry
Devices”, 2nd Ed., 1992.
CONTROL DE CALIDAD:
Los controles son recomendados para monitorear la reacción
del ensayo. Proporcionando un examen constante del
instrumento, reactivos y técnicas. El material disponible
comercialmente con el control puede ser usado con los valores
establecidos por el alcohol.Los controles deben ser ejecutados
al menos con cada trabajo de ensayo en el cual el etanol haya
reaccionado. Se recomienda que cada laboratorio establezcan
sus propias frecuencias y control de determinaciones.
Porcentaje diagnosticado como intoxicado
63%
89%
95%
Rev. 12/09 P803-A7504-01
DISTRIBUIDO POR: