N Antiserum to Human Fibronectin

N Antiserum to Human Fibronectin
Intended Use
In vitro diagnostic reagent for the quantitative determination of fibronectin in human plasma
using the BN* Systems.
Summary and Explanation
Diminished plasma concentrations of fibronectin occur e.g. in shock, severe infections like
septicaemia, in hepatic cirrhosis, malnutrition, burns, disseminated intravascular coagulation
(DIC), acute pancreatitis as well as after trauma and major surgery. The relative drop in
plasma fibronectin concentrations serves as a severity index, with a rise in fibronectin concentration regarded as a prognostically favorable sign. The plasma fibronectin concentration
can be used to monitor nutritional status (1). Elevated plasma concentrations of fibronectin in
pregnant women indicate a risk for preeclampsia (2). The assay of fibronectin in the ascitic
fluid has been used to differentiate between malignant and benign causes of ascites (3).
Principle of the Method
Assay Protocols for BN* Systems
The assay protocols are given in the Instruction Manual and software of the instrument. All
steps are performed automatically by the system.
Establishment of the Reference Curve
Reference curves are constructed by multi-point calibration. Serial dilutions of N Protein
Standard PY are automatically prepared by the instrument using N Diluent.
The reference curves can be used for as long as the accuracy control, e.g. N/T Protein
Control PY, is reproduced within their respective confidence intervals. If a different lot of
antiserum is used, a new reference curve must be recorded.
Assay of Specimens
Samples are automatically diluted 1:20 with N Diluent and measured. If the readings obtained are outside the measuring range, the assay can be repeated using a higher or lower
dilution of the sample. Refer to BN* System’s Instruction Manual for information on repeat
measurements using other dilutions.
In an immunochemical reaction, the proteins contained in the human plasma sample form
immune complexes with specific antibodies. These complexes scatter a beam of light passed through the sample. The intensity of the scattered light is proportional to the concentration of the relevant protein in the sample. The result is evaluated by comparison with a
standard of known concentration.
Internal Quality Control
Assay N/T Protein Control PY after each establishment of a reference curve, the first opening of an antiserum vial as well as with each run of samples. The control is assayed and
evaluated as for patient samples. The assigned value and confidence interval are listed in
the Table of Assigned Values of the respective control.
Reagents
Results
The results are evaluated automatically by means of a logit-log function.
Materials provided
N Antiserum to Human Fibronectin, Code No. OUND
1 vial containing 2 mL
Limitations of the Procedure
Composition
The N Antiserum is a liquid animal serum and is produced by immunization of rabbits with
highly purified human fibronectin. Labile components are removed from the antiserum by a
special procedure. Microbial contamination is essentially excluded by filtration and addition
of sodium azide as a preservative (< 1 g/L). After solid phase immunoadsorption, the purified, specific antiserum is specially tested and adjusted for optimal suitability for use on the
BN* Systems. The antibody titer (T) is determined by radial immunodiffusion and is printed
on the vial label. The titer indicates the quantity of antigen in mg which will be precipitated in
an agarose gel by 1 mL of the corresponding antiserum.
Warnings and Precautions
1. For in vitro diagnostic use.
2. Reagents containing sodium azide must be handled with due caution:
Do not ingest or allow to contact skin or mucous membranes! Sodium azide can form
explosive azides when contacting heavy metals such as copper or lead.
Preparation of Reagents
The N Antiserum is ready-for-use as supplied and requires no additional preparation.
Storage and Stability
Shelf life at +2 to +8 °C:
see expiration date given on the label;
Stability once opened:
four weeks if stored at +2 to +8 °C securely capped immediately after each use and contamination (e.g., by microorganisms) is precluded;
During storage, N Antisera can develop precipitates or turbidity which are not caused by
microbial contamination and which do not affect their activity. In such cases, the antiserum
should be filtered prior to use. Disposable filters with a pore size of 0.45 µm are suitable for
this purpose.
Do not freeze.
On-board stability:
five days at 8 hours each or a comparable period of time (maximum 40 hours);
BN* II System: on-board stability my be extended with the use of BN* II Evaporation Stoppers (Code No. OVLE) as given in the Instruction Manual;
BN ProSpec® System: on-board stability as given in the Instruction Manual.
Materials required but not provided
BN* System
N Protein Standard PY (human), Code No. OUID
N/T Protein Control PY (human), Code No. OWSY
N Reaction Buffer, Code No. OUMS
N Diluent, Code No. OUMT
BN* II Evaporation Stoppers (optional), Code No. OVLE
Other materials and supplies as described in the respective BN* System Instruction Manual.
Specimens
Suitable samples are both EDTA and citrated human plasma, as fresh as possible (stored
no more than 8 days at +2 to +8 °C). Samples can be stored at below -20 °C for up to 1 year
if they are frozen within 24 hours after collection and if repeated freeze-thaw cycles are
avoided. Lipemic samples, or frozen specimens which became turbid after thawing must be
clarified by centrifugation (10 minutes at approximately 15 000 x g) prior to testing. The
citrate solution dilutes citrated plasmas by 17 % on average. Heparinized plasma is not
suitable for the fibronectin assay.
Procedure
Notes
1. Consult your BN* System Instruction Manual for details regarding operation of the instrument.
2. The reagents must not be used beyond the expiry date.
3. Allow reagents and samples to equilibrate to room temperature (+15 to +25 °C) before
use on the BN*A/BN* 100 System. This equilibration step is not required prior to testing
on the BN* II or BN ProSpec® System.
OUND G09 C0540 (445) H
1
Turbidity and particles in the samples may interfere with the determination. Therefore, samples containing particles must be centrifuged prior to testing.
Due to technical manufacturing reasons and/or aged samples, the results obtained for control samples and interlaboratory survey samples may differ depending on the assay method
used. It may therefore be necessary to assess these results in relation to method-specific
target values.
Expected Values
The following reference interval applies for citrated plasma samples from healthy adults:
Fibronectin
0.25 - 0.4 g/L
Nevertheless, each laboratory should determine its own reference intervals since values
may vary depending on the individual population studied.
Specific Performance Characteristics
Sensitivity and Measuring Range
The sensitivity of the assay is established by the lower limit of the reference curve and
depends therefore upon the concentration of the protein in the N Protein Standard PY. Typical measuring ranges are given in the BN* System’s Instruction Manual.
Specificity
The N Antiserum is specific for the respective protein.
Precision
The following coefficients of variation (CV) were obtained with the N Antiserum to Human
Fibronectin on the BN* System:
Intra-assay
(n=30)
Mean Value
[g/L]
Protein
Fibronectin
0.22
CV
[%]
Inter-assay
(n=10)
Mean Value
[g/L]
1.8
0.22
CV
[%]
1.5
Method Comparison
Plasma samples were assayed with the N Antiserum to Human Fibronectin on the BN*
System (y) and radial immunodiffusion (x) (NOR Partigen**). Correlation of the results yielded the following data.
Protein
Number
of samples
Linear Regression
Coefficient
of Correlation
46
y (BN*) = 0.96 x (RID) + 0.01 g/L
0.93
Fibronectin
Note
The values cited for specific performance characteristics of the test represent typical results
and are not to be regarded as specifications for the N Antiserum to Human Fibronectin.
Bibliography
1. Sandberg L, VanReken D, Waiwaiku K, et al. Plasma fibronectin levels in acute and
recovering malnourished children. Clin Physiol Biochem 1985; 3: 257-64.
2. O’Brien WF. The prediction of preeclampsia. Clin Obstet Gynecol 1992; 35: 351-64.
3. Colli A, Buccino G, Cocciolo M, et al. Diagnostic accuracy of fibronectin in the differential
diagnosis of ascites. Cancer 1986; 58: 2489-93.
BN ProSpec is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in the USA, Germany and other countries.
* BN is a trademark of Dade Behring Marburg GmbH in the USA.
** Partigen is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in Germany and
other countries.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
USA Distributor:
Edition October 2002
2.5th - 97.5th perzentile
Protein
Dade Behring Inc.
Newark, DE 19714 U.S.A.
N Antiserum gegen HumanFibronectin
Anwendungsbereich
In-vitro-Diagnosticum zur quantitativen Bestimmung von Fibronectin in Humanplasma mit
den BN* Systemen.
Diagnostische Bedeutung
Erniedrigte Konzentrationen von Fibronectin im Plasma treten z. B. bei Schock, schweren
Infekten, wie Sepsis, bei Leberzirrhose, Mangelernährung, Verbrennungen, Verbrauchskoagulopathie (DIC), akuter Pankreatitis sowie nach Traumen und schweren Operationen
auf. Der relative Konzentrationsabfall ist ein Index des Schweregrades, wobei ein Anstieg
der Fibronectin-Konzentration als prognostisch günstig angesehen wird. Die FibronectinKonzentration im Plasma kann zur Überwachung des Ernährungszustandes herangezogen
werden (1). Erhöhte Plasmakonzentrationen von Fibronectin bei Schwangeren sind ein Risikoindikator für eine Präeklampsie (2). Die Bestimmung von Fibronectin in Ascitesflüssigkeit ist zur Differenzierung von malignen und benignen Ursachen des Ascites eingesetzt
worden (3).
Prinzip der Methode
Die im menschlichen Plasma enthaltene Proteine bilden in einer immunchemischen Reaktion mit spezifischen Antikörpern Immunkomplexe, an denen eingestrahltes Licht gestreut
wird. Die Intensität des Streulichts ist abhängig von der Konzentration des jeweiligen Proteins in der Probe. Die Auswertung erfolgt durch Vergleich mit einem Standard bekannter
Konzentration.
Reagenzien
Inhalt der Handelspackung
N Antiserum gegen Human-Fibronectin, Bestell-Nr. OUND
1 Flasche mit 2 ml
Zusammensetzung
Das N Antiserum ist ein flüssiges, tierisches Serum und wird durch Immunisierung von Kaninchen mit hochgereinigtem humanem Fibronectin hergestellt. Durch ein besonderes Stabilisierungsverfahren werden labile Bestandteile aus dem Antiserum entfernt. Mikrobielle
Verunreinigungen werden durch Filtration und den Zusatz von Natriumazid (< 1 g/l) als Konservierungsmittel weitgehend ausgeschlossen. Das mittels Festphasenimmunadsorption
gereinigte, spezifische Antiserum wird nach besonderer Prüfung so eingestellt, daß eine
optimale Eignung für die Verwendung in den BN* Systemen gewährleistet ist. Der Antikörper-Titer (T) wird in der radialen Immundiffusion ermittelt und ist auf dem Flaschenetikett
ausgedruckt. Er gibt an, wieviel mg des Antigens von 1 ml des Antiserums in einem Agarosegel präzipitiert werden.
Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen
1. Nur zur in-vitro-diagnostischen Anwendung.
2. Beim Umgang mit Natriumazid-haltigen In-vitro-Diagnostica ist zu beachten:
Verschlucken und Kontakt mit Haut oder Schleimhäuten vermeiden. Natriumazid kann
mit Schwermetallen, wie Kupfer oder Blei, explosive Azide bilden.
Vorbereitung der Reagenzien
Das N Antiserum ist gebrauchsfertig und kann ohne weitere Vorbehandlung eingesetzt werden.
Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen
Lagerungsdauer bei +2 bis +8 °C:
die Haltbarkeit ist auf dem Etikett angegeben;
Stabilität nach Öffnen:
4 Wochen, sofern unmittelbar nach Gebrauch wieder dicht verschlossen bei +2 bis +8 °C
gelagert und eine Kontamination (z. B. durch Mikroorganismen) vermieden wird;
N Antisera können bei Lagerung Ausflockungen oder Trübungen zeigen, die nicht durch
mikrobielle Kontamination verursacht sind und die die Aktivität in keiner Weise beeinträchtigen. In solchen Fällen sollten die Antisera vor Gebrauch filtriert werden. Dazu eignen sich
Einwegfilter mit einem Porendurchmesser von 0,45 µm.
Die Reagenzien dürfen nicht eingefroren werden.
Stabilität auf den BN* Systemen:
5 Tage mit jeweils 8 Stunden, oder ein vergleichbarer Zeitraum (maximal 40 Stunden);
BN* II System: die erweiterte Stabilität der Reagenzien bei Verwendung von BN* II Evaporation Stoppers (Bestell-Nr. OVLE) ist der Bedienungsanleitung zu entnehmen;
BN ProSpec®: die Stabilität der Reagenzien ist der Bedienungsanleitung zu entnehmen.
Zusätzlich benötigte Materialien
BN* System
N Protein-Standard PY (human), Bestell-Nr. OUID
N/T Protein-Kontrolle PY (human), Bestell-Nr. OWSY
N Reaktionspuffer, Bestell-Nr. OUMS
N Diluens, Bestell-Nr. OUMT
BN* II Evaporation Stoppers (wahlweise), Bestell-Nr. OVLE
Verbrauchsmaterial und Ausrüstung wie in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme
beschrieben.
Untersuchungsmaterial
Zur Messung sollen möglichst frische (max. 8 Tage bei + 2 bis + 8 °C aufbewahrte) EDTAoder Citratplasmaproben verwendet werden. Werden Proben innerhalb von 24 Stunden
nach Entnahme tiefgefroren, so ist eine Lagerung unterhalb -20 °C bis zu 1 Jahr möglich,
wenn wiederholtes Auftauen und Einfrieren vermieden wird. Lipämische Proben oder eingefrorene Proben, die nach dem Auftauen trüb sind, müssen vor der Bestimmung durch Zentrifugation (10 min bei ca. 15 000 x g) geklärt werden. Citratplasmen sind durch die Citratlösung um durchschnittlich 17 % verdünnt. Heparinplasma ist zur Fibronectin-Bestimmung
nicht geeignet.
Testdurchführung
Hinweise
1. Einzelheiten zur Bedienung der BN* Systeme sind der entsprechenden Bedienungsanleitung zu entnehmen.
2. Die Reagenzien dürfen nach dem angegebenen Verfalldatum nicht mehr verwendet werden.
3. Reagenzien und Proben sollen vor der Messung am BN*A/BN*100 System Raumtemperatur (+15 bis +25 °C) erreicht haben. Am BN* II/BN ProSpec® System können auch bei
+2 bis +8 °C gelagerte Reagenzien und Proben direkt zur Bestimmung eingesetzt werden.
OUND G09 C0540 (445) H
2
Ausgabe Oktober 2002
Assay-Protokolle an den BN* Systemen
Die Assay-Protokolle sind in der Bedienungsanleitung sowie der Software des jeweiligen
Gerätes enthalten. Alle Schritte werden automatisch vom System durchgeführt.
Erstellung der Referenzkurve
Referenzkurven werden über eine Mehrpunktkalibrierung aufgenommen. Für die Erstellung
werden automatisch Verdünnungsreihen des N Protein-Standard PY mit N Diluens hergestellt.
Die Referenzkurven können so lange verwendet werden, wie Richtigkeitskontrollen, z. B. N/T
Protein-Kontrolle PY, innerhalb der jeweiligen Vertrauensbereiche wiedergefunden werden.
Bei Verwendung einer anderen Antiserum-Charge muß eine neue Referenzkurve aufgenommen werden.
Messung der Patientenproben
Proben werden automatisch 1 : 20 mit N Diluens verdünnt und gemessen. Bei Meßwerten,
die außerhalb des Meßbereichs liegen, kann die Messung aus einer höheren oder niedrigeren Probenverdünnung wiederholt werden. Wiederholungsmessungen aus weiteren Probenverdünnungen sind in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme beschrieben.
Interne Qualitätskontrolle
Die N/T Protein-Kontrolle PY sollte nach jeder Erstellung einer Referenzkurve, nach erstmaligem Öffnen einer Antiserumabfüllung sowie bei jeder Serie von Proben eingesetzt werden.
Die Kontrolle wird im Ansatz und bei der Auswertung wie Patientenproben behandelt. Der
Sollwert und Vertrauensbereich ist der Tabelle der Sollwerte der entsprechenden Kontrolle
zu entnehmen.
Berechnung der Analysenergebnisse
Die Auswertung erfolgt automatisch mittels einer Logit-Log-Funktion.
Einschränkungen der Testdurchführung
Trübungen und Partikel in den Proben können die Bestimmung stören. Deshalb sollten Proben, die Partikel enthalten, vor der Bestimmung zentrifugiert werden.
Für Kontroll- und Ringversuchsproben können aufgrund der technischen Herstellung bzw.
gealterter Proben unterschiedliche Ergebnisse in Abhängigkeit von der verwendeten Bestimmungsmethode resultieren. Es kann daher notwendig sein, die Bewertung dieser Ergebnisse an methodenspezifischen Zielwerten vorzunehmen.
Erwartete Werte
Für Citratplasma gesunder erwachsener Probanden gilt folgender Referenzbereich:
Protein
2,5. - 97,5. Perzentile
Fibrionectin
0,25 - 0,4 g/l
Darüber hinaus sollte jedes Labor seine eigenen Referenzbereiche ermitteln, da diese vielen Einflußgrößen unterliegen, die für jedes untersuchte Kollektiv verschieden sein können.
Leistungsmerkmale der Teste
Empfindlichkeit und Meßbereich
Die Empfindlichkeit der Bestimmung wird durch die untere Grenze der Referenzkurve festgelegt und hängt damit von der Konzentration des Proteins im N Protein-Standard PY ab.
Typische Meßbereiche sind in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme angegeben.
Spezifität
Das N Antiserum ist spezifisch für das jeweilige Protein.
Präzision
Mit dem N Antiserum gegen Human-Fibronectin wurden am BN* System folgende Variationskoeffizienten (VK) ermittelt:
Intra-Assay
(n=30)
Protein
Inter-Assay
(n=10)
Mittelwert
[g/l]
VK
[%]
Mittelwert
[g/l]
VK
[%]
0,22
1,8
0,22
1,5
Fibronectin
Methodenvergleich
Es wurden Plasmaproben mit dem N Antiserum gegen Human-Fibronectin am BN* System
(y) gemessen und vergleichend dazu mit der radialen Immundiffusion (x) (NOR-Partigen**)
bestimmt. Die Korrelation der Ergebnisse lieferte folgende Daten:
Protein
Fibronectin
Anzahl
der Proben
lineare Regression
Korrelationskoeffizient
46
y (BN*) = 0,96 x (RID) + 0,01 g/l
0,93
Anmerkung
Die angegebenen Werte für die Leistungsmerkmale der Teste stellen typische Ergebnisse dar
und sind nicht als Spezifikation für das N Antiserum gegen Human-Fibronectin anzusehen.
Literatur
Siehe Seite 1.
BN ProSpec ist eine eingetragene Marke der Dade Behring Marburg GmbH in den USA,
Deutschland und anderen Ländern.
* BN ist eine Marke der Dade Behring Marburg GmbH in den USA.
** Partigen ist eine eingetragene Marke der Dade Behring Marburg GmbH in Deutschland
und anderen Ländern.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
N Antisérum antiFibronectine humaine
Domaine d'utilisation
Réactif pour le dosage in vitro de la fibronectine dans le plasma humain à l'aide des systèmes BN*.
Intérêt diagnostique
Une diminution de la concentration de fibronectine dans le plasma peut apparaître en cas
de choc, d’infection grave comme une septicémie, de cirrhose du foie, de déficit alimentaire,
de brûlure, de coagulopathie de consommation (CIVD), de pancréatite aiguë, ainsi que de
traumatisme ou d’opération grave. La diminution relative de la concentration constitue un
indice de gravité de la maladie, alors qu’une augmentation de la concentration est considérée comme favorable pour le pronostic. La concentration de fibronectine dans le plasma
peut être utilisée pour la surveillance des états alimentaires (1). Une augmentation de la
concentration plasmatique de fibronectine chez la femme enceinte constitue un indicateur
de risque de prééclampsie (2). Le dosage de la fibronectine dans le liquide ascitique est
utilisé pour différencier une origine maligne d’une origine bénigne de l’ascite (3).
Protocoles du test sur les systèmes BN* :
Les protocoles sont indiqués dans le manuel d’utilisation et la dernière version du logiciel de
chaque appareil. Toutes les étapes sont effectuées automatiquement par le système.
Etablissement de la courbe d'étalonnage :
Les courbes d'étalonnage sont effectuées selon un étalonnage en plusieurs points. Les
séries de dilutions du N Standard Protéines PY sont établies automatiquement avec le N
Diluant.
Les courbes d'étalonnage peuvent être utilisées tant que les contrôles d'exactitude, par ex.
le N/T Contrôle Protéines PY, est retrouvé à l'intérieur de son domaine de confiance. Une
nouvelle courbe d'étalonnage doit être établie à chaque changement de lot d'antisérum.
Mesure des échantillons de patients :
Les échantillons sériques sont dilués automatiquement au 1/20 avec le N Diluant, puis mesurés. Si des valeurs sortent du domaine de mesure, les échantillons peuvent être retestés
à une dilution plus basse ou plus élevée. Le protocole pour retester les échantillons à une
dilution différente est décrit dans les manuels d’utilisation des systèmes BN*.
Contrôle de qualité interne
Tester le N/T Contrôle Protéines PY à chaque changement de courbe d’étalonnage ou de
flacon d’antisérum, ainsi qu’à chaque nouvelle série d’échantillons sériques ou plasmatiques. Traiter le contrôle comme un échantillon de patient, aussi bien dans le test que pour
l’exploitation des résultats. Les valeurs théoriques ainsi que les domaines de confiance sont
indiqués dans le tableau des valeurs théoriques.
Calcul des résultats d'analyse
L'exploitation des résultats est effectuée automatiquement à l'aide d'une fonction log-logit.
Principe de la méthode
Dans une réaction immunochimique, les protéines contenues dans le plasma humain forment avec les anticorps spécifiques des complexes immuns sur lesquels est envoyée une
lumière. L’intensité de la lumière dispersée est fonction de la concentration dans
l’échantillon de la protéine recherchée. L’exploitation se fait par rapport à un standard de
concentration connue.
Limites du test
Réactif
Les échantillons troubles ou contenant des particules peuvent perturber le test. Dans ce
cas, les centrifuger avant le test. Les échantillons testés dans le cadre d'un contrôle national ou d'une étude multicentrique peuvent donner des résultats différents selon la méthode
de dosage utilisée. Il peut donc être nécessaire de procéder à l'exploitation des résultats
selon les valeurs-cibles spécifiques à la méthode utilisée.
Conditionnement :
N Antisérum anti-Fibronectine humaine, code OUND
1 flacon de 2 ml
Domaine de référence pour le plasma citraté de sujets adultes sains :
Valeurs normales
Composition
Le N Antisérum est un sérum liquide, d'origine animale, obtenu par immunisation de lapins
avec de la fibronectine humaine hautement purifiée. Un procédé spécial de stabilisation
permet d'éliminer les éléments labiles des antisérums. Une filtration et l'addition d'azide de
sodium (< 1 g/l) comme agent de conservation excluent pratiquement toute contamination
bactérienne.
L’antisérum spécifique, purifié par immunoadsorption en phase solide, est préparé de façon
à garantir des propriétés optimales pour une utilisation sur les systèmes BN*.
Le titre d'anticorps (T), déterminé par immunodiffusion radiale, est imprimé sur l'étiquette du
flacon. Il indique le nombre de mg d'antigène précipités par 1 ml d'antisérum dans un gel
d'agarose.
Mises en garde et précautions d'emploi
1. Ce réactif ne doit être utilisé que pour un usage in vitro.
2. Les réactifs contenant de l'azide de sodium doivent être manipulés avec précaution :
ne pas avaler et éviter tout contact avec la peau et les muqueuses ! Mis en contact avec
des métaux lourds comme le cuivre ou le plomb, l'azide de sodium peut former un acide
explosif.
Préparation des réactifs
Le N Antisérum est prêt à l'emploi et peut être utilisé sans prétraitement.
Stabilité et conditions de conservation
Conservation à +2/+8°C :
La date de péremption est indiquée sur l’étiquette.
Stabilité après ouverture :
4 semaines, à condition de bien refermer les flacons immédiatement après emploi, de les
replacer à +2/+8°C, et d’éviter toute contamination (par ex. microbienne). Les N Antisérums
peuvent devenir troubles ou présenter une floculation, phénomènes qui n’indiquent pas une
contamination microbienne et qui n’influencent en aucune façon leur activité. Dans ces caslà, les filtrer à l’aide d’un filtre à usage unique à pores de 0,45 µm de diamètre.
Ne pas les congeler.
Stabilité sur les systèmes BN* :
5 jours à raison de 8 heures par jour, ou durée équivalente (maximum 40 heures).
BN* II : l’utilisation de bouchons anti-évaporation (code OVLE) permet d’allonger la stabilité
des réactifs ; se reporter au manuel d’utilisation du système.
BN ProSpec® : pour la stabilité des réactifs, se reporter au manuel d’utilisation du système.
Matériel et autres réactifs nécessaires
système BN*
N Standard Protéines PY (humain), code OUID
N/T Contrôle Protéines PY (humain), code OWSY
N Tampon de réaction, code OUMS
N Diluant, code OUMT
Bouchons anti-évaporation pour BN* II, code OVLE (utilisation facultative)
Consommables et matériels complémentaires nécessaires selon les manuels d’utilisation
des systèmes BN*.
Utiliser des échantillons plasmatiques citratés ou prélevés sur EDTA, de préférence frais
(conservés 8 jours maximum à +2/+8°C). Ils peuvent également être conservés à une température inférieure à –20°C à condition de les congeler dans les 24 heures qui suivent leur
prélèvement ; ils se conservent alors 1 an ; ne les congeler qu’une seule fois. Les échantillons lipémiques ou devenus troubles après congélation doivent être clarifiés par centrifugation (10 mn à env. 15 000 g) avant utilisation. Les plasmas citratés se trouvent dilués à
environ 17% par la solution citrate. Ne pas utiliser de plasmas héparinés pour le dosage de
la fibronectine.
Réalisation du test
Remarques :
1. Pour plus de détails concernant l’utilisation des systèmes BN*, se reporter au manuel
d’utilisation de l’appareil.
2. Ne pas utiliser les réactifs au-delà de leur date de péremption.
3. Porter réactifs et échantillons à la température ambiante (+15/+25°C) avant leur analyse sur
le système BN*A ou BN* 100. Sur le système BN* II ou BN ProSpec®, ils peuvent être testés
directement à +2/+8°C.
3
2,5ème - 97,5ème percentiles
fibronectine
0,25 - 0,4 g/l
Il est toutefois recommandé à chaque laboratoire d’établir ses propres valeurs de référence,
dans la mesure où les domaines de référence sont soumis à de nombreux facteurs
d’influence qui peuvent varier selon le collectif étudié.
Caractéristiques des tests
Domaine de mesure et sensibilité
La sensibilité du dosage est déterminée par la limite inférieure de la courbe d’étalonnage, et
dépend donc de la concentration en protéines du N Standard protéines PY.
Les domaines de mesure types sont indiqués dans les manuels d’utilisation des systèmes
BN*.
Spécificité
Les N Antisérums sont spécifiques de la protéine indiquée.
Précision
Le N Antisérum anti-Fibronectine humaine a donné les coefficients de variation (CV) suivants sur les systèmes BN* :
protéine
intra-essai
(n = 30)
valeur moyenne
[g/l]
fibronectine
0,22
CV
[%]
inter-essais
(n = 10)
valeur moyenne
[g/l]
1,8
0,22
CV
[%]
1,5
Comparaison avec une autre méthode
Des échantillons plasmatiques ont été testés en parallèle, d’une part sur le système BN*
avec le N Antisérum anti-Fibronectine humaine (y), et d’autre part par immunodiffusion radiale (NOR-Partigen**) (x). La corrélation des résultats a donné les valeurs suivantes :
protéine
nombre de
échantillons
régression linéaire
coefficient
de corrélation
fibronectine
46
y (BN*) = 0,96 x (IDR) + 0,01 g/l
0,93
Remarque :
Les valeurs indiquées comme caractéristiques des tests représentent des résultats types, et ne doivent pas être considérées comme des spécifications de N Antisérum antiFibronectine humaine.
Littérature
Voir page 1.
BN ProSpec est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH aux USA, en Allemagne et dans d’autres pays.
Echantillons à tester
OUND G09 C0540 (445) H
Protéine
Edition Octobre 2002
* BN est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH aux Etats-Unis.
** Partigen est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH en Allemagne et
dans d’autres pays.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
N Antisiero anti fibronectina
umana
Settori d'impiego
Diagnostici in-vitro per la determinazione quantitativa della fibronectina nel plasma umano
con i sistemi BN*.
Significato diagnostico
Concentrazioni ridotte di fibronectina nel plasma si riscontrano in caso di shock, gravi infezioni quali la sepsi, nella cirrosi epatica, ipotressia, ustioni, coagulopatie da consumo (CID),
pancreatite acuta, nonché dopo traumi e gravi interventi chirurgici.
La diminuzione relativa della concentrazione è considerata un valido indice della gravità
della malattia, mentre l'aumento della concentrazione di fibronectina ha un significato prognostico favorevole. La concentrazione della fibronectina nel plasma può essere utilizzata
per il monitoraggio dello stato nutrizionale(1). Aumentate concentrazioni di fibronectina nel
plasma nelle gestanti sono indice di rischio di pre-eclampsia(2). La determinazione della
fibronectina nel liquido ascitico è stata utilizzata per differenziare cause maligne di ascite da
quelle benigne(3).
Le proteine presenti nel plasma umano formano in una reazione immunochimica con gli
anticorpi specifici degli immunocomplessi, che provocano una dispersione della luce incidente. L’intensità della luce dispersa dipende dalla concentrazione della corrispondente
proteina nel campione. La valutazione quantitativa avviene per confronto con uno standard
a concentrazione nota.
Reagenti
Contenuto della confezione
N-antisiero anti-fibronectina umana, codice UND
1 Flacone da 2 mL
Valutazione dei campioni in esame
I campioni di siero di paziente vengono diluiti automaticamente 1:20 con l’N Diluente e
quindi analizzati. Se le letture ottenute si trovano al di fuori dell’ambito di misura, la misura
può essere ripetuta usando una diluizione superiore o inferiore del campione. Per informazioni sulla ripetizione della misurazione con altre diluizioni consultare il manuale d’uso dei
sistemi BN*.
Controllo di qualità interno
L’N/T Controllo Proteine PY deve essere analizzato dopo ogni preparazione delle curve di
riferimento, dopo aver iniziato un nuovo flacone di antisiero e con ogni serie di campioni di
siero o plasma. I controlli sono analizzati e valutati allo stesso modo dei campioni. I valori
nominali e gli ambiti fiduciali sono indicati nella tabella dei valori nominali del relativo controllo.
Limitazioni della esecuizione del test
I campioni torbidi o contenenti particelle possono interferire con la determinazione. Pertanto
i campioni contenenti particelle devono essere centrifugati prima di essere analizzati.
Per ragioni tecniche legate alla produzione e/o all’invecchiamento dei campioni, i risultati
ottenuti con i sieri di controllo e con i sieri per il controllo di qualità inter-laboratori possono
differire in funzione del metodo utilizzato. Può quindi rendersi necessario valutare i risultati
ottenuti facendo riferimento a valori specifici per i diversi metodi utilizzati.
Valori attesi
Il seguente intervallo di riferimento si applica ai campioni di plasma citratato di adulti sani:
Composizione
L'N antisiero è un siero animale liquido. Viene prodotto per immunizzazione di conigli con
fibronectina umana altamente purificata. Le componenti labili vengono rimosse dagli antisieri con un particolare processo di stabilizzazione. Contaminazioni microbiche vengono
escluse mediante filtrazione sterile ed aggiunta di sodio azide (< 1 g/L) come conservante.
L'antisiero specifico, purificato tramite immunoadsorbimento in fase solida, dopo particolari
verifiche viene trattato in modo tale da assicurare un impiego ottimale con i sistemas BN*.
Il titolo anticorpale (T) viene determinato con il metodo della immunodiffusione radiale ed è
riportato sull'etichetta del flacone. Esso indica quanti mg di antigene vengono precipitati, in
gel di agarosio, da 1 mL di antisiero.
Avvertenze e precauzioni
1. Solo per uso diagnostico in-vitro.
2. Quando si impiegano diagnostici in-vitro contenenti sodio azide osservare le seguenti
precauzioni: non ingerire ed evitare contatti con la cute e le mucose!
La sodio azide a contatto con metalli come rame o piombo può formare azidi esplosive.
Preparazione dei reagenti
L'N Antisiero è pronto per l'uso e può essere utilizzato senza alcun pretrattamento.
Conservazione e validità
Stabilità a +2/+8 °C:
vedere la data di scadenza sull’etichetta
Stabilità dopo apertura:
4 settimane, se conservati ben chiusi a+ 2/+ 8°C, evitando contaminazioni (ad es. da microrganismi).
Durante la conservazione, gli ‘N Antisieri possono presentare intorbidamenti o flocculazioni
che non dipendono da contaminazioni microbiche e che non influenzano in alcun modo
l’attività. In questo caso è necessario filtrare l’antisiero prima dell’uso. A questo scopo sono
disponibili filtri monouso con pori di 0,45 µm di diametro. Non congelare.
Stabilità sui sistemi BN*:
5 giorni per 8 ore al giorno o periodo di tempo equivalente (massimo 40 ore);
Sistema BN* II: la stabilità dei reagenti può essere aumentata usando gli Evaporation Stoppers per BN* II (cod. VLE), come indicato nel manuale d’uso.
Sistema BN ProSpec®: la stabilità dei reagenti è indicata nel manuale d’uso.
Altro materiale necessario
sistema BN*
N-Plasma proteine standard PY (umano), codice UID
N/T-Plasma di controllo proteine PY (umano), codice WSY
N-Tampone di reazione, codice UMS
N-Dilluente, codice UMT
Evaporation Stoppers per BN* II (opzionale), codice VLE
Materiale di consumo ed accessori come descritto nei manuali d’uso dei sistemi BN*.
Proteina
Fibronectina
2,5 - 97,5 Percentile
0,25 - 0,4 g/L
Inoltre, ogni laboratorio dovrebbe determinare i propri intervalli di riferimento, poiché i valori
possono risultare diversi a seconda della popolazione esaminata.
Rendimento dei test
Ambito di misura e sensibilità
La sensibilità del test viene determinata dal limite inferiore della curva di riferimento e dipende quindi dalla concentrazione delle proteine nell’ N Proteine Standard PY. Gli ambiti di
misura tipici sono riportati nel manuale d’uso dei sistemi BN*.
Specificità
Gli N antisieri sono specifici per la rispettiva proteina.
Precisione
I seguenti coefficienti di variazione (CV) sono stati ottenuti con l’N-Antisiero anti-fibronectina
umana sul sistema BN*:
Proteina
Fibronectina
Intra-serie
(n = 30)
Valore medio
[g/L]
0,22
CV
[%]
1,8
Inter-serie
(n = 10)
Valore medio
[g/L]
0,22
CV
[%]
1,5
Confronto tra i metodi
I campioni di plasma sono stati analizzati con l’N Antisiero anti fibronectina umana sul sistema BN* (y) e con un metodo di immunodiffusione radiale (x) (NOR-Partigen**). La correlazione dei risultati è la seguente:
Proteina
Fibronectina
Nr.dei
campioni
Regressione lineare
Coefficiente
di correlazióne
46
y (BN*) = 0,96 x (RID) + 0,01 g/L
0,93
Nota
I valori indicati come caratteristiche del test rappresentano dei risultati tipici e non devono
essere considerati come specifiche per gli N Antisiero anti fibronectina umana.
Bibliografia
Vedi pagina 1.
BN ProSpec è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH negli Stati Uniti,
Germania e altri paesi.
Campioni in esame
E’ possibile utilizzare sia campioni con EDTA che plasma umano citratato, possibilmente
freschi (conservati per un massimo di 8 giorni a +2/+8°C). I campioni possono essere conservati a – 20°C per 1 anno se vengono congelati entro 24 ore dal prelievo e se sono stati
evitati ripetuti scongelamenti. I campioni lipemici o congelati, che dopo scongelamento si
presentassero torbidi, devono essere chiarificati mediante centrifugazione (10 min. per ca.
15.000 x g) prima del test. La soluzione di citrato diluisce il plasma citratato in media del
17%. Il plasma eparinizzato non è indicato per il test di fibronectina.
Esecuzione del test
Nota:
1. Per informazioni dettagliate fare riferimento al manuale d’uso dei sistemi BN*.
2. Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza indicata.
3. Prima della determinazione sul sistema BN*A/BN* 100, portare i reagenti ed i campioni a
temperatura ambiente (+15/+25°C). Sul sistema BN* II / BN ProSpec® i reagenti possono
essere analizzati direttamente a +2/+8°C.
4
Allestimento della curva di riferimento
Le curve di riferimento vengono allestite mediante una calibrazione a più punti. Per la loro preparazione vengono realizzate automaticamente diluizioni seriali dell'N Plasma proteine standard PY
con l'N diluente.
Le curve di calibrazione sono valide finchè i controlli di accuratezza, ad es. N/T Controllo per
proteine PY, rimangono entro i rispettivi ambiti fiduciali. Quando si utilizza un nuovo lotto di
antisiero si deve allestire una nuova curva di riferimento.
Calcolo dei risultati
La valutazione viene eseguita automaticamente mediante una funzione logit-log.
Principio del metodo
OUND G09 C0540 (445) H
Schema di esecuzione del test con i sistemi BN*
Gli schemi per l’esecuzione del test sono riportati nei manuali d’uso e nel software dello
strumento. Tutte le fasi sono eseguite automaticamente dallo strumento.
Edizione Ottobre 2002
* BN è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH negli Stati Uniti.
** Partigen è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH in Germania e negli
altri Paesi.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
N Antisuero contra la
fibronectina humana
Procedimiento
Campos de aplicación
Reactivo de diagnóstico in-vitro para la determinación cuantitativa de fibronectina en plasma humano usando los sistemas BN*.
Significado diagnóstico
Bajas concentraciones de fibronectina en el plasma aparecen por ej., en shock, infecciones
graves como sepsis, en cirrosis hepáticas, deficiencias nutricionales, quemaduras, coagulopatías de consumo (CID), pancreatitis aguda, así como también después de traumatismos o de operaciones importantes. El descenso relativo de la concentración es un índice
del estado de gravedad, por lo que un aumento en la concentración de fibronectina debe
ser considerado de pronóstico favorable. La concentración de fibronectina en plasma se
puede emplear para el control del estado nutricional (1). Concentraciones elevadas de fibronectina en el plasma de mujeres embarazadas son un indicador del riesgo de preeclampsia (2). La determinación de fibronectina en líquido ascítico se ha utilizado para la
diferenciación de las causas malignas y benignas de la ascitis (3).
Principio del método
Las proteínas contenidas en el plasma humano forman en una reacción inmunoquímica
con anticuerpos específicos, inmunocomplejos los cuales pueden dispersar un rayo de luz
incidente. La intensidad de la luz dispersada depende de la concentración de la correspondiente proteína en la muestra. La valoración se hace por comparación con un estándar de
concentración conocida.
Reactivos
Contenido del envase comercial:
N Antisuero contra fibronectina humana, N° de pedido OUND
1 frasco con 2 ml
Composición
El N antisuero es un suero líquido de origen animal, producido mediante inmunización de
conejos con fibronectina humana de alta pureza. Los componentes lábiles del antisuero se
retiran utilizando un proceso especial de estabilización. Las impurezas microbiológicas se
excluyen por filtración estéril y por la adición de azida de sodio (< 1 g/l) como medio de
conservación.
El antisuero específico, purificado mediante inmunoadsorción de fase sólida, después de
someterse a pruebas especiales se ajusta de tal forma que se obtenga una óptima capacidad al usarse en el sistema BN*.
El título del anticuerpo (T) se obtiene por inmunodifusión radial y viene dado en la etiqueta.
Este valor indica cuantos mg del antígeno por 1 ml del antisuero se pueden precipitar en un
gel de agarosa.
Advertencias y medidas de seguridad
1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro.
2. En el manejo de diagnósticos in-vitro que contengan azida sódica debe observarse la
siguiente regla:
No ingerir y evitar contacto con la piel y mucosas. La azida sódica puede formar azidas
explosivas con metales como cobre y plomo.
Preparación de reactivos
El N antisuero viene listo para ser utilizado y puede aplicarse sin ningún otro tratamiento
preliminar.
Estabilidad y almacenaje
Tiempo de conservación entre +2 y +8°C:
La fecha de vencimiento viene dada en la etiqueta;
Estabilidad después de abierto:
4 semanas siempre que los frascos después de ser empleados se mantengan entre +2 y
+8°C, perfectamente cerrados y se eviten contaminaciones (por ej., por microorganismos);
Los N antisueros pueden presentar durante el almacenamiento floculación o turbidez que
no son ocasionadas por contaminación microbiológica y que no influyen de manera alguna
en su actividad.En estos casos los antisueros deben ser filtrados, antes de ser usados.
Para esto son apropiados filtros desechables con un diámetro de poro de 0,45 µm. No está
permitida su congelación.
Estabilidad en los sistemas BN*:
5 días 8 horas cada día o un período de tiempo comparable (máximo 40 horas);
En el sistema BN* II el aumento de la estabilidad del reactivo, debido al uso del tapón protector de la evaporación (N° de pedido, OVLE), viene dado en el manual de operaciones del
aparato.
La estabilidad de los reactivos en el sistema BN ProSpec ® se debe tomar del manual de
operaciones.
Materiales adicionales necesarios
Sistema BN*
N Proteína-estándar PY (humana), N° de pedido OUID
N/T Proteína-control PY (humana), N° de pedido OWSY
N tampón para reacción, N° de pedido OUMS
N diluyente, N° de pedido OUMT
Tampón protector de evaporación BN* II (opcional), N° de pedido OVLE
Otros materiales y equipos como está descrito en el manual de operaciones respectivos de los
sistemas BN*.
Advertencias:
1. Los detalles sobre el manejo de los sistemas BN* se deben tomar de los correspondientes manuales de operación.
2. Los reactivos no se deben utilizar una vez pasada la fecha de vencimiento.
3. Los reactivos y las muestras tienen que haber alcanzado la temperatura ambiente (entre +15 y
+25°C) antes de ser medidos en los sistemas BN*A/BN* 100. En los sistemas BN* II/BN ProSpec® los reactivos y las muestras almacenados entre +2 y +8°C se pueden utilizar directamente
para la determinación.
Protocolos del test en los sistemas BN*
Los protocolos de elaboración de los ensayos vienen dados en el manual de operaciones,
así como en el software del aparato correspondiente. Todas las etapas son efectuadas
automáticamente por el sistema.
Preparación de la curva de referencia:
Las curvas de referencia se hacen sobre una calibración de varios puntos. Para su elaboración se preparan automáticamente una serie de diluciones del N Proteína-estándar PY con
el N diluyente.
Las curvas de referencia pueden ser utilizadas tanto tiempo como sea posible, siempre que
al determinar de nuevo de los controles de exactitud, por ej., N/T proteína-controles PY, sus
valores se encuentre de nuevo dentro de los correspondientes rangos de confianza. Al
utilizar un nuevo lote de antisuero se debe preparar una nueva curva de referencia.
Medida de las muestras de pacientes:
Las muestras de sueros son automáticamente diluidas 1:20 con N diluyente y medidas.
Para valores que estén por fuera del rango de medida, se puede repetir la medida automáticamente, con una dilución mayor o menor de la muestra. La repetición de las medidas en
otras diluciones de las muestras viene descrita en el manual de operaciones de los sistemas BN*.
Control de calidad interno
Los N/T proteína-controles PY se deben utilizar después de cada elaboración de una curva
de referencia, después de abrir un frasco de antisuero por primera vez, así como también,
con cada serie de muestras. Los controles deben manejarse en el test y en la evaluación
como las muestras de pacientes. Los valores teóricos y los rangos de confianza se deben
tomar de la Tabla de valores teóricos correspondiente a cada control.
Cálculo de los resultados del análisis
La valoración se efectua automáticamente mediante una función log-logit.
Limitaciones del Procedimiento
La presencia de turbidez y de partículas en las muestras pueden alterar la determinación.
Por lo tanto, las muestras que contengan partículas deben ser centrifugadas antes de efectuar la determinación.
Para las muestras control y para las muestras empleadas en estudios en diferentes centros,
debido a la técnica de fabricación o al envejecimiento de las muestras, se obtienen resultados diferentes dependiendo del método de determinación utilizado. Por esta razón, puede
ser necesario efectuar la valoración de estos resultados en relación con los valores objetivo
del método correspondiente.
Valores esperados
Para plasmas citratados de personas adultas es válido el siguiente rango de referencia :
Proteína
2,5 - 97,5 Porcentile
Fibronectina
0,25 -
Características del test
Rango de medida y sensibilidad
La sensibilidad de la determinación se fija de acuerdo al límite inferior de la curva de referencia y depende de la concentración de proteínas en el N Proteína estándar PY. Los rangos de medida típicos vienen dados en el manual de operaciones de los sistemas BN*.
Especificidad
Los N antisueros son específicos para la respectiva proteína.
Precisión
Con los N antisueros contra la fibronectina humana se determinaron en el sistema BN* los
siguientes coeficientes de variación (CV):
Intra-assay
(n=30)
promedio
[g/l]
Proteína
Fibronectina
0,22
Para la medida se deben usar, en lo posible, muestras frescas (almacenadas máximo 8
días entre +2 y +8°C) de plasmas con EDTA o citrato. Si las muestras se congelan a baja
temperatura, dentro de las 24 horas subsiguientes a la toma, se pueden almacenar por 1
año a -20°C, siempre que se eviten la descongelación y la congelación repetidas. Muestras
lipémicas o muestras congeladas, que estén turbias después de la descongelación, deben
ser aclaradas por centrifugación (10 min. a aprox. 15 000 x g) antes de la determinación.
Los plasmas citratados están diluidos por la solución de citrato en un promedio de un 17%.
Los plasmas con heparina no son apropiados para la determinación de fibronectina.
CV
[%]
Inter-assay
(n=10)
promedio
[g/l]
1,8
0,22
CV
[%]
1,5
Comparación de métodos
Se midieron muestras de plasmas con el N antisuero contra la fibronectina humana, en el
sistema BN* (y) y se compararon con la determinación por inmunodifusión radial (x) (NORPartigen**). La correlación de los resultados dio los siguientes datos:
Proteína
Número
de muestras
Regreción lineal
Coeficiente de
correlación
46
y (BN*)=0,96 x (RID) + 0,01 g/l
0,93
Fibronectina
Material a investigar
0,4 g/l
Cada laboratorio debe además determinar sus propios rangos de referencia, ya que estos
están sujetos a diferentes factores, los cuales pueden ser diferentes para cada colectividad
investigada.
Nota:
Los valores dados para las características del test representan valores típicos y no se deben tomar como especificaciones para el N Antisuero contra la fibronectina humana
Bibliografía
Ver página 1.
BN ProSpec es una marca registrada de Dade Behring Marburg GmbH en USA, Alemania y
en otros países.
* BN es una marca de fábrica de Dade Behring Marburg GmbH en USA.
** Partigen es una marca registrada de Dade Behring Marburg GmbH en Alemania y en
otros países.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
OUND G09 C0540 (445) H
5
Edición Octubre 2002
N Antisoro contra a
Fibronectina humana
Campos de aplicação
Reagente para diagnóstico in vitro para a determinação quantitativa de fibronectina humana no plasma humano, com o sistemas BN*.
Significado diagnóstico
Uma diminuição das concentrações de fibronectina no plasma pode aparecer em casos de
choque, nas infecções graves como septicemia, na cirrose do fígado, deficiência alimentar,
queimaduras, coagulação intravascular disseminada (DIC), pancreatite aguda, assim como
traumatismos e intervenções cirúrgicas importantes. A diminuição relativa da concentração
constitui um índice de gravidade da doença, e um aumento da concentração é considerado
como favorável para o prognóstico. A concentração de fibronectina no plasma pode ser
utilizada para controlo do estado nutricional (1). Um aumento da concentração plasmática
da fibronectina na mulher grávida, constitui um indicador de risco de pré-eclampsia (2). A
determinação da fibronectina no fluído ascítico é utilizada para diferenciar uma origem
maligna de uma origem benigna (3).
Princípio do método
As proteínas contidas no plasma humano formam imunocomplexos numa reacção imunoquímica com anticorpos específicos que dispersam a luz radiada. A intensidade da luz
difusa depende da concentração da respectiva proteína na amostra. A avaliação faz-se
comparando com um padrão conhecido da concentração.
Reagentes
N Antisoro Fibronectina Humana, cód. OUND
Frasco com 2 ml
Composição
O N Antisoro é um soro líquido, de origem animal, produzido mediante imunização de
coelhos com fibronectina humana altamente purificada. Os componentes lábeis dos antisoros são retirados utilizando um processo especial de estabilização. Uma filtração e
adição de azida sódica (<1 g/l) como agente de conservação exclui praticamente toda a
contaminação bacteriológica. Os antisoros específicos, purificados mediante imunoadsorção de fase sólida, após serem submetidos a provas especiais são ajustados de forma a
garantir uma óptima utilização nos sistemas BN*.
Os títulos específicos do anticorpos (T) são obtidos por imunodifusão radial e constam no
rótulo do frasco correspondente. Este valor indica quantas mg de antigéneo por 1ml de
antisoro se pode precipitar em gel agarose.
Advertências e precauções
1. Exclusivamente para diagnóstico in vitro.
2. Os reagentes contêm azida sódica, devem ser manipulados com precaução:
Não ingerir e evitar o contacto com a pele e as mucosas. A azida sódica, em presença de
metais pesados como o cobre ou chumbo, pode formar azidas explosivas.
Preparação dos reagentes
O N Antisoro está pronto para utilização e pode ser utilizado sem nenhum outro tratamento
preliminar.
Estabilidade e condições de armazenagem
Conservação entre +2 e +8 °C:
A estabilidade está indicada no rótulo;
Estabilidade depois de aberto:
4 semanas desde que os frascos, imediatamente após o uso, sejam firmemente fechados e
conservados entre +2 bis +8 °C para evitar a contaminação (p. ex., através de microorganismos); Em caso de armazenagem, os N antisoros podem apresentar floculações ou turvações que não são provocadas por contaminação microbiana e não prejudicam, de nenhum modo, a actividade. Nesses casos, os antisoros deverão ser filtrados antes de serem
usados. Para esse efeito, são adequados os filtros descartáveis com um diâmetro de poros
de 0,45 µm. Não congelar.
Estabilidade nos sistemas BN*:
5 dias com 8 horas ou um período de tempo equivalente (máximo de 40 horas);
Sistema BN* II: o aumento da estabilidade dos reagentes em caso de utilização de BN* II
Evaporation Stoppers (N.º de pedido OVLE) deverá ser retirada da instruções de serviço;
Sistema BN ProSpec®: a estabilidade dos reagentes deverá ser retirada das instruções de
serviço.
Materiais necessários mas não fornecidos
Sistema BN*
N Standard de proteínas PY (humanas), cód. OUID
N/T Soro Controlo de proteínas PY (humanas), COD. OWSY
N Tampão de Reacção, COD. OUMS
N Diluente, COD. OUMT
BN* II Evaporation Stoppers (opcionais), N.º de pedido OVLE
Material de consumo e equipamento tal como descrito nas instruções de serviço dos sistemas BN*.
Definição da curva de referência:
A curva de calibração é efectuada segundo uma calibração de vários pontos. As séries de
diluições do N Soro Padrão proteínas PY são efectuadas automaticamente com o N Diluente.
As curvas de calibração podem ser utilizadas tanto tempo quanto é possível, desde que, os
controles de exactidão realizados, por exemplo, com o N/T Controlo de proteínas PY se
encontrem dentro dos valores de intervalo de confiança. Deve ser estabelecida uma nova
curva de calibração por cada novo lote de antisoro.
Medição das amostras de paciente
As amostras séricas são automaticamente diluídas a 1 : 20 com N Diluente e medidas. Se
os valores medidos se situarem fora do escalão de medição, esta pode ser repetida com
uma diluição maior ou menor. As repetições da medição a partir de amostras com outras
diluições estão descritas nas instruções de serviço dos sistemas BN*.
Controlo de qualidade interno
O N/T Controlo de proteína deverá ser utilizado após a preparação de uma curva de referência,
após a primeira abertura de um frasco de antisoro ou em cada série de amostras de plasma ou
de soro. Na preparação e na avaliação do teste, o controlo é tratado como amostras de paciente.
Os valores teóricos e os escalões de confiança deverão ser retirados da tabela de valores teóricos do controlo respectivo.
Cálculo dos resultados
Os resultados são calculados automaticamente mediante uma função log-logit.
Limitações do procedimento
As turvações e as partículas nas amostras podem perturbar a determinação. Por isso, as
amostras que contêm partículas deverão ser centrifugadas antes da determinação.
Devido à técnica de fabricação e/ou amostras antigas, os resultados obtidos para o controlo
das amostras e avaliações inter laboratoriais podem diferir dependendo do método de ensaio utilizado. Pode ser necessário avaliar estes resultados em relação aos valores de referencia específicos do método.
Valores esperados
Para o plasma citratado dos para indivíduos adultos saudáveis testados aplica-se o seguinte escalão de referência:
Proteína
Fibronectina
Além disso, cada laboratório deverá determinar os seus escalões de referência próprios, já
que estes dependem de muitos factores que podem variar consoante a população examinada.
Características do teste
Sensibilidade e âmbito de medição
A sensibilidade da determinação é definida pela curva inferior da curva de referência e
depende, assim, da concentração das proteínas no N Protein-Standard PY. Os escalões de
medição típicos estão indicados nas instruções de serviço dos sistemas BN*.
Especificidade
Os N Anti-soros são específicos da respectiva proteína.
Precisão
Com o N antisoro contra a fibronectina humana forma determinados os seguintes coeficientes de variação (CV) no sistema BN*:
Proteína
Fibronectina
Proteína
Fibronectina
Protocolos de ensaio nos sistemas BN*
Os protocolos de ensaio estão contidos nas instruções de serviço e no Software do aparelho respectivo.
Todos os passos são executados automaticamente pelo sistema.
OUND G09 C0540 (445) H
6
Edição Outubro 2002
0,22
CV
[%]
Inter-série
(n=10)
Valor médio
[g/l]
1,8
0,22
CV
[%]
1,5
Nº de
amostras
Regressão linear
Coeficiente de
correlação
46
y (BN*) = 0,96 x (RID) + 0,01 g/l
0,93
Notas
Os valores indicados para as características dos testes representam resultados típicos e não
devem ser considerados como especificação para o N Antisoro contra a Fibronectina humana.
Bibliografia
Vide a página 1.
BN ProSpec e uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA, na Alemanha e noutros países.
* BN é uma marca de fábrica da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA.
** Partigen e uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH na Alemanha e
noutros países.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
Symbols Key / Symbolschlüssel / Explication des Symboles /
Interpretazione simboli / Clave de los Símbolos / Chave dos Símbolos
Manufactured by / Hergestellt von / Fabriqué par / Prodotto da / Fabricado por
IVD
Procedimento
1. Os pormenores para a manipulação dos sistemas BN* deverão ser retirados das instruções de serviço respectivas.
2. Os reagentes não deverão ser mais usados após a data de expiração indicada.
3. Antes da medição no sistema BN*A/BN* 100, é necessário que os reagentes e as
amostras tenham atingido a temperatura ambiente (+15 a +25°C). Os reagentes e as
amostras armazenadas entre +2 bis +8 °C podem ser utilizadas directamente no sistema
BN* II/BN ProSpec® para a determinação.
Intra-série
(n=30)
Valor médio
[g/l]
Comparação de métodos
No sistema BN* (y) foram medidas amostras plasmáticas com o N antisoro contra a fibronectina humana e definidas, comparativamente, com um método de imunodifusão radial
(x) (NOR-Partigen**). A correlação dos resultados apresentou os seguintes valores:
Amostras
Para fazer a medição, deverão ser utilizadas amostras séricas tão frescas quanto possíveis
(8 dias, no máximo, de conservação entre +2 e +8°C ) ou amostras de plasma citratado
EDTA. Se as amostras foram congeladas nas primeiras 24 horas a contar do momento da
colheita, podem ser conservadas a menos de -20 °C até 1 ano, desde que se evite descongelar e congelar repetidamente. Amostras lipémicas ou amostras congeladas que se apresentem turvas quando descongeladas, têm de ser clarificadas por centrifugação (10 min a
aprox. 15000 x g) antes da determinação. Os plasmas citratados são diluídos 17%, em
média, pela solução de citrato. O plasma de heparina não é adequado para a determinação
da fibronectina.
2,5 - 97,5% percentil
0,25 – 0,4 g/l
LOT
EXP
CCYY-MM-DD
In Vitro Diagnostic Medical Device / In Vitro Diagnosticum / Dispositif Médical
Diagnostic In Vitro / Dispositivo Medico per Diagnostica In Vitro / Producto
sanitario para Diagnóstico In Vitro
Lot Number / Chargenbezeichnung / Numéro de Lot / Numero di Lotto / Número
de Lote
Expiration Date / Verfalldatum / Date de Péremtion / data di scadenza / Fecha
de vencimiento / termo da validade
Storage Temperature / Lagertemperatur / Température de Conservation /
Temperatura di conservazione / Temperatura de almacenamiento / Temperatura
de armazenagem
CE Mark / CE-Zeichen / Marquage CE / Marchio CE / CE Marca / Marca CE
REF
Catalogue Number / Katalog Nummer / Référence / Codice Catalogo / Número
de Catálogo
Consult Instructions for Use / Gebrauchsanweisung beachten / Consulter la
Notice d'Utilisation / Istruzioni per l'uso / Consultar Instucciones para el Uso /
Consulte as Instruções de Utilização