Hemoglobina glicosilada HbA1c

HEMOGLOBIN A1C
COD 11044
20 determinaciones
COD 11045
100 determinaciones
HEMOGLOBINA A1C
Cromatográfica - espectrofotométrica
INTERCAMBIO IÓNICO
CONSERVAR A 15-30ºC
Reactivos para medir la concentración de HbA1C
Sólo para uso in vitro en el laboratorio clínico
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
Después de preparar un hemolizado, donde se elimina la fracción lábil, las
hemoglobinas son retenidas por una resina de intercambio catiónico,
eluyéndose de forma específica la hemoglobina A1c (HbA1c) previa
eliminación por lavado de la Hemoglobina A1a+b (HbA1a+b)1. La estimación
del porcentaje de la Hb A1c se realiza por lectura de la absorbancia a 415
nm.
Sangre
50 mL
Reactivo (1)
200 mL
3. Agitar y dejar a temperatura ambiente durante 10-15 min. Este
hemolizado se utilizará en los pasos 6 y 11.
Preparación de la columna (Notas 2 y 3)
4. Destapar la parte superior de la columna y romper a continuación la
lengüeta inferior.
CONTENIDO
1. Reactivo
2. Reactivo
3. Reactivo
4. Microcolumnas
2. Pipetear en un tubo de ensayo:
COD 11044
COD 11045
1 x 30 mL
1 x 50 mL
1 x 450 mL
1 x 20
1 x 30 mL
1 x 240 mL
4 x 450 mL
1 x 100
COMPOSICIÓN
1. Reactivo. Ftalato de potasio 50 mmol/L, detergente 5 g/L, azida de
sodio 0,95 g/L, pH 5,0.
2. Reactivo. Tampón fosfatos 30 mmol/L, pH 6,5, azida de sodio 0,95
g/L.
3. Reactivo. Tampón fosfatos 72 mmol/L, pH 6,5, azida de sodio 0,95
g/L.
4. Microcolumnas. Contienen resina de intercambio catiónico
equilibrada con tampón fosfatos 72 mmol/L, pH 6,5, azida de sodio
0,95 g/L.
Utilizar únicamente Microcolumnas (4) y reactivos 2 y 3 del mismo
número de lote.
CONSERVACIÓN
Conservar a 15-30ºC.
Reactivos estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta,
siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminación
durante su uso.
Indicaciones de deterioro:
- Reactivos: Presencia de partículas, turbidez.
- Microcolumnas (4): Ausencia de tampón sobre el lecho de la resina.
EQUIPO ADICIONAL
- Fotómetro para lecturas a 415 nm (405-425)
MUESTRAS
5. Con la ayuda del extremo plano de una pipeta, bajar el disco superior
hasta el nivel de la resina, evitando comprimirla. Dejar gotear hasta
que el líquido alcance el nivel del disco, desechando el eluido.
Separación y lectura de la HbA1c
6. Aplicar cuidadosamente sobre el disco superior:
Hemolizado
Desechar el eluido
50 mL
7. Cuando haya penetrado todo el hemolizado añadir, procurando
arrastrar los posibles restos del mismo:
Reactivo (2)
200 mL
Desechar el eluido
2,0 mL
Desechar el eluido
8. Pipetear:
Reactivo (2)
9. Colocar la columna sobre un tubo de ensayo y añadir:
Reactivo (3)
4,0 mL
Recoger el eluido (Fracción HbA1c)
10. Agitar bien y leer la absorbancia de la fracción HbA1c a 415 nm frente
a agua destilada (AHbA1c). La absorbancia es estable durante al menos
una hora.
Lectura de la HbTOTAL
11. Pipetear en un tubo de ensayo:
Reactivo (3)
12,0 mL
Hemolizado
50 mL
12. Agitar bien y leer la absorbancia de la HbTOTAL a 415 nm frente a agua
destilada (AHb TOTAL). La absorbancia es estable durante al menos una
hora.
CÁLCULOS
El tanto por ciento de HbA1c en la muestra se calcula a partir de la
siguiente fórmula general:
A HbA1c ´ VHbA1c
´ 100 = % HbA1C
A HbTOTAL ´ VHbTOTAL
Sangre total recogida mediante procedimientos estándar.
La Hemoglobina A1C es estable 7 días a 2-8ºC. Puede utilizarse heparina
o EDTA como anticoagulante.
PROCEDIMIENTO
Preparación del hemolizado y eliminación de la fracción lábil
1. Dejar atemperar reactivos y columnas durante unos minutos, hasta
que alcancen la temperatura ambiente (21-26°C) (Nota 1).
El volumen de HbA1c (VHbA1c) es 4 mL, el volumen de Hb total (VHbTOTAL) es
12 mL. Se deduce la fórmula siguiente para el cálculo de la concentración:
A HbA1c
A HbTOTAL
´
100
= % HbA1C
3
Los resultados obtenidos con el presente método, pueden convertirse en
equivalentes a los de un método certificado según el US National
Glycohemoglobin Standardization Program (NGSP), o en equivalentes a
los del método estandarizado por la International Federation of Clinical
Chemistry (IFCC), mediante las siguientes fórmulas:
%HbA1C-NGSP = 0,86 x %HbA1C-BioSystems + 0,24
%HbA1C-IFCC = 0,94 x %HbA1C-BioSystems – 2,09
VALORES DE REFERENCIA
Los siguientes valores discriminantes han sido establecidos por el
Diabetes Control and Complications Trial Research Group (DCCT) y han
sido aceptados en varios países para la población no diabética y para la
evaluación del grado de control de la glucosa en sangre en pacientes
diabéticos2,3.
DCCT / NGSP
IFCC
BioSystems
Grado de control
4,0 - 6,0
6,0 - 6,5
6,5 - 8,0
> 8,0
2,0 - 4,2
4,2 - 4,8
4,8 - 6,4
> 6,4
4,4 - 6,7
6,7 - 7,3
7,3 - 9,1
> 9,1
No diabético
Objetivo
Buen control
Precisa actuación
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda el uso de los Controles de Hemoglobina A1C, Normal (cod.
18001) y Elevado (cod. 18002), para verificar la funcionalidad del
procedimiento de medida.
Cada laboratorio debe establecer su propio programa de Control de
Calidad interno, así como procedimientos de corrección en el caso de que
los controles no cumplan con las tolerancias aceptables.
CARACTERÍSTICAS METROLÓGICAS
- Límite de detección: Menor que 4,3 %.
- Límite de linealidad: Mayor que 17,0 %.
- Repetibilidad (intraserie):
Concentración media
CV
n
7,2 %
9,9 %
5,4 %
6,3 %
25
25
Concentración media
CV
n
7,2 %
9,9 %
7,3 %
5,9 %
25
25
- Reproducibilidad (interserie):
- Veracidad: Al comparar los resultados obtenidos con este método con
los de un método certificado por NGSP, se obtiene la siguiente
equación:
(%HbA1C-BS) = 1,17 x (% HbA1C-Certified) – 0,28
Los detalles del estudio comparativo están disponibles bajo solicitud.
- Interferencias: Lípidos (triglicéridos 10 g/L) y bilirrubina (20 mg/dL) no
interfieren. Otros medicamentos y sustancias pueden interferir4.
En los métodos cromatográficos de intercambio iónico, la presencia de
hemoglobina C o S en la muestra puede alterar ligeramente los
resultados, pero las diferencias no son clínicamente significativas5.
Otras variantes de hemoglobina, como la HbE, la HbF, la Hbcarbamilada y la Hb-acetilada, pueden interferir5,6. La incubación con el
Reactivo (1) elimina la interferencia de la HbA1c-lábil.
En los pacientes con anemia hemolítica, anemia por deficiencia de
hierro o cuando se ha practicado una transfusión, la edad media de los
eritrocitos se ve alterada. Por este motivo, los resultados de HbA1C de
estos pacientes deben interpretarse con precaución.
M11044c-0314
CARACTERÍSTICAS DIAGNÓSTICAS
La Hemoglobina A1c es el producto de la condensación irreversible de la
glucosa con el residuo N-terminal de la cadena b de la hemoglobina A.
La concentración de HbA1C en sangre es directamente proporcional a la
concentración media de glucosa (MGS) durante un período de tiempo de
6-8 semanas, equivalente a la vida media de los eritrocitos, según las
siguientes fórmulas2:
MGS (mg / dL ) = 31,7 ´ %HbA1C - 66,1
MGS (mmol / L) = 1,76 ´ %HbA1C - 3,67
Los niveles de HbA1C son un valioso complemento a las determinaciones
de glucosa en sangre en la valoración del control glucémico para el
seguimiento de los pacientes diabéticos, proporcionando una información
más fiable que la concentración de glucosa. Existen varios estudios que
indican que las complicaciones relacionadas con la diabetes pueden
reducirse mediante un estrecho control de los niveles de glucosa en
sangre. Sin embargo, la determinación de HbA1C no es adecuada para el
diagnóstico de la diabetes mellitus2,3.
El diagnóstico clínico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado
de un único ensayo, sino que debe integrar los datos clínicos y de
laboratorio.
NOTAS
1. Los resultados obtenidos son independientes de la temperatura entre
los 21-26ºC. Si la temperatura de trabajo es superior o inferior,
multiplicar el valor obtenido por el factor correspondiente, según la
siguiente tabla:
Temperatura ensayo
Factor cálculo
18-20ºC
1,15
27-30ºC
0,90
2. El almacenaje prolongado de las columnas puede ocasionar un
excesivo empacado de la resina que disminuiría el flujo. Para evitarlo,
colocar la columna en posición invertida unos 10 min, volverla a su
posición original y esperar que sedimente la resina antes de bajar el
disco superior.
3. La ocasional presencia de burbujas no afecta la determinación.
BIBLIOGRAFÍA
1. Bissé E, Abraham EC. New less temperature-sensitive
microchromatographic method for the separation and quantitation of
glycosylated hemoglobins using a non-cyanide buffer system. J
Chromatog 1985; 344: 81-91.
2. Tietz NW. Clinical guide to laboratory tests, 3rd ed. Saunders Co,
1999.
3. The Diabetes Control and Complications Trial Research Group. The
effect of intensive treatment of diabetes on the development and
progression of long term complications in insulin-dependent diabetes
mellitus. N Engl J Med 1993; 329: 977-986.
4. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC
Press, 1995.
5. Roberts WL et al. Effects of hemoglobin C and S traits on eight
glycohemoglobin methods. Clin Chem 2002: 48: 383-385.
6. Bry L, Chen PC, Sacks DB. Effects of hemoglobin variants and
chemically modified derivatives on assays for glycohemoglobin. Clin
Chem 2001; 47: 153-163.