Información Directrices para la determinación de fibronectina en

Transcripción

Fibronectina
Sistema de inmunoquímica IMMAGE®
Información
Directrices para la determinación de
fibronectina en suero
en el sistema de inmunoquímica IMMAGE*
Información general
Uso previsto
La información está dirigida a la determinación cuantitativa de fibronectina en suero humano por nefelometría en
un sistema de inmunoquímica IMMAGE (1, 2).
Rango de medición
Aproximadamente 0,03 – 0,75 g/L dependiendo del lote específico del calibrador.
Intervalo de referencia
0,20 – 0,40 g/L (3). Se recomienda determinar el intervalo de referencia para la población local.
Ajustes del intrumento
La programación del instrumento se realiza según los “Ajustes del instrumento” en la página 3.
Reactivos
Anticuerpo
Tampón de reacción
Calibrador
Control
Diluyente
Código
Q0149
S2006
OUID
OWSY
447640
S2005
Nombre
Polyclonal Rabbit Anti-Human Fibronectin
Dako Turbidimetry/Nephelometry Reaction Buffer 3
Dade Behring N Protein Standard PY
Dade Behring N/T Protein Control PY
IMMAGE® Immunochemistry System DIL 1
Componente Beckman Coulter (4x120 mL) o
Dako Turbidimetry/Nephelometry Dilution Buffer 1
Muestras
Plasma humano con EDTA El suero humano tiene concentraciones inferiores a aproximadamente el 20%.
Estable durante 7 días a 2 – 8 ºC. (3)
Las muestras se diluyen con IMMAGE® Immunochemistry System DIL 1.
Calibrador
La dilución del calibrador se realiza manualmente en un IMMAGE® Immunochemistry System DIL 1 o solución
de NaCl, 154 mmol/L (0,9%) o Dako Dilution Buffer 1.
Tampón de reacción
El tampón de reacción está listo para usar.
Anticuerpo
Diluya previamente el anticuerpo 1:1.70 (por ej. 5000 µL de anticuerpo + 3500 µL de diluyentes). Si en raras
ocasiones el anticuerpo adquiere un aspecto turbio, se recomienda su filtración a través de un filtro de membrana
de 0,22 µm.
Estabilidad del anticuerpo sin diluir: Consulte la fecha de caducidad en la etiqueta.
Estabilidad del cuerpo prediluido: 28 días a 2 – 8 °C.
Estabilidad una vez preparado: 28 días.
Capacidad: 1 mL de anticuerpo diluido equivale a aproximadamente 44 lecturas de tubos de estándares o
muestras. Debería tenerse en cuenta el volumen improductivo de la botella de reactivo cuando se calcule la
cantidad requerida de reactivo.
Estabilidad de la calibración
Se recomienda volver a calibrar cada 28 días o cuando cambien los lotes de reactivos, se prepare una nueva
dilución de anticuerpo, se filtre la dilución de anticuerpo, o el control de calidad dé un resultado erróneo fuera del
rango establecido por el propio laboratorio.
Solución de problemas
Si el rendimiento no es aceptable, intente volver a calibrar. Compruebe los reactivos y el procedimiento.
Si el problema persiste, póngase en contacto con el proveedor del instrumento o con el Servicio técnico de Dako.
Referencias
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: method optimization. Basic principles for quantitative
determination of human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry.
Clin Chem Lab Med 2001; 39: 1098-109.
2. Manual(es) de usuario de IMMAGE® Immunochemistry System. IMMAGE es una marca comercial registrada
de Beckman Coulter, Inc., Fullerton, CA.
3. Tietz NW. Clinical guide to laboratory tests. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1995 p. 240-1.
(121167-002)
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Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Fibronectina
Datos de rendimiento
Sensibilidad
Los valores típicoshallados para 0,75 g/L de fibrinonectina son de aproximadamente 303 respuestas de
instrumento en Beckman Immage.
Límite de detección
El límite de detección se estima hasta 0,015 g/L.
Precisión
Se estimó la precisión en un control y dos muestras de suero mediante análisis ANOVA de 6 ciclos cada uno con
una nueva calibración y 6 determinaciones en cada ciclo.
Valor promedio
de fibronectina
g/L
Pool sérico humano bajo
N/T Protein Control PY
Pool sérico humano alto
0,081
0,271
0,293
Desviación típica
g/L
Dentro
del ciclo
0,002
0,007
0,007
Entre
ciclos
0,011
0,006
0,008
Total
0,011
0,009
0,011
CV total
(%)
13,4
3,3
3,6
n
36
36
36
Linealidad
La linealidad es aceptable en el rango de 0,1 – 0,44 g/L, la mayor concentración probada.
Rango de seguridad
No se observa exceso de antígeno con concentraciones de fibronectina < 3,1 g/L (la mayor concentración probada).
Interferencia
No se observan interferencias con concentraciones de hasta 10 g/L de hemoglobina, 420 mg/L de bilirrubina,
2 g/L de intralípidos y 200 UI/mL de factor reumatoide.
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Fibronectina
®*
Ajustes del instrumento para IMMAGE Immunochemistry System
Procedimiento
1. Programe un reactivo definido por el usuario con los parámetros enumerados a continuación. Para obtener
instrucciones más detalladas, consulte por favor el capítulo 5 del manual de instrucciones del IMMAGE®
Immunochemistry System.
2. Transfiera el reactivo con anticuperpo Dako a un compartimiento “A” de un nuevo cartucho definido por el usuario.
3. Transfiera el Dako Reaction Buffer 3 a un compartimiento “B” del cartucho. Por favor, consulte la siguiente nota.
4. Nombre el producto químico “Frb”.
5. El valor del calibrador depende del lote. Cuando utilice el Dade Behring N Protein Standard PY (código OUID)
se prepararán manualmente las siguientes series de diluciones en conformidad con el esquema de dilución
que se muestra a continuación.
6. Utilice IMMAGE DIL1 (Beckman Coulter PN 447255) como diluyente de la muestra y configúrelo en el IMMAGE
como DIL1.
Esquema de dilución
Estándar
N.° (i)
Std. (1)
Std. (2)
Std. (3)
Std. (4)
Std. (5)
Std. (6)
N Protein
Standard PY
[
[
[
[
[
[
µL
5
8
24
40
60
55
]
]
]
]
]
]
NaCl
0,9%
[
[
[
[
[
[
µL
250
105
115
100
95
50
f(i)
]
]
]
]
]
]
Conc.
f(1)
f(2)
f(3)
f(4)
f(5)
f(6)
C(i)
Factor
0,0196
0,0707
0,1727
0,2857
0,3871
0,5238
[
[
[
[
[
[
Concentración
0,0196 x (C(Cal))
0,0707 x (C(Cal))
0,1727 x (C(Cal))
0,2857 x (C(Cal))
0,3871 x (C(Cal))
0,5238 x (C(Cal))
]
]
]
]
]
]
La concentración de fibronectina en los estándares (C(i)) (g/L) se calcula a partir de la concentración de
fibronectina (C(Cal)) (g/L) indicada para el lote específico del calibrador (N Protein Standard PY) y el factor de
concentración relativa (f(i)) multiplicando, es decir, C(i) = f(i) x C(Cal) . Consulte la Hoja de valores analíticos para el
valor C(Cal) exacto del lote actual.
Información del protocolo
Nombre del producto químico
Fibronectina
Unidades
Número de lote
XXXXXX
Protocolo
Número de serie del reactivo
XXXXXXX
Volumen de muestra o de dilución
Volumen de tampón de reacción
Volumen del compartimiento A
Volumen del compartimiento B
10 µL
0 µL
38 µL
195 µL
Niveles/repeticiones del calibrador
6/2
g/L
Nefelométrico
no competitivo
Fecha de caducidad
del reactivo
Ganancia
Dilución de calibración
Dilución de la muestra
Tiempo de reacción
Puntos de ajuste
del calibrador
XX/XX/XX
1
1:1
1:5
1,5 minutos
Datos específicos
de cada lote
XX Definido por el usuario.
Modelo definido por el usuario: Cuatro parámetros logísticos
Nota:
(121167-002)
El volumen máximo del compartimiento “A” y “B” del cartucho UDR es de 8,0 mL, y tiene un volúmen
improductivo de 250 µL. Aunque el sistema dispensa 195 µL de tampón desde el compartimiento B según
el protocolo descrito anteriormente, realmente aspira un volumen total de 200 µL para evitar cualquier posibilidad
de contaminación del líquido. Así, el cartucho puede funcionar cuando esté lleno al máximo, aproximadamente
35 pruebas. Es aconsejable monitorizar el uso del reactivo, y rellenar los compartimientos A y B cuando sea
apropiado hasta completar las 300 pruebas del cartucho.
30 197.Q0149.01/ES/SSH/2010.10.28 p. 3/3

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