RPR-Carbón

RPR-Carbón
Ensayo de aglutinación en porta.
Sólo para uso "in vitro".
Conservar de 2 a 8 °C.
Los reactivos se deben conservar de 2 a 8 oC, no deben congelarse. En
estas condiciones los componentes mantendrán su funcionalidad hasta
la fecha de vencimiento señalada en la etiqueta.
INTRODUCCIÓN
La sífilis es una enfermedad de transmisión sexual causada por
Treponema pallidum. Los tipos principales de ensayos que se usan en
el diagnóstico de la sífilis son: floculación o aglutinación, ensayo de
anticuerpos fluorescentes y ensayos de hemaglutinación.
MUESTRA
Utilizar suero. Los sueros mantienen su actividad durante 7 días
conservados de 2 a 8 °C ó 3 meses conservados a -20 °C.
No utilizar sueros hemolizados ni contaminados. No utilizar sueros
altamente lipémicos pues podrían dar una aglutinación no específica.
Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes del
ensayo.
APLICACIÓN PROPUESTA
El presente método se emplea en la determinación de reaginas
plasmáticas en suero humano.
MATERIAL NECESARIO
Micropipetas.
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
El método se fundamenta en una reacción de floculación de una
suspensión estabilizada de cristales de colesterol, cardiolipina, lecitina
y partículas de carbón para facilitar la lectura de la reacción. Este
reactivo actúa como antígeno frente a unos anticuerpos presentes en los
enfermos de sífilis. Dichos anticuerpos reciben el nombre de reaginas
luéticas y su detección forma parte de la serología luética no
treponémica.
CONTENIDO
R1 Suspensión
Tapa blanca
R2 Control positivo
Tapa roja
R3 Control negativo
Tapa azul
Portas
Palillos
Frasco y aguja
dispensadora
Suspensión de RPR-Carbón
Tampón fosfato 10 mmol/L
Azida sódica 0,95 g/L
Cód. 1200401: 1 x 3 mL
Cód. 1200402: 2 x 5 mL
Suero humano con un título de reaginas ≥ 1/2.
Azida sódica 0,95 g/L.
Suero animal.
Ázida sódica 0,95 g/L.
Cód. 1200401: 18 paq. x 8
Cód. 1200402: 54 paq. x 8
Cód. 1200401: 6 paq. x 25
Cód. 1200402: 20 paq. x 25
1
CALIBRACIÓN
La sensibilidad del reactivo es trazable al material de Referencia
“Reference Human Ferum” de CDC (Centre for Diseases Control) y
comparable al reactivo “RPR-card test reagent” de CDC.
PREPARACIÓN Y ESTABILIDAD
El reactivo R1 es una suspensión de partículas de carbón, debe
homogeneizarse, con una suave agitación, antes de ser utilizado, pues
tiende a sedimentar en reposo.
Para la utilización del R1, se deben dispensar 20 µL en cada
pocillo. Para ello puede utilizarse una micropipeta ajustada a este
volumen o bien dispensarse a través de la aguja suministrada que
se adapta a la botella de plástico. El trasvase del reactivo a la botella
de plástico se puede realizar mediante aspiración con la aguja.
Cualquier alteración en el volumen del reactivo podría afectar el
resultado.
TÉCNICA
Método cualitativo
1.-Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La
sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2.-Depositar 50 µL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de
los controles positivo y negativo, sobre círculos distintos de un porta.
3.-Homogeneizar el reactivo R1 con agitación suave. Invertir el frasco
dispensador y presionar ligeramente para eliminar las burbujas de aire.
4.-Situar la micropipeta en posición vertical y perpendicular al porta y
dispensar una gota (20 µL) de la suspensión de carbón junto a cada una
de las gotas anteriores.
5.-Mezclar las gotas mediante agitación con un palillo y extenderlas por
toda la superficie interior del círculo. Emplear palillos distintos para
cada muestra.
6.-Colocar el porta en el agitador rotatorio (80-100 r.p.m.) durante 8
minutos. El exceso de tiempo de reacción puede dar lugar a la
aparición de falsos positivos.
Método semicuantitativo
1.- Realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L.
2.- Procesar para cada dilución como en la prueba cualitativa.
LECTURA E INTERPRETACIÓN
Examinar microscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación
inmediatamente después de retirar el porta del agitador.
Interpretación
Tipo de aglutinación
Agregados grandes o
medianos
Agregados pequeños
Ningún agregado o ligera
rugosidad
Lectura
R
Resultado
Reactivo
D
Reactivo
débil
No reactivo
N
En el método semicuantitativo se define el título como la dilución
mayor que da resultado positivo.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda utilizar el control positivo y negativo para controlar la
funcionalidad del reactivo, así como modelo de comparación para la
interpretación de los resultados.
CARACTERÍSTICAS FUNCIONALES
Umbral de detección: 1/16
Valor de prozona: negativo hasta 1/128
Ed. 2002
CENTIS DIAGNOSTICOS. Ave. Monumental y Carretera La Rada, km 3 1/2, Guanabacoa, C. Habana, Cuba
Teléfonos: (53-7) 579563 al 70, (53-7) 579524, Fax: (53-7) 339821, e-mail: [email protected]
NP 7144
RPR-Carbón
Sensibilidad diagnóstica: 86 % en sífilis primaria y 100 % en sífilis
secundaria.
Especificidad diagnóstica: 98 %
Interferencias:
Interfiere el factor reumatoideo a partir de 300 UI/mL.
No interfieren: Bilirrubina hasta 342 µmoles/L
Hemoglobina hasta 10 g/L
Lípidos hasta 10 g/L
LIMITACIONES DEL METODO
La prueba de RPR-Carbón no es específica para el diagnóstico de
sífilis. Se recomienda el ensayo de todas las muestras reactivas con
métodos treponémicos tales como el TPHA y FTA-Abs para la
confirmación de los resultados.
Un resultado negativo no excluye el diagnóstico de la sífilis.
Pueden aparecer falsos resultados positivos en otras enfermedades tales
como la mononucleosis infecciosa, neumonía viral, toxoplasmosis,
embarazo y enfermedades autoinmunes.
PRECAUCIONES
El Control positivo es un suero humano. Aunque no se ha detectado la
presencia de antígeno HBs, ni anticuerpos anti-HIV, debe ser
manipulado con la misma precaución que un suero muestra.
Contiene pequeñas cantidades de azida sódica. Evítese el contacto con
la piel dañada y las mucosas.
ADVERTENCIA
Temperaturas elevadas del medio ambiente pueden provocar la
desecación de la muestra de reacción sobre el porta dando lugar a un
aspecto de “aglutinación” que puede confundirse con un falso positivo.
Se recomienda realizar el ensayo dentro de una cámara húmeda.
BIBLIOGRAFÍA
George P. Schimid. Current Opinión in Infectious Diseases 1994; 7:
34-40.
Sandra A Larsen et. al. Clinical Microbiology Reviews 1995; 8 (1): 121.
Sandra A Larsen et. al. A Manual of Test for Syphilis American Public
Heslth 4, Association 1990: 1-192.
Young. DS. Effects of drugs on clinical laboratory test, 4th ed. AACC
Press, 1995.
PRESENTACIÓN
Cód.: 1200401 150 Det.: 3 mL Suspensión
: 0,8 mL Control positivo
: 0,8 mL Control negativo
: 18 x 8 portas.
: Frasco y aguja
Cód.: 1200402 500 Det.: 2 x 5 mL Suspensión
: 0,8 mL Control positivo
: 0,8 mL Control negativo
: 54 x 8 portas.
: Frasco y aguja dispensadora.
: Palillos.
Ed. 2002
CENTIS DIAGNOSTICOS. Ave. Monumental y Carretera La Rada, km 3 1/2, Guanabacoa, C. Habana, Cuba
Teléfonos: (53-7) 579563 al 70, (53-7) 579524, Fax: (53-7) 339821, e-mail: [email protected]
NP 7144