DiaSorin Inc 1951 Northwestern Ave – Stillwater, MN 55082 – EE

DiaSorin Inc 1951 Northwestern Ave – Stillwater, MN 55082 – EE

DiaSorin Inc
1951 Northwestern Ave – Stillwater, MN 55082 – EE. UU.
Tel. +1.651.439.9710 – Fax +1.651.351.5669
Preste atención a los cambios!
®
LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Assay (310600)
1. INDICACIONES
®
El LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Assay utiliza la tecnología de inmunoensayo por quimioluminiscencia (CLIA)
para la determinación cuantitativa de la 25-hidroxivitamina D y de otros metabolitos hidroxilados de vitamina D en
suero humano, plasma EDTA o plasma con heparina de litio para evaluar la suficiencia de vitamina D utilizando la
familia de analizadores LIAISON® Analyzer. Los resultados del ensayo deben utilizarse junto con otros datos clínicos
o de laboratorio para ayudar al médico a decidir qué tratamiento aplicar a cada paciente de una población adulta.
2. RESUMEN Y EXPLICACIÓN DEL ENSAYO
El papel de la vitamina D en el metabolismo óseo y mineral quedó establecido desde su primera identificación como
factor de curación del raquitismo. Sin embargo, ahora la vitamina D ha sido reconocida como prohormona con
múltiples funciones para mantener una salud óptima. [1]
La vitamina D3 (colecalciferol) y la vitamina D2 (ergocalciferol) son las formas más abundantes de vitamina D en el
cuerpo. La vitamina D3 se sintetiza en la piel a partir de 7-dehidrocolesterol como reacción a la luz solar. La mejor
fuente nutricional de vitamina D3 es el pescado azul, principalmente el salmón y la caballa. Las fuentes nutricionales
de vitamina D2 son algunas verduras, la levadura y las setas.
La vitamina D (D3, D2 y metabolitos) se convierte en 25-hidroxivitamina D en el hígado. La medición de la
concentración de 25 OH vitamina D en suero o plasma es el mejor indicador del estado nutricional de vitamina D. [2]
El nivel óptimo de 25 OH vitamina D es objeto de controversia, pero se considera que >32 ng/ml (>80 nmol/l) es una
cantidad suficiente para la salud ósea. [3-13] La toxicidad por vitamina D es una patología conocida pero poco
frecuente, mientras que su insuficiencia es un problema creciente de salud pública. Varios estudios han detectado
una amplia insuficiencia de vitamina D en poblaciones aparentemente sanas de todo el mundo. [3-13]
El tratamiento más común para la deficiencia de vitamina D consiste en la administración de vitamina D2 o D3 en
dosis que oscilan de 50.000 UI/mes a 50.000 UI/semana. [14] Los alimentos enriquecidos o los suplementos pueden
contener cualquiera de estas formas. Para garantizar la precisión a la hora de evaluar el total de vitamina D, deben
medirse todas sus formas, incluidos D3, D2 y metabolitos.
Además, estudios recientes han identificado un 3-epímero inactivo de 25 OH vitamina D que puede hallarse presente
en el suero de bebés de menos de un año. [15] Por lo tanto, es importante disponer de un ensayo que evite la medición
de la forma 3-epímero inactivo y mida solo las formas D3 y D2. De varios estudios más recientes se desprende que la
insuficiencia de vitamina D podría estar asociada con un aumento en el riesgo de muchas enfermedades crónicas,
incluidas enfermedades cardiovasculares, cáncer, enfermedades infecciosas y enfermedades autoinmunes.
3. PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO
®
El LIAISON 25 OH Vitamin D Assay es un inmunoensayo competitivo directo por quimioluminiscencia para la
determinación cuantitativa del total de 25 OH vitamina D en suero. Durante la primera incubación, la 25 OH vitamina D
se disocia de su proteína de unión y se une al anticuerpo específico en la fase sólida. Transcurridos 10 minutos, se
agrega el trazador (vitamina D unida a un derivado de isoluminol). Después de una segunda incubación de 10 minutos,
el material libre se elimina en un ciclo de lavado. A continuación se agregan los reactivos iniciadores para dar lugar a
una reacción quimioluminiscente rápida. La señal luminosa se mide en unidades lumínicas relativas con un
fotomultiplicador y es inversamente proporcional a la concentración de 25 OH vitamina D presente en calibradores,
controles o muestras.
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1
4. MATERIAL SUMINISTRADO
Integrador de reactivos:
Partículas magnéticas
[SORB]
(2,4 ml)
Tampón de ensayo
[BUF|AS]
(28 ml)
Conjugado
[CONJ]
(4,5 ml)
Calibrador 1
(1 ml)
[CAL|1]
Calibrador 2
(1 ml)
[CAL|2]
Número de ensayos
Partículas magnéticas recubiertas con anticuerpo de cabra anti-25 OH
vitamina D, proteína, tampón fosfato, azida sódica al <0,1%.
®
Tampón con etanol al 10%, surfactantes y ProClin 300 al 0,2%.
25 OH vitamina D conjugada con un derivado de isoluminol, en tampón
fosfato con etanol al 10%, EDTA, surfactante y ácido benzoico al 0,1% como
conservante.
Suero humano, BSA, azida sódica al <0,1% y 25 OH vitamina D. Las
concentraciones del calibrador (ng/ml) se comparan con preparados
estándar que contengan 25 OH vitamina D altamente purificada.
Suero humano, BSA, azida sódica al <0,1% y 25 OH vitamina D. Las
concentraciones del calibrador (ng/ml) se comparan con preparados
estándar que contengan 25 OH vitamina D altamente purificada.
100
ProClin® 300 es una marca comercial registrada de Rohm and Haas Co.
Todos los reactivos suministrados están listos para su uso.
Materiales necesarios pero no suministrados (en función del sistema en uso)
LIAISON® XL Analyzer
LIAISON® Wash/System Liquid (REF 319100)
LIAISON® XL Waste Bags (REF X0025)
LIAISON® XL Cuvettes (REF X0016)
LIAISON® XL Starter Kit (REF 319200)
LIAISON® XL Disposable Tips (REF X0015)
LIAISON® Analyzer
LIAISON® Wash/System Liquid (REF 319100)
LIAISON® Waste Bags (REF 9450003)
LIAISON® Module (REF 319130)
LIAISON® Starter Kit (REF 319102),
LIAISON® XL Starter Kit (REF 319200)
LIAISON® Cleaning Kit (REF 310990)
LIAISON® Light Check (REF 319101)
Materiales adicionales necesarios:
LIAISON® 25 OH Vitamin D TOTAL
Control Set (n.º de cat. 310601)
LIAISON® 25 OH Vitamin D TOTAL
Specimen Diluent (n.º de cat. 310602)
5. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
SOLO PARA UTILIZAR EN DIAGNÓSTICOS IN VITRO: No debe utilizarse interna o externamente en seres
humanos ni animales.
REACTIVOS QUE CONTIENEN MATERIAL DE ORIGEN HUMANO
Atenciόn, trátense como potencialmente infecciosos.
Todas las unidades de suero/plasma de donantes usadas en la preparación de este producto se han comprobado
mediante un método aprobado por la FDA estadounidense y han resultado negativas para anticuerpos del virus de
inmunodeficiencia humana 1 y 2 (VIH 1/2), antígenos de superficie de la hepatitis B (VHB) y anticuerpos de la
hepatitis C (VHC). Aunque estos métodos son altamente precisos, no garantizan la detección de todas las unidades
infectadas. Este producto también puede contener otras enfermedades de origen humano para las cuales no existe
prueba homologada. Dado que ningún método de prueba conocido puede garantizar plenamente la ausencia de VIH,
VHB y VHC, u otros agentes infecciosos, todos los productos que contienen material de origen humano se deben
manipular con precaución y de conformidad con prácticas de laboratorio correctas, como se describe en los centros
para el Control de enfermedades y el manual actual de los institutos nacionales de salud, el protocolo de
bioseguridad de los laboratorios de biotecnología y biomédica (BMBL) o la edición actual del Manual de bioseguridad
en el laboratorio la Organización Mundial de la salud.
REACTIVOS QUE CONTIENEN AZIDA SÓDICA:
Algunos reactivos de este equipo contienen azida sódica. La azida sódica puede reaccionar con las cañerías de
plomo y cobre y formar azidas metálicas altamente explosivas. Al desecharlo, enjuague con abundante agua para
evitar que se acumule la azida. Para obtener información adicional, consulte “Decontamination of Laboratory Sink
Drains to Remove Azide Salts” en el manual Guide-Safety Management Nº CDC-22, publicado por los centros de
control y prevención de enfermedades (Centers for Disease Control and Prevention), Atlanta, GA, 1976.
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2
®
Reactivos que contienen ProClin 300
Los reactivos que contienen ProClin® 300 están clasificados como productos irritantes conforme a lo establecido por
las directivas europeas aplicables:
R 43 - Pueden causar sensibilización por contacto con la piel.
S 24 - No deben entrar en contacto con la piel.
S 37 - Deben manipularse con guantes adecuados.
S 60 - Este material y su recipiente deben desecharse como productos potencialmente peligrosos.
6. SEGURIDAD GENERAL:
• Todas las muestras, reactivos biológicos y materiales utilizados en el ensayo deben ser considerados como
transmisores potenciales de agentes infecciosos. Evite el contacto con la piel, los ojos y las membranas
mucosas. El ensayo debe realizarse respetando escrupulosamente las buenas prácticas higiénicas
industriales.
• Absténgase de comer, beber, fumar o aplicarse cosméticos en el laboratorio de ensayos.
• No pipetee las soluciones con la boca.
• Evite el contacto directo con todos los materiales potencialmente infecciosos; para ello se aconseja utilizar
batas de laboratorio, mascarillas y protectores oculares, además de guantes desechables.
• Lávese las manos a fondo después de cada ensayo.
• Evite las salpicaduras o la formación de aerosoles cuando manipule, diluya o transfiera muestras o reactivos.
Los reactivos derramados deben lavarse con una solución de lejía al 10% (que contengan hipoclorito sódico
0,5%) y eliminarse como si se tratara de material potencialmente infeccioso.
• La eliminación de los residuos debe efectuarse de conformidad con las disposiciones y normas generales
establecidas por las autoridades con jurisdicción sobre el laboratorio, y con las leyes vigentes en cada país.
• No utilice ningún kit o componente después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
7. PREPARACIÓN DEL INTEGRADOR DE REACTIVOS
A la hora de manipular los reactivos, tenga en cuenta las siguientes precauciones importantes:
1.
Resuspensión de partículas magnéticas
Antes de colocar el integrador en el instrumento, debe lograr la completa resuspensión de las partículas
magnéticas. Para ello, siga las instrucciones que se indican a continuación:

Antes de quitar el sello, gire la rueda pequeña del compartimento de partículas magnéticas hasta
que la suspensión adopte un color marrón. Agite suavemente y con cuidado de lado a lado para
facilitar la suspensión de las partículas magnéticas (sin formar espuma). Compruebe visualmente
la resuspensión de todas las partículas magnéticas depositadas en el fondo.

Repita el procedimiento cuantas veces sean necesarias hasta la completa resuspensión de las
partículas magnéticas.

Después de quitar el sello, limpie cuidadosamente la superficie de cada pared para eliminar los
posibles restos de líquido, si fuera necesario.
Como método alternativo, puede utilizar el LIAISON® Xcelerator (n.º de cat. A0090) para facilitar la
resuspensión.
2.
Formación de espuma en los reactivos
Para garantizar el resultado óptimo del integrador, debe evitarse la formación de espuma en los reactivos.
Para ello, siga esta recomendación:

Examine visualmente los reactivos, especialmente los calibradores (posiciones dos y tres después
del vial de partículas magnéticas), para comprobar que no hay espuma antes de utilizar el
integrador. Si hay espuma después de la resuspensión de las partículas magnéticas, coloque el
integrador en el instrumento y deje que la espuma se disipe. El integrador estará listo para su uso
cuando la espuma haya desaparecido y el integrador haya permanecido mezclándose en el
instrumento durante un mínimo de 30 minutos.
3.
Carga del integrador en el área de reactivos
LIAISON® Analyzer

Coloque el integrador en el área de reactivos del analizador con el código de barras mirando a la
izquierda y déjelo reposar durante 30 minutos antes de utilizarlo. El analizador agita automáticamente
las partículas magnéticas hasta su total resuspensión.

Siga las instrucciones del manual del analizador para cargar las muestras e iniciar el ensayo.
®
LIAISON XL Analyzer

El LIAISON® XL Analyzer lleva incorporado un dispositivo magnético en estado sólido que facilita
la dispersión de micropartículas antes de la colocación de un integrador de reactivos en la zona de
reactivos del analizador. Para obtener más información, consulte el manual del operador del
analizador.
a. Inserte el integrador de reactivos en la ranura correspondiente.
b. Deje el integrador de reactivos en el dispositivo magnético en estado sólido durante un
mínimo de 30 segundos (y un máximo de varios minutos). Repita el procedimiento cuantas
veces sean necesarias.
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3


Coloque el integrador en la zona de reactivos del analizador con la etiqueta hacia la izquierda y
déjelo reposar durante 15 minutos antes de utilizarlo. El analizador se agita automáticamente
hasta la completa resuspensión de las partículas magnéticas.
Siga las instrucciones del manual del operador del analizador para cargar las muestras e iniciar el
ensayo.
8. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DEL INTEGRADOR DE REACTIVOS
Tras su recepción, almacene el integrador de reactivos boca arriba y en la oscuridad para facilitar la resuspensión de
las partículas magnéticas. Si el integrador de reactivos se almacena cerrado, protegido de la luz y en posición vertical,
los reactivos son estables a 2-8 °C hasta la fecha de caducidad. No lo congele. El integrador de reactivos no debe
utilizarse después de la fecha de caducidad indicada en el equipo y en las etiquetas correspondientes. Después de
utilizarse, el integrador de reactivos debe sellarse con la cinta incluida en el equipo y almacenarse a 2-8 °C en la
oscuridad. Una vez abierto, puede utilizarse durante 4 semanas si se almacena correctamente. Debe evitarse la
exposición excesiva a la luz.
9. OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
Puede utilizarse suero humano, plasma EDTA, plasma con heparina de litio o tubos de suero con separador (SST).
Es recomendable tomar la muestra en ayunas, pero no es imprescindible. La sangre debe extraerse asépticamente por
punción venosa y dejarse coagular; el suero ha de separarse del coágulo lo antes posible. Las muestras pueden
almacenarse en viales de vidrio o plástico. Para mantener la integridad de la muestra no se requieren aditivos ni
conservantes. Las partículas sólidas pueden interferir en el ensayo. No deben analizarse las muestras muy
hemolizadas o lipémicas, ni las que contengan partículas o presenten una evidente contaminación microbiana. Si el
ensayo se efectúa durante las 120 horas siguientes a la recogida de la muestra, ésta debe almacenarse a 2-8 °C; en
caso contrario debe congelarse (-20 °C o menos). Si las muestras se guardan congeladas, mézclelas bien antes del
ensayo cuando las descongele. Evite ciclos repetidos de congelación y descongelación. Antes del ensayo, compruebe
si hay burbujas de aire y elimínelas. El volumen mínimo necesario es 250 µl de muestra para la primera prueba y 25 µl
®
más por cada prueba adicional con el ensayo LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL.
El plasma humano recogido en tubos con EDTA o heparina de litio registró una desviación media del 22% frente al
suero.
10. CALIBRACIÓN
La prueba de los calibradores específicos del ensayo permite que los valores detectados de unidades lumínicas
relativas ajusten la curva maestra predefinida. Cada solución de calibración permite realizar seis (6) calibraciones.
Es obligatorio repetir la calibración por triplicado siempre que se dé al menos una de estas condiciones:




Con cada nuevo lote de reactivos (integrador de reactivos o reactivos iniciadores).
Cada 7 días.
Después de cada tarea de reparación o mantenimiento del LIAISON® Analyzer.
Si los resultados del control de calidad quedan fuera del rango aceptable.
Rango de medida. El LIAISON® 25 OH Vitamin D TOTAL Assay de DiaSorin mide entre 4 y 150 ng/ml. El mínimo valor
presentable es 4 ng/ml, que se basa en una precisión interensayo próxima al 20% de CV (sensibilidad funcional). Los
valores inferiores a 4 ng/ml deben presentarse como <4 ng/ml. El máximo valor presentable sin dilución es 150 ng/ml.
11. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO
Para asegurar el resultado correcto del ensayo, siga estrictamente las instrucciones de funcionamiento del LIAISON®
Analyzer.
LIAISON® Analyzer: Cada parámetro del ensayo se identifica con un código de barras en el integrador de reactivos.
En caso de fallo en el funcionamiento del lector del código de barras, el cartucho no podrá utilizarse y deberá
desecharse. Para obtener más información, consulte el manual del operador del analizador.
LIAISON® XL Analyzer: Cada parámetro del ensayo se identifica mediante la información codificada en el
transpondedor de identificación por radiofrecuencia (etiqueta RFID) del integrador de reactivos. En caso de fallo en el
funcionamiento del código RFID, el cartucho no podrá utilizarse y deberá desecharse. Para obtener más información,
consulte el manual del operador del analizador.
Las operaciones del analizador son las siguientes:
LIAISON® Analyzer:
1. Dispensar la muestra, el calibrador o el control en el módulo de reacción.
2. Dispensar las partículas magnéticas y el tampón de ensayo en el módulo de reacción.
3. Incubar.
4. Dispensar el trazador en el módulo de reacción.
5. Incubar.
6. Lavar con líquido de lavado/sistema.
7. Agregar los reactivos iniciadores y medir la emisión de luz.
LIAISON® XL:
1. Dispensar las partículas magnéticas y el tampón de ensayo en el módulo de reacción.
2. Dispensar la muestra, el calibrador o el control en el módulo de reacción.
3. Incubar.
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4
4.
5.
6.
7.
Dispensar el trazador en el módulo de reacción.
Incubar.
Lavar con líquido de lavado/sistema.
Agregar los reactivos iniciadores y medir la emisión de luz.
Los resultados del inmunoensayo pueden verse afectados por las fluctuaciones de temperatura. Los usuarios deben
tener en cuenta las variaciones de temperatura en el entorno del laboratorio; puede ser necesario realizar controles y
efectuar las recalibraciones subsiguientes con más frecuencia.
12. CONTROL DE CALIDAD
Es recomendable efectuar un control de calidad por día de uso, o bien de conformidad con las normas o los requisitos
de acreditación locales, estatales o federales y los procedimientos de control de calidad del laboratorio. Se recomienda
consultar el documento C24-A2 de CLSI y el CFR 42 493.1256 para conocer las prácticas de control de calidad
®
adecuadas. El LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Control Set (n.º de cat. 310601) es idóneo para la determinación de
los requisitos de control de calidad de este ensayo.
Los controles LIAISON® deben realizarse de forma individual a fin de supervisar el resultado del ensayo.
Si los valores de control quedan fuera de los rangos previstos, el ensayo no será válido y no se podrán utilizar los
resultados del paciente.
Si un control queda fuera de rango, deberá investigarse y será necesario repetir la calibración. Los resultados de las
muestras de paciente asociadas al control quedarán invalidadas y las muestras deberán volver a analizarse.
Antes de utilizar otros controles, es preciso evaluar su efectividad para comprobar su compatibilidad con este ensayo.
Deberán establecerse rangos de valores apropiados para todos los materiales de control de calidad utilizados.
El rango de las concentraciones de cada control se indica en el certificado de análisis y detalla los límites establecidos
por DiaSorin para los valores de control que pueden obtenerse en series de ensayos fiables. Cada laboratorio deberá
establecer rangos propios basándose en sus criterios de aceptación del resultado del ensayo.
13. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
®
El LIAISON Analyzer calcula automáticamente la concentración de 25 OH vitamina D en la muestra. Esta concentración
se expresa en ng/ml. Para convertir los resultados a unidades del SI: ng/ml  2,5 = nmol/l.
Rango del ensayo: de 4 a 150 ng/ml
Aunque los calibradores y controles pueden mostrar resultados de unidades lumínicas relativas o dosis distintos en
el analizador LIAISON® y en el LIAISON® XL, los resultados del paciente son equivalentes.
14. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Para obtener resultados fiables son imprescindibles una técnica experta y el estricto cumplimiento de las
instrucciones.

La contaminación bacteriana de las muestras o los ciclos repetidos de congelación y descongelación
pueden afectar a los resultados del ensayo.

Los anticuerpos heterófilos presentes en suero humano pueden reaccionar con las inmunoglobulinas de los
reactivos o con otro material de los reactivos e interferir en los inmunoensayos in vitro.

Los pacientes expuestos de forma rutinaria a animales, a productos con suero animal o a otros productos
inmunogénicos que puedan suscitar la producción de anticuerpos heterófilos contra los reactivos del ensayo
pueden ser propensos a este tipo de interferencias y presentar valores anómalos.

Los resultados del ensayo deben utilizarse junto con otros datos clínicos o de laboratorio para ayudar al
médico a decidir qué tratamiento aplicar a cada paciente de una población adulta.

Los integradores no deben intercambiarse entre los distintos tipos de analizador (LIAISON® y LIAISON® XL).

El integrador que se introduzca en un analizador concreto deberá utilizarse siempre con el mismo
analizador hasta que se agote.

Debido a los problemas de trazabilidad que esto plantea, no es posible realizar seguimientos de pacientes
con distinto tipo de analizador. El seguimiento del paciente debe realizarse siempre en un tipo de analizador
concreto (ya sea LIAISON® o LIAISON® XL).
15. VALORES PREVISTOS
Rango de referencia
Es importante que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia con respecto a la población a la que
atiende. Es sabido que factores como la exposición a los rayos UV [16, 17], la estación del año [18, 19], la raza [20] y la
dieta [21] afectan a las concentraciones de 25 OH vitamina D en humanos. En muchos países se ha observado una alta
prevalencia de deficiencia subclínica de 25 OH vitamina D [3-8], especialmente durante los meses de invierno.
La revisión de la literatura sugiere los siguientes rangos para clasificar el estado de 25 OH vitamina D:
Estado de vitamina D
Deficiencia
Insuficiencia
Suficiencia
Toxicidad
es310600; 38242 7/12
25 OH vitamina D
<10 ng/ml
<25 nmol/l
10-30 ng/ml
25-75 nmol/l
30-100 ng/ml
75-250 nmol/l
>100 ng/ml
>250 nmol/l
5
DiaSorin evaluó 396 muestras de suero obtenidas de personas adultas. Las muestras se obtuvieron en distintas
estaciones y regiones geográficas de Estados Unidos. En este estudio no se han tenido en cuenta las muestras con
valores anormales de PTH, calcio y TSH. A partir de un intervalo de confianza del 95%, se establecieron los siguientes
valores conforme a la normativa C28-A2 de CLSI. Se obtuvieron los valores siguientes:
Rangos de referencia observados
Rango observado del
Media 25 OH vitamina D
2,5º al 97,5º percentil
Población (396)
Estados Unidos
24,9 ng/ml
9,3 ng/ml – 47,9 ng/ml
16. CARACTERÍSTICAS ESPECÍFICAS DEL RESULTADO
16.1 Sensibilidad funcional: Se define como la concentración de la dosis a la que el %CV excede del 20% y se
evaluó conforme al EP17-A de CLSI. Las muestras se prepararon a concentraciones nominales de 2-14 ng/ml y se
analizaron en varias series para determinar la concentración media y el %CV. La curva de concentración de la
muestra se trazó con respecto al %CV y se preparó una regresión para determinar la sensibilidad funcional. La
sensibilidad funcional derivada de la ecuación de regresión es de ≤4 ng/ml.
16.2 Método comparativo: Un total de 587 muestras, con entre 3,6 – 153,2 ng/ml, se analizaron con LIAISON®
25 OH Vitamin D TOTAL y con DiaSorin 25 OH Vitamin D RIA, conforme al EP9-A2 de CLSI. Los datos de las
regresiones lineales resultantes se resumen en la tabla y el gráfico siguientes.
Ensayo
N
RIA
587
Pendiente
(IC 95%)
1,047 (1,02–1,07)
Intersección
(IC 95%)
2,41 (1,43–3,40)
Coeficiente de
correlación
0,936
Err est.
est.
7,116
Desviación
media
4,083
Desv. est. de
diferencias
7,212
LIAISON 25 OH D comparado con RIA
Comparación de métodos (n = 587)
160
y = 1,0467x + 2,4088
LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL
(ng/ml)
140
2
R = 0,9358
120
100
80
60
40
20
0
0
20
40
60
80
100
120
140
160
RIA (ng/ml)
16.3 Precisión con el LIAISON® Analyzer:
La precisión del ensayo se evaluó según el EP5-A2 de CLSI. Se analizaron por duplicado seis muestras de suero con
distintas concentraciones de analito y controles del equipo, en dos ensayos por día durante 20 días de trabajo y utilizando
dos lotes. Las muestras se analizaron internamente en DiaSorin Inc y en 2 instalaciones externas. Se obtuvieron los
resultados siguientes:
ID de la
muestra
Media
(ng/ml)
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Muestra 4
Muestra 5
Muestra 6
Muestra 7
Muestra 8
7,9
12
18
20,4
24,3
56,8
61,8
112,1
es310600; 38242 7/12
Datos intraserie entre lotes
e instalaciones
DE
%CV
0,6
7,7%
0,7
5,8%
0,9
5%
1,0
5%
1,2
5%
2,9
5%
3,0
4,9%
5,4
4,8%
6
Datos totales entre
lotes e instalaciones
DE
%CV
1,0
12,6%
1,3
11,1%
1,7
9,7%
2,1
10,4%
2,6
10,6%
5,8
10,3%
5,8
9,5%
12,2
10,8%
Los resultados siguientes se obtuvieron analizando las mismas ocho muestras en una instalación, en un ensayo por
duplicado, en dos ensayos por día durante 20 días de trabajo y utilizando un lote del equipo.
ID de la
muestra
Media
(ng/ml)
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Muestra 4
Muestra 5
Muestra 6
Muestra 7
Muestra 8
7,9
12,2
17,6
20,7
24,0
56,8
60,8
109,6
Datos intraserie por
lote e instalación
DE
%CV
0,6
7,7%
0,6
5,2%
0,8
4,8%
1,1
5,1%
1,0
4,1%
2,3
4%
2,2
3,7%
4,6
4,2%
Datos totales por
lote e instalación
DE
%CV
0,9
10,9%
1,1
9,3%
1
5,8%
1,9
9,1%
1,8
7,7%
3,6
6,3%
3,7
6%
7,8
7,2%
16.4 Precisión con el LIAISON® XL Analyzer:
La precisión del ensayo con el LIAISON® XL Analyzer se evaluó según el EP5-A2 de CLSI. Se analizaron por duplicado
seis muestras de suero con distintas concentraciones de analito y controles del equipo, en dos ensayos por día durante
20 días de trabajo y utilizando un lote de reactivo. Para el análisis de las muestras se utilizaron dos analizadores
LIAISON® XL Analyzer. Se obtuvieron los resultados siguientes:
ID de la
muestra
Media
(ng/ml)
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Muestra 4
Muestra 5
Muestra 6
Muestra 7
Muestra 8
7,85
17,2
19,6
22,8
51,9
55,2
109,3
120,5
Intraserie
DE
%CV
0,3
3,8%
0,6
3,2%
0,4
2,3%
0,4
1,8%
1,0
2%
1,7
3,1%
2,1
1,9%
0,2
0,1%
Total
DE
0,8
1,5
1,4
2,0
3,1
3,6
6,9
11
%CV
9,8%
8,9%
7,3%
8,9%
6,0%
6,4%
6,3%
9,1%
16.5 Veracidad
La veracidad del ensayo se comprobó con las pruebas de dilución y recuperación.
Prueba de dilución. La linealidad se evaluó según el EP6-A de CLSI. Se analizaron dos (2) pools de muestras
previamente diluidas con el diluyente de muestras LIAISON® 25 OH Vitamin D TOTAL Specimen Diluent (PN 310602).
Los resultados se analizaron como una regresión lineal de los valores previstos frente a los valores observados.
La ecuación de regresión resultante es la siguiente: Observados = Previstos 1,01x -0,180; R2 = 0,995. Las dosis de las
muestras oscilaron entre 3,8 y 151 ng/ml.
Linealidad de LIAISON 25 OH
Vitamin D TOTAL Suero y SST
160
Concentración de vitamina D observada
140
y = 1,0126x - 0,1803
2
R = 0,9954
120
100
80
60
40
20
0
0
20
40
60
80
100
120
Concentración de vitamina D prevista
es310600; 38242 7/12
7
140
160
Prueba de recuperación. Se mezclaron muestras con concentración alta y muestras con concentración baja en
proporciones de 1:2, 1:1 y 2:1. A continuación se compararon los valores observados con los previstos a fin de
determinar el % de recuperación. El promedio de recuperación fue del 93%.
Concentración prevista (ng/ml)
Concentración observada (ng/ml)
% de recuperación
86,4
68,8
51,1
-
121
77,8
58,4
46,4
16,9
90%
85%
91%
-
81
64,9
48,9
-
112
77,4
60,3
48,7
17,7
96%
93%
100%
-
84,7
65,9
47,1
-
121
80,3
59,9
42,5
10,6
95%
91%
90%
-
44,7
37
29,3
-
59,6
42,8
35,5
27,4
14,3
96%
96%
94%
-
47,6
38,5
29,5
-
65,2
45,3
36,6
28,2
11,9
95%
95%
96%
-
Promedio de recuperación
93% (85%-100%)
Muestra 1
Alta sin diluir
2 A:1 B
1 A:1 B
1 A:2 B
Baja sin diluir
Muestra 2
Alta sin diluir
2 A:1 B
1 A:1 B
1 A:2 B
Baja sin diluir
Muestra 3
Alta sin diluir
2 A:1 B
1 A:1 B
1 A:2 B
Baja sin diluir
Muestra 4
Alta sin diluir
2 A:1 B
1 A:1 B
1 A:2 B
Baja sin diluir
Muestra 5
Alta sin diluir
2 A:1 B
1 A:1 B
1 A:2 B
Baja sin diluir
16.6 Especificidad
La reactividad cruzada se analizó según lo descrito en el EP7-A2 de CLSI. Los datos sobre reactividad cruzada del
antisuero utilizado en este ensayo se han obtenido añadiendo hasta 100 ng/ml del posible reactivo cruzado y
procediendo a su análisis. A continuación se indica la reactividad cruzada de cada compuesto, normalizada a 25 OH
vitamina D3. El anticuerpo utilizado en el ensayo demostrará la reactividad cruzada con numerosos metabolitos
dihidroxilados de la vitamina D.
Esteroide
25 OH vitamina D2
25 OH vitamina D3
Vitamina D2
Vitamina D3
1,25-(OH)2 vitamina D2
1,25-(OH)2 vitamina D3
3-epi-25 OH vitamina D3
es310600; 38242 7/12
% de reactividad cruzada
100%
100%
1,9%
1,9%
6,7%
9,3%
1,3%
8
16.7 Interferencia de otras sustancias
Las interferencias de otras sustancias se analizaron según se describe en el EP7-A2 de CLSI utilizando el LIAISON®
25 OH Vitamin D TOTAL Assay. Se obtuvieron los resultados siguientes.
Muestras que estaban
Hemolizadas
Lipémicas
Ictéricas
Ictéricas
Muestras que contenían
Colesterol
Ácido úrico
Proteína total
Demuestran un cambio de <10% en los
resultados hasta
200 mg/dl de hemoglobina
589 mg/dl de triglicéridos
40 mg/dl de bilirrubina conjugada
40 mg/dl de bilirrubina no conjugada
Demuestran un cambio de <10% en los
resultados hasta
301 mg/dl
20 mg/dl
12 g/dl
DiaSorin Inc.
1951 Northwestern Avenue
P.O. Box 285
Stillwater, MN 55082-0285
es310600; 38242 7/12
DiaSorin S.p.A.,
13040 Saluggia (VC) Italy
9
DiaSorin Inc
1951 Northwestern Ave - Stillwater, MN 55082 - EE.UU.
Tel. +1.651.439.9710 - Fax +1.651.351.5669
LIAISON® 25 OH Vitamin D TOTAL Specimen Diluent Set (310602)
1. INDICACIONES
®
El LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Specimen Diluent puede utilizarse para diluir muestras con valores
®
superiores a 150 ng/ml mediante el LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Kit (310600).
2. RESUMEN Y EXPLICACIÓN DEL TEST
®
El LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Specimen Diluent Set puede utilizarse para diluir muestras con
valores elevados de 25 OH vitamina D en el rango de análisis. Se recomienda una dilución de 1 parte de
muestra del paciente por 3 partes de diluyente.
3. MATERIAL SUMINISTRADO
®
Con el LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Specimen Diluent Set se suministran los siguientes materiales:
4 viales (5 ml cada uno) que contienen tampón con proteína, surfactantes y ProClin® 300 al 0,2%.
Materiales disponibles pero no suministrados:
 Pipetas calibradas capaces de manipular volúmenes de 75 μl y 225 μl.
 Tubos de vidrio para muestras (12 x 75 mm).
4. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Los reactivos que contienen ProClin® 300 se clasifican como irritantes según las Directivas Europeas
aplicables:
R 43 - Posibilidad de sensibilización en contacto con la piel.
S 24 - Evítese el contacto con la piel.
S 37 - Úsense guantes adecuados.
S 60 - Elimínense el producto y su recipiente como residuos peligrosos.
5. PREPARACIÓN Y USO
El LIAISON® 25 OH Vitamin D Specimen Diluent Set se suministra en estado líquido y debe guardarse a
2-8 °C. Mezcle bien mediante una inversión suave antes de utilizarlo. Transfiera unos 75 µl de muestra
del paciente al tubo de cristal o de plástico y añada 225 µl de diluyente de muestras. Agite suavemente en
vórtex. Deseche los restos no utilizados de la muestra que queden en el tubo después del ensayo. Todos
®
los lotes de diluyente de muestras se pueden intercambiar con los lotes del equipo LIAISON 25 OH
Vitamin D TOTAL Assay.
6. CONSERVACIÓN
Almacene el LIAISON® 25 OH Vitamin D TOTAL Specimen Diluent Set a 2-8 °C en cuanto lo reciba. Si se
conserva a 2-8 °C, el diluyente de muestras se mantiene estable hasta la fecha de caducidad indicada en
los viales. Entre los indicios de posible deterioro se ha observado la presencia de partículas en el líquido o
la desviación notable con respecto a resultados anteriores.
7. LIMITACIONES
Para obtener resultados fiables son imprescindibles una técnica experta y el estricto cumplimiento de las
instrucciones. Si los reactivos se almacenan incorrectamente o surgen errores técnicos, pueden
producirse resultados discordantes. Los resultados del ensayo deben utilizarse junto con otros datos
clínicos y de laboratorio para ayudar al médico a decidir qué tratamiento aplicar a cada paciente.
®
El LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Specimen Diluent Set está diseñado para utilizarse con el
®
LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Assay (310600) y la familia de analizadores quimiluminiscentes
®
LIAISON .
ProClin® 300 es una marca comercial registrada de Rohm and Haas Co.
DiaSorin, Inc.
1951 Northwestern Avenue
P.O. Box 285
Stillwater, MN 55082-0285
es310602; 35019 10/10
DiaSorin S.p.A.,
13040 Saluggia (VC) Italy
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