LIMITACIONES

•VALOR
DIANA
•VALOR
DIANA
•MÉTODO
ALTERNATIVO A
•ALTA
PROBABILIDAD
ACEPTACIÓN
•LÍMITE DE
ACEPTACIÓN
•LÍMITE DE
ACEPTACIÓN
•REGIÓN DE
ACEPTACIÓN
•MÉTODO
ALTERNATIVO B
•BAJA
PROBABILIDAD
ACEPTACIÓN
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•REGIÓN DE
ACEPTACIÓN
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Certificación de Métodos Alternativos
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> Organismos de Certificación:
•En la actualidad, existen diversos organismos que CERTIFICAN la
validez de métodos alternativos:
•AFNOR VALIDATION (http://www.afnor-validation.org/)
•AOAC RI(http://www.aoac.org/)
•MICROVAL (http://www.microval.org/)
•NordVal: (http://www.nmkl.org/NordVal/NordVal.htm)
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> Ventajas y Limitaciones:
VENTAJAS:
•Garantizar validez del método, ventajas y limitaciones.
•Calidad en la fabricación del kit
•Revisión y actualización de métodos
•Evaluación por organismo independiente (Rto. 2073)
LIMITACIONES:
•Proceso Lento
•Coste importante
•Requiere de métodos optimizados y robustos
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Certificación de
métodos
alternativos
Métodos certificados por patógenos
35
30
25
AFNOR
20
MicroVAL
15
AOAC
10
5
Ca
m
py
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0
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Certificación de
métodos
alternativos
Métodos certificados por tecnologías
AFNOR
AOAC
Inmunoenzimática
Inmunoenzimática
Genética
Genética
Cultivo
Cultivo
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Verificación interna
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MÉTODO ALTERNATIVO
> Árbol de decisión
NO
¿VALIDADO?
VALIDAR (ISO 16140)
SI
CERTIFICADO
¿CERTIFICADO?
CUALITATIVO
•Nivel detección Relativa
•Exclusividad/Inclusividad
•Eficacia, sensibilidad y especificidad
•Desviación negativa y positiva
NO
SI
VALIDACIÓN
¿Es completa
la validación?
CUANTITATIVO
Límite detección y cuantificación.
-Linealidad y precisión.
-Sensibilidad
NO
SI
COMPROBAR EL FUNCIONAMIENTO
CUALITATIVO
•Nivel detección Relativa
CUANTITATIVO
•Recuperación
•Precisión
Registros y evaluación del
funcionamiento
•Matrices
•Analistas
•Equipos
•Reactivos
Criterios Control de
Calidad Interno
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TAREA DEL
LABORATORIO
DE ANÁLISIS
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> Consideraciones Generales
•Consiste en comprobar que es capaz de cumplir con los requisitos
de funcionamiento del método en las condiciones HABITUALES Y
REALES de trabajo.
•Trabajar en condiciones de REPRODUCIBILIDAD
INTRALABORATORIO: Diferentes días, matrices, lotes de reactivos,
analistas, etc…
•En el caso se debe utilizar el método alternativo TAL Y COMO HA
SIDO DISEÑADO por el fabricante y detectar las LIMITACIONES en
su aplicación en mi laboratorio (matrices, microorganismos…)
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> Consideraciones Generales
•Formalmente, el método debe verificarse ANTES de emitir
resultados.
•En
algunos
casos
(métodos
ampliamente
reconocidos
y
validados) puede comprobarse a través de CONTROL DE CALIDAD
INTERNO,
siempre
que
su
diseño
sea
similar
al
indicado
anteriormente.
•También
pueden
emplearse
resultados
procedentes
EJERCICIOS INTERCOMPARATIVOS, aunque en este
de
caso el tipo
de matrices a analizar no suele ser representativo de muestras
reales.
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> Consideraciones Generales
•No se puede verificar una matriz que NO se encuentre en el
alcance del método a verificar.
•Debe emplearse al menos una matriz para las que el método
haya sido evaluado.
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> Matrices a verificar
•Las
HABITUALMENTE ANALIZADAS en el laboratorio (entre
30 y 50 muestras de diferentes productos).
+
•Si se desea comprobar para
TODO TIPO DE ALIMENTOS,
muestras diferentes de 3 a 5 categorías (total entre 30 y 50
muestras) tomando como referencia el Anexo B ISO 16140
Carnes y producto cárnicos
Pescados y mariscos
Aves de corral
Frutas y verduras
Productos lácteos
Chocolate/productos panadería
Otros productos (especias, salsas,
huevos, pastas, cereales, bebidas)
Alimentación animal
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> Matrices a verificar
•Las matrices deben contener la flora habitualmente presente (no
esterilizar) e idealmente contaminación natural del
microorganismo diana.
•OPCIÓN 1: Muestras naturalmente contaminadas.
•OPCIÓN 2: Contaminación por mezcla.
•OPCIÓN 3: Muestras contaminadas artificialmente.
•OPCIÓN 4: Materiales de referencia.
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Verificación
(Recuento)
de
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Método
Cuantitativo
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> Diseño experiencias:
MUESTRA DE ALIMENTO
CONTAMINACIÓN
ARTIFICIAL
(SI ES NECESARIO)
CONDICIÓN A
CONDICIÓN B
Valor/Met. Referencia
SOLUCIÓN MADRE
SOLUCIÓN MADRE
SOLUCIÓN MADRE
ANALISIS
ANALISIS
ANALISIS
Resultado A
Resultado B
Resultado R
CONDICIONES DIFERENTES
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> Diseño experiencias:
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> Diseño experiencias:
Si tenemos implantado el método de referencia, analizamos también la muestra
por dicho método (una única vez) para obtener el valor de referencia.
Si no disponemos se puede emplear como valor el del material de referencia
(propio o ya preparado comercialmente)
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> Parámetros a estimar:
> RECUPERACIÓN.
1.- Calcular la diferencia (en valor logarítmico) el Resultado A con el
Resultado R (valor de referencia) así como del Resultado B con el
Resultado R en cada caso y obtener el sesgo a partir del valor medio de
todas las diferencia (en log ufc/g)
RESULTADO R
RESULTADO A
RESULTADO B
R (Log ufc/g)
A (log ufc/g)
B(log ufc/g)
Dif R-A
Dif R-B
2,30E+05
3,50E+05
4,10E+05
5,36
5,54
5,61
-0,18
-0,25
3,20E+03
4,50E+03
3,50E+03
3,51
3,65
3,54
-0,15
-0,04
8,90E+04
7,50E+04
8,20E+04
4,95
4,88
4,91
0,07
0,04
2,50E+02
5,00E+02
3,40E+02
2,40
2,70
2,53
-0,30
-0,13
3,60E+04
2,50E+04
2,80E+04
4,56
4,40
4,45
0,16
0,11
Promedio diferencias (D)
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-0,07
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> Parámetros a estimar:
> RECUPERACIÓN.
1.- Comparar con el sesgo (Bias) del certificado. En caso de grandes
discrepancias puede realizarse un estudio estadístico de las mismas
Promedio diferencias (D)
-0,07
2.- También puede estimarse a partir de este valor la recuperación del
método:
Recuperación = 10(D) = 10-0.07 = 0,86 = 86%
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