extracción de adn de guisantes

Departamento Biología y Geología
IES Alfonso X el Sabio
Prácticas Biología y Geología 4º ESO
EXTRACCIÓN DE ADN DE GUISANTES
El objetivo de esta práctica es extraer ADN celular y poner de manifiesto su
estructura fibrilar y el grado de enrollamiento, que permite su empaquetamiento
dentro del núcleo de la célula.
MATERIAL NECESARIO
Guisantes congelados
Arena si se usa mortero
Colador
Mortero o batidora
Agua destilada
Detergente
Alcohol etílico
Sal común
Pipeta
Varilla de vidrio
Vaso de precipitados
Embudo y papel de filtro
Tubo de ensayo
Porta y cubre
Microscopio
FUNDAMENTO: El ADN se encuentra en el núcleo celular, muy replegado y unido a proteínas formando
la cromatina. Para extraerlo es necesario homogeneizar el tejido, romper las células para separar el
núcleo, romper éste y liberar el ADN, separar las proteínas y precipitarlo para extraerlo de la solución. El
ADN aparecerá como un agregado de fibras blanquecinas que se adhiere a la varilla de vidrio. Se puede
teñir con colorantes básicos y verlo al microscopio.
PROCEDIMIENTO
Importante: Tras cada paso debes explicar su fundamento en los huecos de la hoja de prácticas
1. Poner guisantes en un mortero y triturarlos con un poco de agua en el mortero con arena, o con una
batidora. Añadir 50 ml de agua y mezclar a fondo.
2. Preparar una mezcla tampón con los siguientes ingredientes y mantener en frío:
- 120 ml de agua destilada
- 1,5 g de sal
- 5 g de bicarbonato sódico
- 5 ml de detergente o champú
Indicar qué función tienen la sal, el bicarbonato y el detergente.
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Prácticas Biología y Geología 4º ESO
3. Mezclar en un vaso de precipitados 5 ml del triturado con 10 ml de la mezcla tampón y agitar durante
2 minutos procurando que no salga espuma.
4. Filtrar varias veces la mezcla a través de un colador y de un trozo de tela o papel de filtro.
5. Retirar 5 ml de la mezcla filtrada a un tubo de ensayo y añadir 10 ml de etanol enfriado a 0ºC. HAY
QUE VERTER EL ALCOHOL CON CUIDADO, DEJÁNDOLO RESBALAR POR LA PARED DEL TUBO MIENTRAS
SE MANTIENE ESTA INCLINADO. El alcohol quedará flotando sobre el filtrado.
6. El ADN aparece en la interfase alcohol-filtrado como grumos blancos. Introducir una varilla de vidrio o
un palillo hasta justo la separación entre el alcohol y el triturado y girar suavemente la varilla mientras
se extrae. Así se le irán pegando unas hebras blancas que corresponden a miles de fibras de ADN (Nota:
Realmente son fibras de ADN y fragmentos de ARN; en una separación profesional se añaden enzimas que impiden que el
ARN se una al ADN)
7. Se puede tomar una muestra del ADN obtenido y teñirlo con azul de metileno entre 1-3 minutos, y
observar al microscopio, dibujando lo observado.