D-Dimer PLUS

D-Dimer PLUS
Reagents for the turbidimetric determination of cross-linked fibrin degradation products (D-Dimer)
Intended Use
D-Dimer PLUS is a latex-enhanced turbidimetric test for the quantitative determination of
cross-linked fibrin degradation products (D-Dimer) in human plasma.
Summary and Explanation
Coagulation activation results in the cleavage of fibrinogen to fibrin. The resulting fibrin molecules
spontaneously aggregate and are cross-linked by Factor XIII; this produces a fibrin clot. The activation of the fibrinolytic system results in the conversion of plasminogen into the active protease
plasmin which cleaves fibrinogen and fibrin into the fragments D and E. Due to the cross-linkages
between the D-domains in the fibrin clot, the action of plasmin releases fibrin degradation products
with cross-linked D-domains. The smallest unit is the D-Dimer. Detection of cross-linked degradation products, of D-Dimers, thus is indicative of reactive fibrinolysis1. The relevance of the D-Dimer
assay is in the diagnosis of thromboembolic events. Elevated concentrations of D-Dimer are indicative of the presence of a clot and have been reported in deep vein thrombosis2, pulmonary embolism3,4 and disseminated intravascular coagulation5. If D-Dimer results are below the decision threshold, thromboembolic events can be excluded with a test-specific negative predictive value (NPV).
Principle of the Method
Polystyrene particles covalently linked to a monoclonal antibody (DD5) to the cross-linkage region of
cross-linked fibrin degradation products (D-Dimer) are agglutinated when mixed with samples containing D-Dimer. The cross-linkage region has a stereosymmetrical structure, i.e. the epitope for the
monoclonal antibody occurs twice. Consequently, one antibody suffices in order to trigger an agglutination reaction, which is then detected turbidimetrically via the increase in turbidity.
Reagents
Materials provided
Test kit, Code No. OQWW 11, containing
6 vials, each for 4 mL, of D-Dimer PLUS Reagent
6 vials, each for 5 mL, of D-Dimer PLUS Accelerator
1 vial of 25 mL D-Dimer PLUS Reconstitution Medium
Composition
D-Dimer PLUS Reagent, lyophilized; contains polystyrene particles, mouse monoclonal antibodies, human serum albumin, tricine (0.02 mol/L), sucrose (maximum 50 g/L).
Preservative:
sodium azide (< 1 g/L)
D-Dimer PLUS Accelerator, lyophilized; prepared from pooled plasma from selected healthy donors, and supplemented with a standardized D-Dimer reference preparation, stabilized with Hepes
Buffer Solution (12 g/L) and lyophilized.
Preservatives:
5-chloro-2-methyl-4-isothiazole-3-one and
2-methyl-4-isothiazole-3-one (maximum 10 mg/L)
D-Dimer PLUS Reconstitution Medium, liquid; physiological buffered saline.
Preservative:
sodium azide (< 1 g/L)
Warnings and Precautions
1. For in vitro diagnostic use.
2. Reagents containing sodium azide must be handled with due caution:
Do not ingest or allow to contact skin or mucous membranes. Sodium azide can form explosive
azides when contacting heavy metals such as copper or lead. If discarded into drain, flush with
a large volume of water to prevent azide build-up.
3. D-Dimer PLUS contains components of human origin. Each individual blood donation intended
for the production of these components has been tested for HBsAg, anti-HCV, anti-HIV1 and
anti-HIV2. Only donations with negative findings are employed. Nevertheless, since absence of
infectious agents cannot be proven, all materials obtained from human blood should always be
handled with due care, observing the precautions recommended for biohazardous material6.
Preparation of the Reagents
The kit contains a set of components from specific reagent lots. The use of reagent lots other than
those listed on the kit can lead to incorrect results.
Dissolve a vial of D-Dimer PLUS Reagent in 4 mL D-Dimer PLUS Reconstitution Medium and allow
to stand at room temperature (+15 to +25°C) for approximately 5 minutes with occasional swirling.
Place the reagent into a reagent position on the coagulation analyzer.
Dissolve a vial of D-Dimer PLUS Accelerator in 5 mL distilled water and allow to stand at room temperature (+15 to +25°C) for approximately 15 minutes with occasional swirling. Place the reagent into a
reagent position on the coagulation analyzer. Shake the reagents briefly before use.
Storage and Stability
Stored unopened at +2 to +8°C, the test kit remains stable until the labeled expiry date.
Stability after Reconstitution / once opened (closed vial):
Temperature
+2 to +8 °C
≤ -18 °C•
D-Dimer PLUS
Reagent
5 days
2 weeks
D-Dimer PLUS
Accelerator
5 days
2 weeks
D-Dimer PLUS
Reconstitution Medium
12 weeks
value obtained must be within the confidence interval given in the table of assigned values. If the
values obtained are outside of the confidence interval, the measurement must be repeated. If the
repeated measurement confirms the deviations, the system must be recalibrated.
Results
The D-dimer concentration in µg/L is calculated automatically by the coagulation analyzer based on the reference curve.
Limitations of the Procedure
Suitable coagulation analyzers are those for which assay protocols are provided by Dade Behring.
In a study the levels of the following did not appear to interfere with the D-Dimer PLUS assay:
Up to
Heparin
2.5 IU/mL
Rheumatoid Factor 98 IU/mL
Bilirubin, Hemoglobin and Lipids are described in the instrument-specific assay protocols.
Human Anti-Mouse Antibodies (HAMA) testing has not been performed with the D-Dimer PLUS assay.
However, plasma samples from patients containing heterophilic antibodies, and from patients who
have received preparations of mouse monoclonal antibodies for diagnosis or therapy may show either
falsely elevated or falsely decreased values when tested with assay kits that use mouse monoclonal
antibodies. Irrespective of the D-Dimer concentration, unspecific reaction profiles may occur in isolated
cases and dilution of samples may therefore result in deviant results in certain cases7.
Reference Interval
In a study with ostensibly healthy subjects (n=136) using the BCS® the following data were obtained:
mean: 141.7 µg/L; median: 126.4 µg/L; central 90% interval: 63.8-246.4 µg/L. Reference values vary
from laboratory to laboratory and depending on the technique used. Elevated D-Dimer levels were
measured during pregnancy and while taking oral contraceptives, as well as with increased age,
physical activity, stress and various clinical situations. To cover all the factors influencing the results,
each laboratory should establish its own reference ranges/clinical decision limits for the population for
which it provides its service. Increases in D-dimer concentration observed with thromboembolic events
can be variable due to localization, extension and age of the thrombus. Therefore, a thromboembolic
event cannot be excluded with certainty solely on the basis of a D-dimer concentration being within the
reference range of ostensibly healthy persons4. The results of D-Dimer determinations must therefore
be interpreted in connection with other laboratory findings as well as clinical data.
Specific Performance Characteristics
Measuring Range and Sensitivity
The D-Dimer PLUS total measuring range on the BCS® extends from 50 to 6500 µg/L. This total
measuring range is achieved by two methods, which have to be calibrated separately (D-Dimer low:
50 – 800 µg/L; D-Dimer high: 750 – 6500 µg/L). When concentrations are above the measuring
range the sample can be diluted in physiological sodium chloride solution.
Specificity
In a study there was no significant effect on the levels of fibrinogen or fibrinogen degradation product fragment D:
Up to
FgDp fragment D
20 mg/L
Fibrinogen
9 g/L
Higher levels of fibrinogen or fibrinogen degradation product fragment D can lead to falsely elevated
or decreased values.
Precision
Precision studies were performed on the BCS® by the evaluation of D-Dimer Control Plasma I and II
and two levels of human plasma (normal and pathological). The coefficient of variation within run
(intra-assay precision) ranged from 1.3 % to 3.0 %, while the coefficient of variation from day to day
(inter-assay precision) ranged form 0.8 % to 3.8 %.
Method Comparison
The D-Dimer PLUS assay was compared to a commercially available D-dimer assay by evaluation
of 43 plasma samples ranging from 136 to 2216 µg/L. A correlation coefficient of 0.99 was obtained,
with a y-intercept value of -109 and a slope of 1.21.
The values cited for the specific performance characteristics of the assay represent typical results and
are not to be regarded as specifications for D-Dimer PLUS.
Diagnostic Sensitivity and Specificity
In studies with patients suspected for deep leg vein thrombosis or pulmonary embolisms, the following results were achieved with the D-Dimer PLUS Test* (95% confidence interval):
Instrument
BCS®8
Decision Threshold
160 µg/L
BCT**9
130 µg/L
130 µg/L
Sysmex
CA-1500
System*10
®
Sensitivity (%)
100
(78.2-100)
96.8
(91-99.3)
95,5
(88.9-98.8)
Specificity (%)
40
(33.2-47.2)
45.2
(38.5-51.8)
47.8
(40.8-54.9)
• Do not refreeze.
The design of the study is described in the respective publications.
Materials required but not provided
Physiological saline solution
D-Dimer PLUS Standard Plasma, Code No. OQXA 11
D-Dimer Control Plasma I, Code No. OQKA 11
D-Dimer Control Plasma II, Code No. OQKB 11
Coagulation Analyzer (see Limitations of the Procedure)
Distilled water
Pipettes
Bibliography
Specimens
To obtain the plasma, carefully mix 1 part sodium citrate solution (0.11 mol/L) with 9 parts venous
blood, avoiding the formation of foam. Immediately centrifuge for 10 minutes at approximately 3000
rpm (1500 x g) and remove the supernatant plasma.
Stability of the sample:
+15 to +25 °C
4 hours (fresh)
≤ -18 °C
1 month
Plasma stored at ≤ -18°C is to be thawed within 10 minutes at +37 °C after which the assay is to be
performed within 2 hours. Do not refreeze.
Procedure
All steps necessary for preparing the run and performing the measurements are processed automatically by the suitable coagulation analyzer. Special assay protocols for coagulation analyzers are
available from Dade Behring on request. Follow manufacturer's instruction manual!
The use of D-Dimer PLUS on other coagulation analyzers must be validated by the test laboratory. In
such cases, the performance characteristics may differ from those stated.
Calibration
The D-Dimer PLUS Standard Plasma concentration is given on the vial label in µg/L. The results
can be converted to µg/L FEU (fibrinogen equivalent units) by multiplying with a factor of 2. The
necessary dilutions of the standard are prepared automatically by the coagulation analyzer. A new
calibration curve should be prepared when a new calibration is indicated by control results and
when a new lot of D-Dimer PLUS Reagent is in use.
Internal Quality Control
Each day that the test is used, the D-Dimer controls must be run at least every 8 h for the relevant
range in order to show that the system is functioning correctly. D-Dimer Control Plasma I is used for
control of the lower range and D-Dimer Control Plasma II is used for the upper range. The analytical
OQWW G11 C0541 (735) W/H
1
Edition May 2003
NPV (%)
100
(95.5-100)
97.0
(91.6-99.4)
97.6
(90.3-98.9)
Number of samples
215
312
294
1. A.Z. Budzynski, V.J. Marder, M.E. Parker et al.: Antigenic markers on fragment DD, a unique
plasmic derivative of human crosslinked fibrin. Blood 54: 794, 1979
2. O. Bongard, J. Wicky, R. Peter et al.: D-Dimer plasma measurement in patients undergoing
major hip surgery: use in the prediction and diagnosis of postoperative proximal vein thrombosis.
Thromb. Res. 74: 487, 1994
3. H. Bounameaux, P de Moeloose, A. Perrier et al.: D-Dimer testing in suspected venous thromboemolism: an update. Q J Med 90: 437, 1997
4. E.J.R. van Beek, B.v.d. Ende, R. J. Berckmans,et al.: A comparative analysis of D-Dimer assays
in patients with clinically suspected pulmonary embolism. Thromb. Haemost. 70: 408, 1993
5. E.G. Bovill: Disseminated intravascular coagulation: pathophysiology and laboratory diagnosis.
Fibrinolysis 7: 17, 1993
6. U.S. Department of Health and Human Services CDC, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, HHS Publication (CDC) 93-8395; 1999; Section II; 8-16
7. D.R. Ellis, A.S. Eaton, M.C. Plank et al.: A comparative evaluation of ELISAs for D-Dimer and
related fibrin(ogen) degradation products. Blood coagulation and Fibrinolysis 4: 537, 1993
8. P. Toulon, C. Ritling, C. Lecourvoisier et al.: Performance of a new fully automated quantitative
Assay for D-Dimer, D-Dimer PLUS, in diagnosis of Pulmonary Embolism. Leiden Fibrinolysis &
Proteolysis Workshop 8, April 26-27, 2001
9. G. Reber, H. Bounameaux, A. Perrier et al.: Performance of a new, automated latex assay for the
exclusion of venous thromboembolism. Blood Coagulation and Fibrinolysis 2001, 12:217-220
10. G. Reber H. Bounameaux, A. Perrier et. al: Evaluation of Advanced D-Dimer assay for the exclusion of venous thromboembolism. Thrombosis Research 2002, 107: 197-200
* The D-Dimer PLUS Test is technically identical to the US version Advanced D-Dimer. DDimer PLUS concentrations in µg/L may be obtained by dividing the results in mg/L for Advanced D-Dimer by 0.0085.
** BCT is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in Germany and other countries.
BCS is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in the USA, Germany and other
countries.
Sysmex is a registered trademark of the SYSMEX CORPORATION in the USA, Germany and other
countries.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
USA Distributor:
Dade Behring Inc.
Newark, DE 19714 U.S.A.
D-Dimer PLUS
Reagenzien zur turbidimetrischen Bestimmung quervernetzter Fibrinspaltprodukte
(D-Dimer)
Anwendungsbereich
D-Dimer PLUS ist ein Latex-verstärkter, turbidimetrischer Test zur quantitativen Bestimmung quervernetzter Fibrinspaltprodukte (D-Dimere) in menschlichem Plasma.
Diagnostische Bedeutung
Die Aktivierung der Gerinnung führt zur Spaltung des Fibrinogens zu Fibrin. Die entstandenen Fibrinmoleküle aggregieren spontan und werden durch Faktor XIII quervernetzt; es entsteht ein Fibringerinnsel. Die Aktivierung des Fibrinolysesystems führt zur Konversion des Plasminogens zur
aktiven Protease Plasmin, die Fibrinogen und Fibrin in die Fragmente D und E spaltet. Auf Grund
der Quervernetzungen zwischen den D-Domänen im Fibringerinnsel werden nach Einwirkung von
Plasmin Fibrinspaltprodukte mit quervernetzten D-Domänen freigesetzt. Die kleinste Einheit ist das
D-Dimer. Der Nachweis von quervernetzten Spaltprodukten, von D-Dimeren, deutet somit auf eine
reaktive Fibrinolyse hin1.
Die Bedeutung der Bestimmung von D-Dimer liegt in der Diagnose thromboembolischer Ereignisse. Erhöhte Konzentrationen von D-Dimer weisen auf das Vorliegen eines Gerinnsels hin und
wurden bei tiefer Beinvenenthrombose2, Lungenembolie3,4 und disseminierter intravasaler Gerinnung5 berichtet. Werden D-Dimer Ergebnisse unterhalb der Entscheidungsgrenze erhalten, können
thromboembolische Ereignisse mit einem testspezifischen negativen prädiktiven Wert (NPV) ausgeschlossen werden.
Kalibrierung
Die Konzentration des D-Dimers ist auf dem Etikett des D-Dimer PLUS Standard-Plasmas in µg/l
angegeben. Durch Multiplikation mit dem Faktor 2 können die Ergebnisse in µg/l FEU (Fibrinogen
equivalente Einheiten) umgerechnet werden.
Die notwendigen Verdünnungen des Standards werden automatisch durch das Gerinnungsmessgerät durchgeführt. Eine neue Kalibration sollte durchgeführt werden, wenn sie durch die Kontrollen
angezeigt wird und wenn eine neue Charge benutzt wird.
Interne Qualitätskontrolle
D-Dimer Kontrollen sind mindestens alle 8 h an jedem Testtag für den jeweiligen Messbereich
mitzuführen, um die korrekte Funktion des Systems zu zeigen. Die Kontrolle des unteren
Messbereichs erfolgt mit D-Dimer Kontroll-Plasma I, des oberen Messbereichs mit D-Dimer Kontroll-Plasma II. Der erhaltene Analysenwert muss innerhalb des in der Sollwerttabelle angegebenen Vertrauensbereichs liegen. Liegen die erhaltenen Werte außerhalb des Vertrauensbereichs,
so ist die Messung zu wiederholen. Werden die Abweichungen bestätigt, so ist eine neue Kalibration durchzuführen.
Auswertung
Die Konzentration in µg/l wird anhand der Referenzkurve automatisch durch das Gerinnungsmessgerät berechnet.
Einschränkungen der Testdurchführung
Es sind Gerinnungsmessgeräte geeignet, für die Dade Behring Anwendungsvorschriften bereitstellt.
In einer Studie führten folgende Konzentrationen von Störsubstanzen nicht zu einer Beeinträchtigung des D-Dimer PLUS Testes:
Heparin
Rheumafaktoren
Prinzip der Methode
Polystyrolpartikel, an die kovalent ein monoklonaler Antikörper (DD5) gegen die Quervernetzungsregion quervernetzter Fibrinspaltprodukte (D-Dimer) gebunden ist, agglutinieren, wenn sie mit DDimer enthaltenden Proben gemischt werden. Die Quervernetzungsregion ist spiegelsymmetrisch
aufgebaut, d.h. das Epitop für den monoklonalen Antikörper ist zweifach vorhanden. Daher genügt
ein Antikörper, um eine Agglutinationsreaktion auszulösen, die über eine Trübungszunahme turbidimetrisch detektiert wird.
Reagenzien
Inhalt der Handelspackung
Testkit, Bestell-Nr. OQWW 11 mit
6 x für 4 ml D-Dimer PLUS Reagenz
6 x für 5 ml D-Dimer PLUS Akzelerator
1 x 25 ml D-Dimer PLUS Rekonstitutionsmedium
Zusammensetzung
D-Dimer PLUS Reagenz, lyophilisiert; enthält Polystyrol-Partikel, monoklonale Antikörper von der
Maus, Humanes Serumalbumin, Tricin (0,02 mol/l), Saccharose (max. 50 g/l).
Konservierungsmittel:
Natriumazid (< 1 g/l)
D-Dimer PLUS Akzelerator wird aus einem Mischplasma von ausgewählten, gesunden Spendern
durch Aufstocken mit einer D-Dimer-Präparation hergestellt, mit Hepes-Pufferlösung (12 g/l) stabilisiert und lyophilisiert.
Konservierungsmittel:
5-Chlor-2-methyl-4-isothiazol-3-on und
2-Methyl-4-isothiazol-3-on (max. 10 mg/l)
D-Dimer PLUS Rekonstitutionsmedium, flüssig; physiologische, gepufferte Kochsalzlösung.
Konservierungsmittel:
Natriumazid (< 1 g/l)
Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen
1. Nur zur in-vitro-diagnostischen Anwendung.
2. Beim Umgang mit Natriumazid-haltigen In-vitro-Diagnostika ist zu beachten:
Verschlucken oder Kontakt mit Haut oder Schleimhäuten vermeiden! Natriumazid kann mit Metallen wie Kupfer oder Blei explosive Azide bilden. Wenn es in einen Abfluss verworfen wird, mit
großem Volumen Wasser nach spülen, um Azid Akkumulation zu vermeiden.
3. D-Dimer PLUS enthält Komponenten humanen Ursprungs. Jede individuelle Blutspende, die zur
Herstellung dieser Komponenten vorgesehen war, wurde auf Hepatitis Bs-Antigen, auf Anti-HCV,
auf Anti-HIV1 und auf Anti-HIV2 untersucht. Für die Herstellung wurden nur Spenden mit negativem Befund verwendet.
Unabhängig davon sollten alle aus menschlichem Blut gewonnenen Materialien wegen nie auszuschließender Gefährdung durch Krankheitserreger mit angemessener Sorgfalt unter Einhaltung
der bei Biogefährdung empfohlenen Sicherheitsmaßnahmen gehandhabt werden6.
Vorbereitung des Reagenzes
Die Bestandteile der Kombinationspackung sind chargenspezifisch. Der Einsatz von anderen Kombinationen der Komponenten als sie auf der Kombinationspackung aufgeführt sind, kann zu fehlerhaften Ergebnissen führen.
Eine Flasche D-Dimer PLUS Reagenz wird in 4 ml Rekonstitutionsmedium gelöst und für ca. 5
Minuten unter gelegentlichem Schwenken bei Raumtemperatur (+15 bis +25 °C) stehen gelassen.
Das Reagenz wird in eine Reagenzienposition des Gerinnungsmessgerätes gestellt.
Eine Flasche D-Dimer PLUS Akzelerator wird in 5ml destilliertem Wasser gelöst und für ca. 15 Minuten unter gelegentlichem Schwenken bei Raumtemperatur (+15 bis +25 °C) stehen gelassen. Das
Reagenz wird in eine Reagenzienposition des Gerinnungsmessgerätes gestellt.
Reagenzien vor Gebrauch nochmals kurz aufschütteln.
Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen
Das Testkit ist ungeöffnet bei +2 bis +8 °C zu lagern und bis zu dem auf dem Etikett angegebenen
Datum verwendbar.
Stabilität nach Rekonstitution bzw. erstmaligem Öffnen (geschlossene Flasche):
Temperatur
+2 bis +8 °C
≤ -18 °C•
D-Dimer PLUS
Reagenz
5 Tage
2 Wochen
D-Dimer PLUS
Akzelerator
5 Tage
2 Wochen
D-Dimer PLUS
Rekonstitutionsmedium
12 Wochen
• Nicht erneut einfrieren.
Zusätzlich benötigte Materialien
Physiologische Kochsalzlösung
D-Dimer PLUS Standard-Plasma, Bestell-Nr. OQXA 11
D-Dimer Kontroll-Plasma I, Bestell-Nr. OQKA 11
D-Dimer Kontroll-Plasma II, Bestell-Nr. OQKB 11
Gerinnungsmessgerät (siehe Einschränkungen der Testdurchführung)
Destilliertes Wasser
Pipetten
Referenzbereich
In einer Studie mit augenscheinlich gesunden Personen (n=136) wurden mit dem BCS® folgende Daten
erhalten: Mittelwert: 141,7 µg/l; Median: 126,4 µg/l; das zentrale 90%-Interval: 63,8 µg/l -246,4 µg/l. Der
Referenzbereich variiert von Labor zu Labor und in Abhängigkeit von der eingesetzten Technik. Erhöhte
D-Dimer Spiegel wurden in der Schwangerschaft, bei der Einnahme von oralen Kontrazeptiva, höherem
Alter, physischer Aktivität, Stress und verschiedenen klinischen Situationen gemessen. Um alle Einflussgrößen zu berücksichtigen, sollte jedes Labor für die von ihm versorgte Population eigene Referenzbereiche bzw. klinische Entscheidungsgrenzen festlegen.
Die bei thromboembolischen Ereignissen beobachtete Erhöhung der D-Dimer Konzentration kann
in Abhängigkeit von Lokalisation, Ausdehnung und Alter des Thrombus sehr unterschiedlich sein.
Daher kann ein solches Ereignis auch bei Werten innerhalb des Referenzbereiches von offensichtlich gesunden Personen nicht mit Sicherheit ausgeschlossen werden4. Die Resultate von D-Dimer
Bestimmungen sind daher nur im Zusammenhang mit anderen Laborbefunden sowie Informationen zum klinischen Bild zu bewerten.
Leistungsmerkmale des Tests
Meßbereich und Empfindlichkeit
Am BCS® reicht der gesamte Messbereich von 50 bis 6500 µg/l. Dieser gesamte Messbereich wird
durch zwei Methoden erzielt, die getrennt kalibriert werden müssen (D-Dimer low: 50 - 800 µg/l; DDimer high: 750 – 6500 µg/l). Wenn Konzentrationen oberhalb des Messbereichs liegen, kann die
Probe in physiologische Kochsalzlösung verdünnt werden.
Spezifität
In einer Studie führten folgende Konzentrationen an Fibrinogen oder Fibrinogenspaltprodukten zu
keiner Störung:
FgDp Fragment D
Fibrinogen
Bis zu
20 mg/l
9 g/l
Höhere Konzentrationen von Fibrinogen oder Fibrinogenspaltprodukten (Fragment D) können zu
falsch erhöhten oder erniedrigten Werten führen.
Präzision
Präzisionsstudien wurden mit dem BCS® durchgeführt, wobei die D-Dimer Kontroll-Plasmen I und II
sowie 2 Konzentrationsstufen von humanem Plasma (normal und pathologisch) eingesetzt wurden.
Der Variationskoeffizient in der Serie (Intra-Assay Präzision) lag zwischen 1,3 und 3,0 %, der Variationskoeffizient von Tag zu Tag (Inter-Assay Präzision) zwischen 0,8 und 3,8 %.
Methodenvergleich
Der D-Dimer PLUS Test wurde mit einem kommerziell erhältlichen D-Dimer Test verglichen. Es wurden
43 Plasmen im Konzentrationsbereich von 136 bis 2216 µg/l untersucht. Es wurde ein Korrelationskoeffizient von 0,99, ein Y-Achsen Schnittpunkt von -109 und eine Steigung von 1,21 erreicht.
Die zitierten Daten für die Leistungsmerkmale des Tests zeigen typische Ergebnisse und können
nicht als Spezifikationen für den D-Dimer PLUS betrachtet werden.
Diagnostische Sensitivität und Spezifität
In Studien mit Patienten mit Verdacht auf tiefe Beinvenenthrombose oder Lungenembolie wurden
mit dem D-Dimer PLUS Test* folgende Ergebnisse erzielt (95% Konfidenzinterval):
Instrument
BCS®8
Entscheidungsgrenze
160 µg/l
BCT**9
130 µg/l
Sysmex
CA-1500
System*10
130 µg/l
Sensitivität (%)
100
(78,2-100)
96,8
(91-99,3)
95,5
(88,9-98,8)
Spezifität (%)
40
(33,2-47,2)
45,2
(38,5-51,8)
47,8
(40,8-54,9)
NPV (%)
100
(95,5-100)
97,0
(91,6-99,4)
97,6
(90,3-98,9)
Anzahl der Proben
215
312
294
Das Studiendesign ist in den jeweiligen Publikationen beschrieben.
Literatur
Zur Plasmagewinnung 1 Teil Natriumcitrat-Lösung 0,11mol/l mit 9 Teilen Venenblut sorgfältig unter
Vermeidung von Schaumbildung mischen. Sofort 10 min bei ca. 3000 UpM (1500 x g) zentrifugieren
und überstehendes Plasma abhebern.
Stabilität der Probe:
+15 bis +25 °C
4 Stunden
≤ -18 °C
1 Monat
Bei ≤ -18 °C gelagerte Plasmen innerhalb von 10 min bei +37 °C auftauen und die Bestimmung
dann innerhalb von 2 Stunden durchführen. Nicht erneut einfrieren.
Testdurchführung
Die Testdurchführung erfolgt am geeigneten Gerinnungsmessgerät automatisch. Spezielle Vorschriften für Gerinnungsmessgeräte sind von Dade Behring auf Anfrage erhältlich.
Bedienungsanleitung des Herstellers beachten!
Die Verwendung von D-Dimer PLUS an anderen Gerinnungsmessgeräten muss vom Untersuchungslabor validiert werden. Dabei können andere als die angegebenen Leistungsdaten erhalten werden.
2
Die Störsubstanzen Bilirubin, Hämoglobin und Lipid sind in den instrumenten-spezifischen Anwendungsvorschriften beschrieben.
Humane Anti-Maus Antikörper (HAMA) Versuche wurden nicht mit dem D-Dimer PLUS Test durchgeführt. Patientenproben, die heterophile Antikörper enthalten oder Proben von Patienten, die Präparationen von monoklonalen Mausantikörpern zur Diagnose oder Therapie erhalten haben, können falsch erhöhte oder falsch erniedrigte Werte aufzeigen, wenn sie mit Assays ausgetestet werden, die monoklonale Antikörper verwenden.
Unabhängig von der D-Dimer Konzentration, können in Einzelfällen unspezifische Reaktionsverläufe auftreten und die Verdünnung von Proben kann daher in bestimmten Fällen zu abweichenden
Resultaten führen7.
®
Untersuchungsmaterial
OQWW G11 C0541 (735) W/H
Bis zu
2,5 IU/ml
98 IU/ml
Ausgabe Mai 2003
Siehe Seite 1.
* Der D-Dimer PLUS Test ist technisch identisch mit der US Version Advanced D-Dimer. Durch
Division der Advanced D-Dimer Ergebnisse in mg/l durch 0,0085 werden D-Dimer PLUS Konzentrationen in µg/l erhalten.
** BCT ist eine eingetragene Marke der Dade Behring Marburg GmbH in Deutschland und anderen
Ländern.
BCS ist eine eingetragene Marke der Dade Behring Marburg GmbH in den USA, in Deutschland
und anderen Ländern.
Sysmex ist eine eingetragene Marke der SYSMEX CORPORATION in den USA, in Deutschland
und anderen Ländern.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
D-Dimer PLUS
Réactifs pour la détermination turbidimétrique des produits de dégradation des
polymères de fibrine (D-Dimères)
Domaine d’utilisation
D-Dimer PLUS est un test turbidimétrique sensibilisé au latex, qui permet la détermination quantitative dans le plasma humain des produits de dégradation des polymères de fibrine (D-Dimères).
Intérêt diagnostique
L’activation de la coagulation entraîne la transformation du fibrinogène en fibrine. Les molécules de
fibrine ainsi obtenues se polymérisent spontanément, et sont stabilisées par le Facteur XIII ; il se
forme un caillot de fibrine. L’activation du système fibrinolytique entraîne la transformation du plasminogène en une protéase active, la plasmine, qui dégrade le fibrinogène et la fibrine en fragments
D et E. Du fait des liaisons qui se forment entre les fragments D du caillot de fibrine, l’action de la
plasmine libère des produits de dégradation de la fibrine avec des fragments D reliés entre eux. La
plus petite unité est le D-Dimère. La mise en évidence de produits de dégradation réticulés, ou DDimères, indique donc une fibrinolyse réactionnelle1.
L’intérêt du dosage des D-Dimères réside dans la possibilité d’explorer les événements thromboemboliques. Une concentration augmentée de D-Dimères indique la présence d’un caillot ; elle a été
observée dans des cas de thrombose veineuse profonde de la jambe2, d’embolie pulmonaire3,4 et
de coagulation intravasculaire disséminée5. Si le résultat des D-Dimères est trouvé inférieur au
seuil de décision, on peut exclure un événement thromboembolique par une valeur prédictive négative (NPV) spécifique au test.
Principe de la méthode
Les particules de polystyrène, sur lesquelles sont fixés de façon covalente des anticorps monoclonaux (DD5) dirigés contre la région reliant les produits de dégradation des polymères de fibrine
(D-Dimères), s’agglutinent lorsqu’elles sont ajoutées à des échantillons contenant des D-Dimères.
La région polymérisée est construite en symétrie de miroir, c’est-à-dire que l’épitope pour l’anticorps
monoclonal est deux fois présent. Aussi un seul anticorps est-il suffisant pour déclencher une réaction d’agglutination qui est détectée turbidimétriquement par une augmentation de la turbidimétrie.
Réactifs
+2 / +8 °C
≤ -18 °C•
Limites de réalisation du test
Dade Behring propose des protocoles d’adaptation pour les automages de coagulation appropriés
à la réalisation du test D-Dimer PLUS.
Une étude a montré que les substances suivantes n’interféraient pas sur les résultats du test DDimer PLUS :
jusqu'à
héparine
2,5 IU/ml
facteurs rhumatoïdes
98 IU/ml
Les subtances pouvant provoquer des interférences, tels la bilirubine, l’hémoglobine ou les lipides,
sont décrites dans les protocoles d’adaptation spécifiques à chaque automate.
Aucune étude sur les anticorps humain anti-souris (HAMA) n’a été effectuée avec le test D-Dimer
PLUS. Les échantillons de patients contenant des anticorps hétérophiles ou ayant reçu des préparations d’anticorps monoclonaux de souris dans un but diagnostique ou thérapeutique, peuvent
donner des valeurs augmentées ou diminuées à tort s’ils sont testés avec des techniques utilisant
des anticorps monoclonaux.
Indépendamment de la concentration en D-Dimères, des réactions non-spécifiques peuvent apparaître dans certains cas, et la dilution des échantillons peut alors provoquer des résultats divergents 7 .
Domaine de référence
Contenu du coffret
Coffret, code OQWW 11, contenant
6 x pour 4 ml de Réactif D-Dimer PLUS
6 x pour 5 ml d’Accélérateur D-Dimer PLUS
1 x 25 ml de Milieu de reconstitution D-Dimer PLUS
Composition
Réactif D-Dimer PLUS, lyophilisé : contient des particules de polystyrène, des anticorps monoclonaux de souris, de l’albumine sérique humaine, de la tricine (0,02 mol/l) et du saccharose (max.
50 g/l).
Agent de conservation :
azide de sodium (< 1 g/l)
Accélérateur D-Dimer PLUS : pool de plasmas de donneurs sains sélectionnés, enrichi par une
préparation de D-Dimères, stabilisé avec une solution tampon Hépès (12 g/l) et lyophilisé.
Agents de conservation :
5-chloro-2-méthyl-4-isothiazole-3-one et
2-méthyl-4-isothiazole-3-one (max. 10 mg/l)
Milieu de reconstitution D-Dimer PLUS, liquide : solution tampon saline physiologique.
Agent de conservation :
azide de sodium (< 1 g/l)
Mises en garde et précautions d’emploi
1. Les réactifs sont réservés à un usage in vitro.
2. Les réactifs contenant de l’azide de sodium doivent être utilisés avec précaution : ne pas avaler
et éviter tout contact avec la peau et les muqueuses ! L’azide de sodium peut devenir explosif au
contact de métaux lourds comme le cuivre ou le plomb. S’il est versé dans une canalisation,
rincer avec une grande quantité d’eau pour éviter l’accumulation de l’acide.
3. Tout don de sang individuel prévu pour la préparation du D-Dimer PLUS a été testé vis-à-vis de
l’antigène de surface de l'Hépatite B, de l’anticorps anti-VHC, de l’anticorps anti-VIH 1 et de
l’anticorps anti-VIH 2. Seuls les dons trouvés négatifs ont été utilisés.
Néanmoins, toutes les préparations obtenues à partir de sang humain doivent être manipulées
avec les précautions nécessaires en cas de risque biologique, dans la mesure où l’on ne peut
exclure totalement un risque d’infection6.
Préparation des réactifs
Les composants du coffret doivent être utilisés selon la combinaison des lots indiquée sur le coffret.
L’utilisation d’autres lots peut entraîner des résultats erronés.
Reconstituer le contenu d’un flacon de Réactif D-Dimer PLUS avec 4 ml de Milieu de reconstitution,
et le laisser environ 5 min à la température ambiante (+15/+25°C) en le retournant de temps en
temps. Placer le réactif dans une position réactif de l’automate de coagulation. Diluer le contenu
d’un flacon d’Accélérateur D-Dimer PLUS avec 5 ml d’eau distillée, et laisser reposer à la température ambiante (+15/+25°C) pendant env. 15 mn en retournant le flacon de temps en temps. Placer
ensuite le flacon dans une position réactif de l’automate de coagulation. Agiter de nouveau brièvement les réactifs avant emploi.
Stabilités et conditions de conservation
Les composants du coffret non ouverts se conservent entre +2 et +8°C jusqu’à la date indiquée sur
l’étiquette.
Stabilités après reconstitution ou première ouverture (flacon refermé) :
Température
Étalonnage
La concentration en D-Dimères du D-Dimer PLUS Plasma Standard est indiquée en µg/l sur
l’étiquette. Pour obtenir un résultat en µg/l d’UEF (Unité d’Equivalent Fibrinogène), multiplier la
valeur obtenue par le facteur 2. Les dilutions nécessaires du standard sont effectuées automatiquement par l’automate de coagulation. Refaire un nouvel étalonnage lorsque les contrôles l’indiquent
et à chaque changement de lot.
Contrôle de qualité interne
Les D-Dimer Contrôles doivent être introduits au moins toutes les 8 heures, à chaque journée de
travail, pour chacun des domaines de mesure, afin de vérifier le bon fonctionnement du système. Le
contrôle du domaine de mesure inférieur se fait à l’aide du D-Dimer Plasma de contrôle I, et le
contrôle du domaine de mesure supérieur à l’aide du D-Dimer Plasma de contrôle II. Les valeurs
d’analyse obtenues doivent se situer à l’intérieur du domaine de confiance indiqué dans le tableau
des valeurs théoriques. Si elles sont trouvées à l’extérieur, refaire le test. Si les déviations sont
confirmées, refaire un nouvel étalonnage.
Exploitation des résultats
Le concentration en µg/l est calculée automatiquement par l’automate de coagulation à partir de la
courbe d’étalonnage.
Réactif
D-Dimer PLUS
5 jours
2 semaines
Accélérateur
D-Dimer PLUS
5 jours
2 semaines
Milieu de reconstitution
D-Dimer PLUS
12 semaines
• Ne congeler qu'une seule fois.
Une étude effectuée sur un collectif de sujets apparemment sains (n = 136) a donné les valeurs
suivantes avec le BCS® : valeur moyenne : 141,7 µg/l ; médiane : 126,4 µg/l ; limites au 90ème percentile : 63,8 µg/l – 246,4 µg/l. Le domaine de référence varie d’un laboratoire à l’autre et selon la
technique utilisée. Des valeurs augmentées de D-Dimères ont été enregistrées en cas de grossesse, de prise de contraceptifs oraux, d’âge avancé, d’activité physique, de stress et de différentes
situations cliniques. Afin de tenir compte de tous les facteurs d’influence, chaque laboratoire doit
déterminer pour sa population de patients son propre domaine de référence et ses propres seuils
de décision cliniques.
L’augmentation de la concentration de D-Dimères en cas d’événement thromboembolique peut être
très variable selon la localisation, la taille et l’âge du thrombus. Aussi des valeurs trouvées à
l’intérieur du domaine de référence chez des sujets apparemment sains ne permettent-elles pas
d’exclure avec certitude la présence d’un tel événement4. Les résultats de D-Dimères ne doivent
donc être interprétés qu’en liaison avec les autres résultats d’analyses biologiques ainsi qu’avec les
informations fournies par le tableau clinique.
Caractéristiques du test
Domaine de mesure et sensibilité
Sur le BCS®, le domaine de mesure s’étend de 50 à 6500 µg/l. Ce domaine de mesure est déterminé selon deux méthodes qui doivent être étalonnées séparément (D-Dimères bas : 50 – 800 µg/l ;
D-Dimères hauts : 750 – 6500 µg/l). Si une concentration sort du domaine de mesure, diluer
l’échantillon en sérum physiologique.
Spécificité
Une étude a montré que les concentrations suivantes de fibrinogène ou de produits de dégradation
du fibrinogène n’entraînaient aucune interférence significative :
jusqu'à
FgDp Fragment D 20 mg/l
Fibrinogène
9 g/l
Des concentrations supérieures de fibrinogène ou de produits de dégradation du fibrinogène (fragment D) peuvent entraîner des valeurs diminuées ou augmentées à tort.
Précision
Des études de précision ont été effectuées sur le BCS®, avec les D-Dimer Plasmas de contrôle I et
II, ainsi que deux concentrations de plasma humain (normale et pathologique).
Le coefficient de variation dans la série (répétabilité) a été trouvé entre 1,3 et 3,0%, et le coefficient
de variation de jour à jour (reproductibilité) entre 0,8 et 3,8%.
Comparaison avec d’autres méthodes
Le test D-Dimer PLUS a été comparé à un autre test D-Dimères du commerce dans le cadre d’une
étude portant sur 43 plasmas, dont les concentrations étaient comprises entre 136 et 2216 µg/l. Le
coefficient de corrélation a été trouvé à 0,99, l’intersection de l’axe des Y à -109, et la pente à 1,21.
Les valeurs indiquées comme caractéristiques du test représentent des résultats types, et ne
doivent pas être considérées comme des spécifications du test D-Dimer PLUS.
Sensibilité diagnostique et spécificité
Des études effectuées sur des patients suspectés de souffrir d’une thrombose veineuse profonde
de la jambe ou d’une embolie pulmonaire ont donné avec le test D-Dimer PLUS* les résultats
suivants (intervalle de confiance de 95%) :
Instrument
BCS®8
Seuil de décision
160 µg/l
BCT**9
130 µg/l
Sensibilité (%)
100
(78,2-100)
96,8
(91-99,3)
95,5
(88,9-98,8)
Spécificité (%)
40
(33,2-47,2)
45,2
(38,5-51,8)
47,8
(40,8-54,9)
NPV (%)
100
(95,5-100)
97,0
(91,6-99,4)
97,6
(90,3-98,9)
Nbre d'échantillons
215
Autres réactifs et matériel nécessaires
Sérum physiologique
D-Dimer PLUS Plasma standard, code OQXA 11
D-Dimer Plasma de contrôle I, code OQKA 11
D-Dimer Plasma de contrôle II, code OQKB 11
Automate de coagulation (cf. Limites de réalisation du test)
Eau distillée
Pipettes
Le protocole des études est décrit dans chaque publication correspondante.
Échantillons de patients
Littérature
Pour obtenir les échantillons, mélanger avec précaution 1 volume de solution de citrate de sodium
0,11 mol/l avec 9 volumes de sang veineux, en évitant la formation de mousse. Centrifuger aussitôt
10 min à env. 3000 t/min (1500 g), et prélever le surnageant des plasmas.
Stabilité des échantillons :
+15/+25°C
4 heures
≤ - 18°C
1 mois
Les échantillons conservés à ≤ - 18°C doivent être décongelés en 10 min à +37°C, puis testés dans
les 2 heures qui suivent. Ne les congeler qu’une seule fois.
Cf. page 1.
* Le test D-Dimer PLUS est techniquement identique au test « Advanced D-Dimer » distribué aux
USA. En divisant par 0,0085 les résultats en mg/l obtenu avec le test Advanced D-Dimer, on
obtient des concentrations en µg/l correspondant au test D-Dimer PLUS.
** BCT est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH en Allemagne et dans d’autres
pays.
BCS est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH aux USA, en Allemagne et dans
d’autres pays.
Sysmex est une marque déposée de SYSMEX CORPORATION aux USA, en Allemagne et dans
d’autres pays.
®
Sysmex
CA-1500
System*10
Réalisation du test
La réalisation du test est effectuée automatiquement sur un automate de coagulation approprié. Des
protocoles d’adaptation sur certains automates peuvent être demandés auprès de Dade Behring.
Respecter les instructions du fabricant !
L’utilisation du test D-Dimer PLUS sur d’autres automates doit être validé par le laboratoire. Des
données différentes que celles indiquées dans le tableau des valeurs théoriques peuvent alors être
obtenues.
OQWW G11 C0541 (735) W/H
3
Edition Mai 2003
130 µg/l
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
312
294
D-Dimero PLUS
Reagenti per la determinazione turbidimetrica di prodotti di degradazione della fibrina
insolubile (D-Dimero)
Settori d’impiego
D-Dimero PLUS è un test turbidimetrico ottimizzato al lattice per la determinazione quantitativa di
prodotti di degradazione della fibrina insolubile (D-Dimero) nel plasma umano.
Significato diagnostico
L’attivazione della coagulazione si manifesta con una scissione del fibrinogeno da parte della fibrina. Le molecole di fibrina risultanti si aggregano spontaneamente e diventano insolubili mediante il
Fattore XIII; questo produce un coagulo di fibrina. L’attivazione del sistema fibrinolitico provoca la
trasformazione del plasminogeno nella forma attiva della proteasi plasmina che scinde il fibrinogeno e la fibrina nei frammenti D e E. A causa dei legami crociati tra i D-domain nel coagulo di fibrina,
l’azione della plasmina libera i prodotti di degradazione della fibrina con D-domain insolubili. L’unità
più piccola è il D-Dimero. L’identificazione dei prodotti di degradazione della fibrina, di D-Dimeri,
risulta pertanto indicativa di fibrinolisi reattiva1. Il test del D-Dimero è rilevante nella diagnosi di
eventi tromboembolici. Concentrazioni elevate di D-Dimero sono indicative della presenza di un
coagulo e sono state descritte nella trombosi venosa profonda2, nell’embolia polmonare3,4, e nella
coagulazione intravascolare disseminata5. Se i risultati del D-Dimero sono inferiori alla soglia decisionale, gli eventi tromboembolici possono essere esclusi con un valore negativo predittivo specifico (NPV) del test.
Principio del metodo
Le particelle di polistirene covalentemente legate ad un anticorpo monoclonale (DD5) della regione
legami crociati dei prodotti di degradazione della fibrina (D-Dimero) vengono agglutinate con i campioni contenenti D-Dimero. La regione dei legami crociati ha una struttura stereosimmetrica, es.
l’epitopo per l’anticorpo monoclonale si ripete due volte. Di conseguenza, un anticorpo è sufficiente
per attivare una reazione di agglutinazione, che viene poi individuata turbidimetricamente mediante
aumento della torbidità.
Reagenti
Contenuto della confezione
Test Kit, cod. No. OQWW 11, contenente
D-Dimero PLUS Reagente 6 flaconi da 4 mL cad.
D-Dimero PLUS Acceleratore 6 flaconi da 5 mL cad.
D-Dimero PLUS Mezzo per la Ricostituzione 1 flacone da 25 mL
Composizione
Reagente D-Dimero PLUS, liofilizzato; contiene particelle di polistirene, anticorpi monoclonali da
topo, siero albumina umana, tricina (0,02 mol/L), saccarosio (mass. 50 g/L).
Conservante:
sodio azide (< 1 g/L)
Acceleratore D-Dimero PLUS, liofilizzato; preparato da un pool di plasma di donatori sani, ed
aggiunto con una preparazione di riferimento standardizzata D-Dimero, stabilizzata con Soluzione
Tampone Hepes (12 g/L) e liofilizzata.
Conservanti:
5-cloro-2-metil-4-isotiazolo-3-one e
2-metil-4-isotiazolo-3-one (mass. 10 mg/L)
Mezzo per la Ricostituzione D-Dimero PLUS, liquido; soluzione salina fisiologica tamponata.
Conservante:
sodio azide (< 1 g/L)
Avvertenze e precauzioni
1. Per uso diagnostico in vitro.
2. I reagenti contenenti sodio azide devono essere trattati con la dovuta cautela:
Non ingerire ed evitare il contatto con la cute e le mucose. La sodio azide a contatto con metalli
pesanti quali rame o piombo, può formare azidi esplosive. Se versati nelle condotte idrauliche,
far scorrere l’acqua abbondantemente per evitare depositi di azide.
3. Il D-Dimero PLUS contiene componenti di origine umana. Ogni donazione di sangue prevista
per la produzione di questi componenti è stata controllata per la presenza dell’antigene di superficie dell’epatite B, anti-HCV, anti-HIV1 e anti-HIV2. Soltanto le donazioni risultate negative sono
state impiegate.
Tuttavia, poiché non è possibile escludere con assoluta certezza la presenza di agenti patogeni,
tutti i materiali ottenuti da sangue umano devono essere trattati con le necessarie precauzioni,
rispettando le norme di sicurezza sul rischio biologico6.
Preparazioni dei reagenti
I componenti del kit sono lotto-specifici. L'impiego di una combinazione di componenti diversa da
quella indicata sulla confezione del kit può dare risultati errati.
Il Reagente D-Dimero PLUS va ricostituito con 4 mL del Mezzo per la Ricostituzione e lasciato
riposare a temperatura ambiente (+ 15/+ 25°C) per ca. 5 min. mescolando di tanto in tanto. Inserire
il reagente in una posizione adeguata sull’analizzatore.
Sciogliere un flacone di D-Dimero Plus Acceleratore con 5 mL di acqua distillata e lasciar riposare a
t.a. (+15/+25 °C) per ca. 15 min. mescolando di tanto in tanto. Metterlo in una posizione adeguata
sull’analizzatore. Agitare brevemente i reagenti prima dell’uso.
Conservazione e stabilità
Il test kit rimane stabile fino alla data di scadenza indicata, se conservato ben chiuso a 2/8°C.
Stabilità dopo ricostituzione/una volta aperto (flacone chiuso):
Temperatura
+2 / +8 °C
≤ -18 °C•
D-Dimero PLUS
Reagente
5 giorni
2 settimane
D-Dimero PLUS
Acceleratore
5 giorni
2 settimane
D-Dimero PLUS
Mezzo per la Ricostituzione
12 settimane
Calibrazione
La concentrazione del Plasma Standard D-Dimero PLUS è indicata sull’etichetta del flacone in mg/
L. I risultati possono essere convertiti in µg/L FEU (unità equivalente fibrinogeno) moltiplicando per
un fattore 2. Le necessarie diluizioni dello standard vengono preparate automaticamente
dall’analizzatore. Una nuova curva di calibrazione deve essere preparata quando i risultati di controllo
consigliano una nuova calibrazione e quando è in uso un nuovo lotto di Reagente.
Controllo di Qualità Interno
Per assicurarsi del corretto funzionamento del sistema, i controlli D-Dimero devono essere eseguiti
almeno ogni 8 ore per il rispettivo ambito. Il Plasma di Controllo I viene usato per il controllo
dell’ambito basso ed il Plasma di Controllo II viene usato per l’ambito alto. Il valore analitico ottenuto
deve cadere entro l’ambito dei valori indicati nella tabella dei valori. Se i valori ottenuti sono al di
fuori dell’ambito di accettabilità, la misurazione deve essere ripetuta. Se la misurazione ripetuta
conferma le deviazioni, il sistema deve essere ricalibrato.
Risultati
La concentrazione di D-Dimero in µg/L viene calcolata automaticamente dall’analizzatore in base
alla curva di calibrazione.
Limiti della Procedura
Analizzatori idonei sono quelli per i quali i protocolli dei test sono forniti da Dade Behring.
In uno studio è risultato che i seguenti livelli non interferiscono con la determinazione D-Dimero
PLUS:
Fino a
Eparina
2,5 IU/mL
Fattore reumatoide 98 IU/mL
Bilirubina, emoglobina e lipidi sono descritti nei protocolli applicativi specifici degli strumenti.
L’analisi degli Anticorpi Murini non è stata eseguita con il test D-Dimero Plus. Tuttavia, i campioni di
plasma da pazienti contenenti anticorpi eterofili, e da pazienti che hanno ricevuto preparazioni di
anticorpi murini monoclonali per la diagnosi o terapia, potrebbero mostrare valori falsamente elevati
o falsamente diminuiti se testati con kit che usano anticorpi monoclonali murini.
Indipendentemente dalla concentrazione del D-Dimero, possono verificarsi, in casi isolati, andamenti non specifici della reazione e, pertanto, la diluizione dei campioni può risultare, in determinati
casi, anomala7.
Intervallo di Riferimento
Usando il BCS®, in uno studio con soggetti apparentemente sani (n=136) sono stati ottenuti i
seguenti risultati: media: 141,7 µg/L; mediana: 126,4 µg/L; centrale 90% intervallo: 63,8-246,4 µg/L.
I valori di riferimento variano da laboratorio a laboratorio secondo la tecnica usata. Elevati livelli di
D-Dimero vengono misurati durante la gravidanza e nel corso dell’assunzione di contraccettivi orali,
così come in età avanzata, attività fisica, stress e varie situazioni cliniche.
Per coprire tutti i fattori che influenzano i risultati, ogni laboratorio dovrebbe stabilire il proprio
intervallo di riferimento/limiti di decisioni cliniche per le persone alle quali viene fornito il servizio.
Aumenti nella concentrazione D-dimero osservati con eventi tromboembolici possono essere variabili, dovuti alla localizzazione, all’estensione e all’età del trombo. Pertanto, un evento tromboembolico non può essere escluso con certezza soltanto sulla base di una concentrazione D-dimero che
rientra nell’intervallo di riferimento di soggetti apparentemente sani4. Pertanto i risultati delle determinazioni del D-Dimero devono essere interpretati (confrontati) con i risultati di altri laboratori e
rispetto ai dati clinici.
Caratteristiche del test
Ambito di misura e Sensibilità
L’ambito di misura totale D-Dimero PLUS sul BCS® va da 50 a 6500 µg/L. Questo ambito di misura
totale è ottenuto da 2 metodi, i quali devono essere calibrati separatamente (D-Dimero basso: 50800 µg/L; D-Dimero alto: 750-6500 µg/L). Quando le concentrazioni sono superiori all’ambito di
misura il campione può essere diluito in soluzione fisiologica di cloruro di sodio.
Specificità
In uno studio non è stato rilevato nessun effetto significativo sui valori di fibrinogeno o prodotti di
degradazione della fibrina frammento D:
Fino a
FgDp frammento D 20 mg/L
Fibrinogeno
9 g/L
Livelli elevati di fibrinogeno o prodotti di degradazione della fibrina frammento D possono dare
risultati falsamente elevati o diminuiti.
Precisione
Sono stati effettuati studi di precisione sul BCS® mediante valutazione del Plasma di Controllo DDimero I e II e 2 livelli di plasma umano (normale e patologico). Il coefficiente di variazione intraserie
(precisione intra-serie) varia da 1,3% a 3,0% mentre il coefficiente di variazione interserie (precisione inter-serie) varia da 0,8% e 3,8%.
Metodo di confronto
Il test D-Dimero PLUS è stato confrontato con un test D-Dimero disponibile in commercio valutando
43 campioni di plasma che variano da 136 a 2216 µg/L. E’ stato ottenuto un coefficiente di correlazione di 0,99, con un valore y-intercetta di -109 ed una pendenza 1,21.
I valori citati per le caratteristiche specifiche di prestazione del test rappresentano risultati tipici e
non riguardano le specifiche per D-Dimero PLUS.
Sensibilità e specificità diagnostica
Studi su pazienti con sospetto di trombosi venosa profonda alle gambe o embolia polmonare, hanno dato i seguenti risultati con il test D-Dimero PLUS* (intervallo di accettabilità 95%):
Strumento
Soglia decisionale
Sensibilità (%)
Specificità (%)
NPV (%)
BCS® 8
160 µg/L
100
(78,2-100)
96,8
(91-99,3)
95,5
(88,9-98,8)
40
(33,2-47,2)
45,2
(38,5-51,8)
47,8
(40,8-54,9)
100
215
(95,5-100)
97,0
312
(91,6-99,4)
97,6
294
(90,3-98,9)
• Non ricongelare.
BCT**9
Materiali richiesti ma non forniti
Soluzione salina fisiologica
Plasma Standard, cod. nr. QXA 11
Plasma di Controllo I, cod. nr. QKA 11
Plasma di Controllo II, cod. nr. QKB 11
Analizzatore per coagulazione (vedere Limiti della Procedura)
Acqua distillata
Pipette
Sysmex
130 µg/L
CA-1500
System*10
Il progetto dello studio è descritto nella rispettiva pubblicazione.
Campioni in esame
*
Bibliografia
Vedere pagina 1.
Per ottenere il plasma, mescolare attentamente 1 parte di soluzione di citrato di sodio (0.11 mol/L) con
9 parti di sangue venoso, evitando la formazione di schiuma. Centrifugare immediatamente per 10
min. a ca. 3000 rpm (1500xg) e rimuovere il plasma sovranatante.
Stabilità del campione:
+15 / +25 °C
4 ore
≤ -18 °C
1 mese
Il plasma conservato a ≤ - 18°C deve essere scongelato entro 10 min. a + 37°C ed utilizzato entro 2
ore. Non ricongelare.
Esecuzione del test
Tutte le operazioni necessarie per la preparazione e l’esecuzione dei test vengono eseguite automaticamente dagli analizzatori idonei. I protocolli specifici dei test per gli analizzatori sono disponibili, su richiesta, presso Dade Behring. Seguire le istruzioni del produttore.
L’uso di D-Dimero Plus su altri analizzatori deve essere validato dal laboratorio. In questi casi, le
caratteristiche analitiche possono differire da quelle dichiarate.
OQWW G11 C0541 (735) W/H
4
130 µg/L
®
Numero di campioni
Edizione Maggio 2003
Il Test D-Dimero PLUS è tecnicamente identico alla versione US Advanced D-Dimer. La concentrazione in µg/L del D-Dimero PLUS può essere ottenuto dividendo i risultati in mg/L dell’Advanced D-Dimer per 0.0085.
** BCT è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH in Germania e negli altri Paesi.
BCS è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH negli USA, in Germania e negli
altri Paesi.
Sysmex è un marchio registrato della SYSMEX CORPORATION negli USA, in Germania e negli
altri Paesi.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
D-Dimer PLUS
Reactivos para la determinación turbidimétrica de los productos de degradación de la
malla de fibrina (dímeros D)
Campos de aplicación
El D-Dimer PLUS es un test turbidimétrico con partículas intensificadoras de látex, para la determinación cuantitativa de los productos de degradación de la malla de fibrina (dímeros D) en plasma
humano.
Significado diagnóstico
La activación de la coagulación conduce a la conversión del fibrinógeno en fibrina. Las moléculas
de fibrina resultantes se polimerizan espontáneamente y van a ser entrecruzadas por medio del
factor XIII, formando un coágulo de fibrina. La activación del sistema fibrinolítico lleva a la conversión del plasminógeno en la proteasa activa, plasmina, la cual disocia el fibrinógeno y la fibrina en
los fragmentos D y E. Debido al entrecruzamiento de los dominios D en el coágulo de fibrina,
después de la acción de la plasmina se van a liberar productos de degradación de la fibrina con los
dominios D entrecruzados. La unidad más pequeña de estos es el dímero D. El reconocimiento de
los productos de degradación entrecruzados, dímeros D, está indicando una fibrinólisis reactiva1.
La importancia de la determinación del dímero D está en el diagnóstico de episodios tromboembólicos. Una concentración elevada de dímero D indica la existencia de un coagulo y ha sido reportada
en trombosis venosa profunda2, embolia pulmonar3,4 y coagulación intravascular diseminada5.
Si se obtienen valores de dímero D por debajo del límite de decisión, los episodios trombolíticos
con un valor predictivo negativo (NPV) específico del test pueden excluirse.
Fundamento del método
Las partículas de poliestireno, a las que se les ha unido de forma covalente un anticuerpo monoclonal (DD5) contra las zonas entrecruzadas de los productos de degradación de la fibrina entrecruzados (dímero D), se aglutinan cuando se mezclan con muestras que contienen dímero D. La región
de entrecruzamiento tiene una estructura con una simetría de espejo (simetría radial), esto quiere
decir, que el epítope para el anticuerpo monoclonal existe dos veces. Por lo tanto, se necesita
solamente un anticuerpo para lograr una reacción de aglutinación, la cual se puede determinar
turbidimétricamente mediante el aumento de la turbidez.
Reactivos
Contenido del equipo
Equipo, N° de producto, OQWW 11 con
6 x para 4 ml de Reactivo D-Dimer PLUS
6 x para 5 ml de Acelerador D-Dimer PLUS
1 x 25 ml de Medio de reconstitución D-Dimer PLUS
Composición
El Reactivo D-Dimer PLUS, liofilizado, contiene partículas de poliestireno, anticuerpo monoclonal
de ratón, albúmina sérica humana, glicina (0,02 mol/l), sacarosa (máx. 50 g/l).
Agente de conservación:
Azida sódica (< 1 g/l)
El Acelerador D-Dimer PLUS está fabricado a partir de una mezcla de plasmas de donantes
sanos seleccionados, mediante la adición de una preparación de dímero D, estabilizado con una
solución tampón Hepes (12 g/l) y liofilizado.
Agentes de conservación:
5-cloro-2-metil-isotiazol-3-ona y
2-metil-4-isotiazol-3-ona (máx. 10 mg/l)
El Medio de reconstitución D-Dimer PLUS, líquido; es una solución salina fisiológica, tamponada.
Agente de conservación:
Azida sódica (< 1 g/l)
Advertencias y medidas de seguridad
1. Sólo para uso diagnóstico in-vitro.
2. En el manejo de productos que contengan azida sódica debe observarse lo siguiente:
No ingerir y evitar contacto con la piel y mucosas. La azida sódica puede formar azidas explosivas con metales pesados como cobre y plomo. Al verter las soluciones por el desague, lavar
con un volumen grande de agua, con el fin de evitar la acumulación de azida.
3. El D-Dimer PLUS contiene componentes de origen humano. Cada donación individual de sangre destinada a la elaboración de estos componentes fue sometida a pruebas para detectar
HBsAg, anti-HCV, anti-HIV1 y anti-HIV2. Para la elaboración sólo se utilizaron donaciones con
resultados negativos.
Independientemente de esto, todas los materiales obtenidos a partir de sangre humana deben
ser manipulados con las precauciones necesarias, siguiendo las medidas de seguridad recomendadas en caso de riesgo biológico, puesto que nunca se puede excluir completamente la
existencia de agentes patógenos6.
Preparación del reactivo
Los componentes del envase combinado son específicos del lote. El uso de otras combinaciones
de los componentes, diferentes a la efectuada en el envase combinado, puede llegar a producir
resultados erróneos.
Disolver un frasco de reactivo D-Dimer PLUS con 4 ml de medio de reconstitución y dejarlo reposar
durante 5 min., a temperatura ambiente (+15 y +25°C), y esporádicamente mezclarlo suavemente
por inversión. Colocar el reactivo en una de las posiciones para reactivos del aparato de medida de
la coagulación.
Disolver un frasco de acelerador D-Dimer en 5 ml de agua destilada y dejarlo en reposo durante 15
min., a temperatura ambiente (+15 y +25°C), mezclando esporádicamente por inversión. Colocar el
reactivo en una de las posiciones para reactivos del aparato de medida de la coagulación. Antes de
usar, agitar de nuevo cuidadosamente.
Estabilidad y almacenamiento
El equipo, sin abrir, y almacenado entre +2 y +8°C es utilizable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Estabilidad después de la reconstitución (frasco cerrado);
Temperatura
Reactivo
Acelerador
Medio de reconstitución
D-Dimer PLUS
D-Dimer PLUS
D-Dimer PLUS
entre +2 y +8 °C 5 días
5 días
12 semanas
a ≤ -18 °C•
2 semanas
2 semanas
Limitaciones del desarrollo del test
Son apropiados los aparatos de medir la coagulación para los cuales Dade Behring tiene folleto de
aplicación preparados.
En un estudio las concentraciones de las siguientes sustancias no interfirieron sobre el test DDimer PLUS:
hasta
Heparina
2,5 IU/ml
Factores reumatoideos
98 IU/ml
Las sustancias alterantes bilirrubina, hemoglobina y lípidos están descritos en los folletos de aplicación específicos de los instrumentos.
No se realizaron experimentos con anticuerpos humanos contra ratón (HAMA)(Human Anti-Mouse
Antibodies) con el test D-Dimer PLUS. Las muestras de pacientes, que contengan anticuerpos
heterofílicos o las muestras de pacientes que hayan recibido anticuerpos monoclonales de ratón
para su diagnosis o terapia, pueden presentar valores falsos, elevados o bajos, cuando son analizados con ensayos que utilicen anticuerpos monoclonales.
Independiente de la concentración de dímero D, pueden aparecer en casos aislados reacciones no
específicas y la dilución de las muestras puede por lo tanto, en casos determinados llevar a desviaciones de los resultados7.
Rango de referencia
En un estudio con personas aparentemente sanas (n = 136) se encontraron en el BCS® los siguientes datos: Valor promedio: 141,7 µg/l; Mediana: 126,4 µg/l; el intervalo-90% central: 63,8 µg/l 246,4 µg/l. El rango de referencia varia de laboratorio a laboratorio y depende de la técnica utilizada. Niveles elevados del dímero D fueron medidos durante el embarazo, la toma de anticoagulantes orales, edad avanzada, actividad física, stress y en diferentes situaciones clínicas. Para poder
tener en cuanta todas las influencias, cada laboratorio deberá, encontrar sus propios rangos de
referencia o sus límites de decisión clínica para la población atendida por él.
El aumento de la concentración de dímero-D observado en episodios tromboembólicos puede ser
muy diferente dependiendo de la localización, la extensión y la edad del trombo. Por lo tanto, uno
de estos episodios no puede ser excluido con seguridad, aún para valores que se encuentren
dentro del rango de referencia para personas evidentemente sanas4. Los resultados de la determinación del dímero D únicamente se pueden valorar en conjunto con otros datos de laboratorio, así
como, con informaciones sobre cuadro clínico.
Características de la prueba
Rango de medida y sensibilidad
En el BCS® se logra el rango total de medida desde 50 hasta 6500 µg/l. Este rango de medida total
se logra por dos métodos, los cuales se deben calibrar de forma separada (D-Dimer low: 50 - 800
µg/l; D-Dimer high: 750 - 6500 µg/l). Si las concentraciones se encuentran por encima del rango de
referencia, la muestra se puede diluir con la solución salina fisiológica.
Especificidad
En un estudio con las siguientes concentraciones de fibrinógeno o de productos de la degradación
del fibrinógeno no se encontraron interferencias:
hasta
FgDp fragmento D 20 mg/l
Fibrinógeno
9 g/l
Las concentraciones elevadas de fibrinógeno o de productos de degradación del fibrinógeno (fragmento D) pueden conducir a valores falsos, elevados o bajos.
Precisión
Los estudios de precisión se realizaron en el BCS®, para lo cual se usaron los plasmas de control DDimer I y II, así como también dos rangos de concentraciones de plasmas humanos (normal y
patológico).
El coeficiente de variación en la serie (precisión intra-assay) se encontró entre 1,3 y 3,0%, y el
coeficiente de variación día a día (precisión inter-assay) entre 0,8 y 3,8%.
Comparación de métodos
El test D-Dimer PLUS se comparó con un método similar existente en el comercio. Se estudiaron
43 plasmas en un rango de concentración de 136 hasta 2216 µg/l. Se encontró un coeficiente de
correlación de 0,99, un punto de corte del eje-y de -109 y una pendiente de 1,21.
Los datos mencionados para las características del test muestran resultados típicos y no se deben
tomar como especificaciones para el D-Dimer PLUS.
Sensibilidad diagnóstica y especificidad
En estudios de pacientes con trombosis venosa profunda o embolia pulmonar con el test D-Dimer
PLUS* se encontraron los siguientes resultados (Intervalo de confidencia 95%):
Instrumento
Limite de decisión
Sensibilidad
(%)
Especificidad
(%)
NPV
(%)
BCS
160 µg/l
BCT**9
130 µg/l
Sysmex®
Sistema
CA-1500*10
130 µg/l
100
(78,2-100)
96,8
(91-99,3)
95,5
(88,9-98,8)
40
(33,2-47,2)
45,2
(38,5-51,8)
47,8
(40,8-54,9)
100
(95,5-100)
97,0
(91,6-99,4)
97,6
(90,3-98,9)
®8
• No volver a congelar.
Materiales adicionales necesarios
Solución salina fisiológica
Plasma Estándar D-Dimer PLUS, N° de ref. OQXA 11
Plasma Control D-Dimer I, N° de ref. OQKA 11
Plasma Control D-Dimer II, N° de ref. OQKB 11
Aparato de medida de la coagulación (ver Limitaciones del desarrollo del test)
Agua destilada
Pipetas
Material a investigar
Para obtener el plasma mezclar cuidadosamente 1 parte de solución de citrato de sodio 0,11 mol/l
con 9 partes de sangre venosa, evitando la formación de espuma. Centrifugar inmediatamente,
aprox. a 3000 r.p.m. (1500 x g) durante 10 min. Separar el plasma sobrenadante.
Estabilidad de la muestra:
entre +15 y +25 °C
4 horas
a ≤ -18 °C
1 mes
Descongelar los plasmas almacenados a ≤ -18°C durante 10 min., a +37°C y realizar la determinación dentro de las 2 horas siguientes. No volver a congelar.
Procedimiento
El desarrollo del test se efectúa de forma automática en aparatos de medida de la coagulación
apropiados. Instrucciones especiales sobre estos aparatos se puede obtener consultando a Dade
Behring.
Observar el manual de operaciones del fabricante!
OQWW G11 C0541 (735) W/H
El uso del D-Dimer PLUS en otros aparatos de medida de la coagulación debe ser validado por el
laboratorio que hace la investigación. En este caso se pueden obtener otros datos diferentes a los
dados para las características.
Calibración
La concentración del dímero D viene dada en µg/l en la etiqueta del plasma estándar D-Dimer
PLUS. Multiplicando por el factor 2, se pueden pasar los resultados a µg/l UEF (Unidades equivalentes de fibrinógeno). Las diluciones necesarias del estándar van a ser efectuadas automáticamente por el aparato de medida de la coagulación. Una nueva calibración debe ser realizada cuando ésta se indique por medio de los controles y cuando se use un nuevo lote.
Control de calidad interno
Los controles D-Dimer se deben medir en el correspondiente rango de medida, por lo menos, cada
8 horas en cada día de trabajo, para poder demostrar el correcto funcionamiento del sistema. El
control de los rango de medidas bajos se realiza con el Plasma control D-Dimer I y de los rangos
superiores con el Plasma control D-Dimer II. Los valores obtenidos del análisis se deben encontrar
dentro del rango de confianza dado en la Tabla de valores teóricos. Si estos valores se encuentran
por fuera del rango de confianza, se debe repetir la medida. Si la desviación se confirma, se debe
realizar una nueva calibración.
Valoración
La concentración en µg/l va a ser calculada automáticamente por el aparato de medir la coagulación, con base en la curva de referencia.
5
Edición Mayo 2003
Número
de muestras
215
312
294
El diseño del estudio viene descrito en la publicación respectiva.
Bibliografía
Ver página 1.
* El Test D-Dimer PLUS es técnicamente idéntico con la versión americana Advanced D-Dimer.
Dividiendo el resultado del Advanced D-Dimer en mg/l por 0,0085 se obtienen las concentraciones en mg/l del D-Dimer PLUS** BCT es una marca de fábrica registrada de Dade Behring Marburg GmbH en Alemania y en
otros países.
BCS es una marca de fábrica registrada de Dade Behring Marburg GmbH en USA, Alemania y en
otros países.
Sysmex es una marca de fábrica registrada de SYSMEX CORPORATION en USA, Alemania y en
otros países.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
D-Dimer PLUS
Interpretação
A concentração em µg/l é calculada automaticamente pelo aparelho de medição da coagulação
com base na curva de referência.
Reagentes para a determinação turbidimétrica de produtos de desintegração reticulados
transversalmente (dímeros D)
Restrições à execução do teste
Âmbito de aplicação
São apropriados os aparelhos de medição da coagulação, para os quais a Dade Behring disponibiliza instruções de uso.
Num estudo, as concentrações seguintes de substâncias de interferência não provocaram qualquer prejuízo do teste D-Dimer PLUS:
até
Heparina
2,5 IU/ml
Factors reumatoides
98 IU/ml
As substâncias de interferência bilirubina, hemoglobina e lípide estão descritas nas instruções de
uso específicas do instrumento.
As experiências com anticorpos humanos anti-rato (HAMA) não foram efectuadas com o teste DDimer PLUS. As amostras dos pacientes que contêm anticorpos heterófilos ou as dos pacientes
que receberam preparações de anticorpos monoclonais de rato para diagnóstico ou terapia, podem apresentar valores erradamente altos ou erradamente baixos, se forem testadas com ensaios
que utilizam anticorpos monoclonais.
Independentemente da concentração de D-Dimer, esporadicamente podem ocorrer sequências de
reacção não específicas e, por conseguinte, em determinados casos, a diluição das amostras pode
provocar resultados divergentes7.
D-Dimer Plus é um teste turbidimétrico reforçado com látex para a determinação quantitativa de produtos de desintegração de fibrina reticulados transversalmente (dímeros D) no plasma humano.
Significado diagnóstico
A activação da coagulação conduz à desintegração do fibrinogénio em fibrina. As moléculas de fibrina
resultantes agregam-se espontaneamente e são reticuladas transversalmente pelo factor XIIIa, formando-se um coágulo de fibrina. A activação do sistema de fibrinólise conduz à conversão do plasminogénio na protease activa, a plasmina, a qual desintegra o fibrinogénio e a fibrina nos fragmentos D
e E. Em virtude das reticulações transversais entre os domínios D no coágulo de fibrina são liberados,
sob a acção da plasmina, produtos de desintegração de fibrina com domínios D reticulados transversalmente. A unidade mais pequena é o dímero D. A determinação de produtos de desintegração
reticulados transversalmente, os dimeros D, portanto, é um indicativo duma fibrinólise reactiva1.
O significado da determinação do dímero D situa-se no diagnóstico de eventos tromboembólicos.
Concentrações aumentadas de dímero D indicam a existência de um coágulo, tendo sido relatados
em casos de trombose venosa profunda da perna2, embolia pulmonar3,4 e coagulação intravascular
disseminada5. Se se obtiverem resultados de dímero D situados abaixo do limite de decisão, os
eventos tromboembólicos com valor diagnóstico negativo específico do teste podem ser excluídos.
Princípio metodológico
As partículas de poliestireno, às quais está ligado covalente um anticorpo monoclonal (DD5) contra a
região de reticulação transversal de produtos de desintegração de fibrina reticulados transversalmente, aglutinam quando são misturadas com amostras contendo dímero D. A região de reticulação
transversal tem estrutura simétrica invertida, i.e. o epitopo para o anticorpo monoclonal existe duas
vezes. Por isso, é suficiente um anticorpo para desencadear uma reacção de aglutinação, a qual é
detectada por via turbidimétrica através duma aumento da turvação.
Reagentes
Conteúdo da embalagem comercial
Kit de teste, prod. n° OQWW 11 com
6 x para 4 ml Reagente D-Dimer PLUS
6 x para 5 ml Acelerador D-Dimer PLUS
1 x 25 ml Agente de Reconstituição D-Dimer PLUS
Composição
O Reagente D-Dimer PLUS, liofilizado; contém partículas de poliestireno, anticorpos monoclonais
do rato, albumina sérica humana, tricina (0,02 mol/l), sacarose (máx. 50 g/l).
Conservante:
azida sódica (< 1 g/l)
O Acelerador D-Dimer PLUS é preparado a partir dum plasma misto de doadores saudáveis seleccionados, suplementado de uma preparação de dímero D, estabilizado com solução tampão de
Hepes (12 g/l) e liofilizado.
Conservante:
5-cloro-2-metil-4-isotiazol-3-ona e
2-metil-4-isotiazol-3-ona (máx. 10 mg/l)
Agente de Reconstituição D-Dimer PLUS, líquido; solução fisiológica de cloreto de sódio, tamponada.
Conservante:
azida sódica (< 1 g/l)
Advertências e medidas de precaução
1. Somente para uso diagnóstico in vitro.
2. No manejo de agentes de diagnóstico in vitro contendo azida sódica deve observar-se o seguinte:
Evitar a ingestão e o contacto com a pele e as mucosas. A azida sódica pode formar azidas explosivas com metais pesados, tais como o cobre e o chumbo. No caso de ser despejada num esgoto,
escoar com um grande volume de água, para evitar uma acumulação de azida.
3. O D-Dimer PLUS contém componentes de origem humana. Cada doação de sangue individual,
destinada à preparação destes componentes, foi analisada quanto à presença de antígeno de
hepatite Bs, anti-HCV, anti-HIV1 e anti-HIV2. Para a preparação, utilizaram-se somente
doações com resultado negativo. Independentemente disso e uma vez que nunca se pode excluir totalmente o risco de contaminação por agentes patogénicos, todos os materiais obtidos a
partir de sangue humano devem ser manuseados com o devido cuidado, observando-se as
medidas de segurança recomendadas no caso de risco biológico6.
Preparação dos reagentes
Os componentes da embalagem combinada são específicos para os lotes. A utilização de outras
combinações de componentes que não os mencionados na embalagem combinada pode provocar
resultados erróneos. Dissolver o conteúdo de um frasco de Reagente D-Dimer PLUS em 4 ml de
agente de reconstituição e deixar em repouso durante 5 minutos à temperatura ambiente (+15 até
+25°C), agitando-se ocasionalmente. O reagente é colocado numa das posições do aparelho de
medição de coagulação. Dissolve-se um frasco de Acelerador D-Dimer PLUS em 5 ml de água
destilada e deixa-se repousar durante aprox. 15 minutos, à temperatura ambiente (+15 a+25 °C),
agitando-se ocasionalmente. O reagente é colocado numas das posições do aparelho de medição
de coagulação. Antes de usar, agitar os reagentes brevemente.
Estabilidade e condições de conservação
O kit de teste na embalagem inviolada deve ser conservado a uma temperatura de +2 até +8°C,
sendo utilizável até a data indicada no rótulo.
Estabilidade após reconstituição ou depois de aberto pela primeira vez (frasco fechado):
Temperatura
Reagente
Acelerador
Agente de Reconstituição
D-Dimer PLUS
D-Dimer PLUS
D-Dimer PLUS
+2 até +8 °C
5 dias
5 dias
12 semanas
≤ -18 °C•
2 semanas
2 semanas
• Não congelar de novo.
Outros materiais necessários
Solução fisiológica de cloretio de sódio
Plasma Padrão D-Dimer PLUS, n° de encomenda OQXA 11
Plasma de Controlo D-Dimer I, n° de encomenda OQKA 11
Plasma de Controlo D-Dimer II, n° de encomenda OQKB 11
Aparelho de medição de coagulação (vide Restrições à execução do teste)
Água destilada
Pipetas
Intervalo de referência
Num estudo com pessoas aparentemente saudáveis (n=136) obtiveram-se os dados seguintes
com o BCS®: valor médio: 141,7 µg/l; mediano: 126,4 µg/l; intervalo central de 90%: 63,8 µg/l 246,4 µg/l. O intervalo de referência varia de laboratório para laboratório, em função da técnica
utilizada. Níveis elevados de dímero D foram medidos durante a gravidez, em caso de toma de
contraceptivos orais, idade avançada, actividade física, stress e em várias situações clínicas. Para
tomar em consideração todas as grandezas de influência, cada laboratório deverá definir para cada
população por si tratada intervalos de referência próprios ou limites de decisão clínicos.
O aumento da concentração de D- Dimer observado nas situações tromboembólicas pode ser muito
diverso, em função da localização, da extensão e da antiguidade do trombo. Por isso, também não é de
excluir com segurança uma situação destas para os valores dentro do intervalo de referência dos indivíduos aparentemente saudáveis4. Por isso, os resultados das determinações com D-Dimer só deverão
ser avaliados em conexão com outros resultados de laboratórios e informações sobre o quadro clínico.
Características do teste
Intervalo de medição e sensibilidade
O intervalo de medição no BCS® estende-se de 50 até 6500 µg/l. Este intervalo de medição total é
obtido por meio de dois métodos, que devem ser calibrados separadamente (dímero D baixo: 50800 µg/l; dímero D alto: 750-6500 µg/l). No caso de concentrações acima do intervalo de medição,
a amostra pode ser diluída em solução fisiológica de cloreto de sódio.
Especificidade
Num estudo, as seguintes concentrações de fibrinogénio ou produtos de desdobramento do fibrinogénio não provocaram qualquer interferência:
até
Fragmento D FgDp
20 mg/l
Fibrinogénio
9 g/l
As concentrações mais elevadas de fibrinogénio ou de produtos de desdobramento do fibrinogénio
(Fragmento D) podem provocar valores erradamente elevados ou erradamente baixos.
Precisão
Com o BCS® realizaram-se estudos de precisão, nos quais foram utilizados os Plasmas de Controlo D-Dimer I e II, assim como 2 concentrações de plasma humano (normal e patológico).
O coeficiente de variação na série (precisão intra-assay) situou-se entre 1,3 e 3,0%, o coeficiente
de variação de um dia para outro (precisão inter-assay), entre 0,8 e 3,8%.
Comparação de métodos
O teste D-Dimer PLUS foi comparado com um teste de dímero D comercial. Analisaram-se 43
plasmas no intervalo de concentrações de 136 até 2216 µg/l. Obteve-se um coeficiente de correlação de 0,99, uma intersecção de eixos de -109 e uma inclinação de 1,21.
Os dados mencionados para as características do teste são resultados típicos, não podendo ser
considerados como especificações para o D-Dimer PLUS.
Sensibilidade diagnóstica e especificidade
Em estudos com pacientes com suspeita de trombose venosa profunda da perna ou embolia
pulmonar, com o teste* D-Dimer obtiveram-se os seguintes resultados (intervalo de confiança de 95%:
Instrumento Limite de decisão
BCS®8
160 µg/l
BCT**9
130 µg/l
Sysmex® 130 µg/l
CA-1500
System*10
Especificidade
(%)
40
(33,2-47,2)
45,2
(38,5-51,8)
47,8
(40,8-54,9)
NPV (%)
Número de
amostras
215
100
(95,5-100)
97,0
312
(91,6-99,4)
97,6
294
(90,3-98,9)
A concepção do estudo está descrita nas publicações respectivas.
Bibliografia
Vide a página 1.
* Tecnicamente o teste D-Dimer PLUS é idêntico à versão americana Advanced D-Dimer. Dividindo os resultados do Advanced D-Dimer mg/l por 0,0085, obtém-se as concentrações D-Dimer
PLUS em µg/l.
** BCT é uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH na Alemanha e noutros países.
BCS é uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH in Nos EUA, Alemanha e noutros
países.
Sysmex é uma marca registada da SYSMEX CORPORATION nos EUA, Alemanha e noutros países.
Amostras
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
Para a obtenção de plasma, misturar cuidadosamente 1 ml de solução de citrato de sódio 0,11 mol/
l com 9 partes de sangue venoso, evitando a formação de espuma. Centrifugar imediatamente
durante 10 minutos a cerca de 3.000 rpm (1.500 x g) e remover o plasma sobrenadante.
Estabilidade da amostra:
+15 até +25°C
4 horas
≤ - 18°C
1mês
Descongelar os plasmas conservados a ≤ -18°C dentro de 10 minutos a +37°C e executar a determinação dentro de 2 horas. Não congelar de novo.
Symbols Key / Symbolschlüssel / Explication des Symboles / Interpretazione
simboli / Clave de los Símbolos / Chave dos Símbolos
Realização do teste
A realização do teste efectua-se automaticamente no aparelho de medição da coagulação adequado. A pedido, a Dade Behring fornece instruções especiais para os aparelhos de medição da
coagulação. Seguir as instruções do serviço do fabricante!
A utilização de D-Dimer PLUS em outros aparelhos de medição da coagulação tem de ser validada pelo
laboratório de investigação. Neste caso, podem obter-se outros dados diferentes dos indicados.
Calibração
A concentração do dímero D é indicada em µg/l no rótulo do Plasma Padrão D-Dimer PLUS. Multiplicando com o factor 2, os resultados podem ser convertidos em UEF µg/l (unidades equivalentes
de fibrinogénio). As diluições necessárias do padrão são executadas automaticamente pelo aparelho de medição da coagulação. Efectuar uma nova calibração quando esta é assinalada pelos
controlos ou quando se utiliza um novo lote de produção.
Controlo de qualidade interno
Os controlos D-Dimer deverão ser efectuados, em conjunto, em cada dia de teste, de 8 em 8 horas
no mínimo, para mostrar o funcionamento correcto do sistema na respectiva faixa de medição. O
controlo da faixa de medição inferior é efectuado com Plasma de Controlo I D-Dimer e o controlo da
faixa de medição superior é efectuado com Plasma de Controlo II D-DimerI. O valor analítico obtido
tem de situar-se no escalão de referência da tabela de valores nominais indicados. Se os valores
obtidos se situarem fora do escalão de referência, a medição tem de ser repetida. Se se confirmarem desvios, é necessário executar uma nova calibração.
Edição Maia 2003
OQWW G11 C0541 (735) W/H
6
Sensibilidade
(%)
100
(78,2-100)
96,8
(91-99,3)
95,5
(88,9-98,8)
Manufactured by / Hergestellt von / Fabriqué par / Prodotto da / Fabricado por
IVD
In Vitro Diagnostic Medical Device / In Vitro Diagnosticum / Dispositif Médical Diagnostic In
Vitro / Dispositivo Medico per Diagnostica In Vitro / Producto sanitario para Diagnóstico In Vitro
LOT
Lot Number / Chargenbezeichnung / Numéro de Lot / Numero di Lotto / Número de Lote
EXP
CCYY-MM-DD
Expiration Date / Verfalldatum / Date de Péremtion / data di scadenza / Fecha de
vencimiento / termo da validade
Storage Temperature / Lagertemperatur / Température de Conservation / Temperatura
di conservazione / Temperatura de almacenamiento / Temperatura de armazenagem
CE Mark / CE-Zeichen / Marquage CE / Marchio CE / CE Marca / Marca CE
REF
Catalogue Number / Katalog Nummer / Référence / Codice Catalogo / Número de Catálogo
Consult Instructions for Use / Gebrauchsanweisung beachten / Consulter la Notice d’Utilisation /
Istruzioni per l’uso / Consultar Instucciones para el Uso / Consulte as Instruções de Utilização