Propagacion de material libre de patógenos
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Propagacion de material libre de patógenos
Producción de material propagativo libre de patógenos en ornamentales Dra. Martha Lidya Salgado Siclán Facultad de Ciencias Agrícolas Universidad Autónoma del Estado de México En México, la producción de plantas ornamentales reviste una gran importancia cultural, socioeconómica y ambiental. En nuestro país se aprovechan más de 1,000 especies y variedades, de ornamentales ocupando una superficie de alrededor de 20,000 hectáreas, distribuidas en 20 estados de la república y generando 150,000 empleos directos. Actualmente, 90% de la producción ornamental está destinada a satisfacer el mercado local y se dirige principalmente a la ciudad de México, Guadalajara y Monterrey. Así, sólo 10% de la producción se exporta como flor de corte y esquejes. La gran demanda del mercado interior de nuestro país hace poco atractiva la idea de buscar con mayor empeño el mercado de exportación Introducción La propagación de plantas es importante en la producción de flores y follajes de corte, puesto que de la calidad de semilla utilizada (sexual o vegetativa) dependerá la calidad del producto final así como la sanidad y productividad del cultivo La propagación de muchas especies ornamentales se realiza mediante la manipulación de plantas madres seleccionadas que poseen características deseables o que han sido mejoradas genéticamente y de las cuales se obtiene semilla vegetatitiva (bulbos, rizomas, hijuelos, plantas in vitro) con características especiales como: resistencia a enfermedades mayor rendimiento mayor calidad menor variabilidad genética. Sin embargo, muchas especies de ornamentales se propagan a partir de semilla sexual híbrida. En éste caso, ésta debe ser adquirida a casas comerciales especializadas para garantizar las características deseadas de calidad y sanidad. Entre las alternativas para incrementar el mercado de exportación se encuentra el mejoramiento en la calidad de la flor en rosa, gerbera, clavel y crisantemo, así como la producción de especies exóticas y tropicales, tomando gran importancia la producción de follajes verdes y deshidratados. Es importante considerar las tendencias y novedades, calidad, así como los procesos de producción más amigables con el medio ambiente. Patógenos presentes en ornamentales Virus AMV Hospedante Ssíntomas Asclepia,pelargonium, petunia, kalanchoe, primula Jaspeado anillos cloróticos, deformación foliar, amarillamiento enanismo Freesia, gladiolo, petunia Enchinamiento foliar, mosaico, variegado BBWV Begonia, petunia, zinnia Moteado, manchas anulares CMC (Cucumber Mosaic Virus) Anémona, begonia, caléndula, crisantemo, gerbera, dalia, Lily, pelrgonium, lisiantus Variegado, manchas anulares, enanismo, deformación foliar, mosaico, ancha anular necrótica, mancha anular clorótica. HCRSV Hibicus Manchas cloróticas cercanas a la nervadura principal. PnMV Nochebuena Mosaico ligero PZSV pelargonium Mancha clorótica concéntrica TSWV Alstromeria, begonia, ciclamen, dalia, crisantemo, belén, petunia ranunculus (Alfalfa Mosaic Virus) BYMV (Bean Yelow (Mosaic Potyvirus) (Broad Bean Wilt Fabavirus) (Hibicus Chlorotic ringsspot Carmovirus) (Pelargonium flowerbreak Carmovirus) (Pelargonium Zonate Spot Ourmiavirus) (Tomato Spotted Wilt Tospovirus) Síntomas de origen viral en ornamentales INSV-coleus INSV-begonia INSV -Impatien PnMV-nochebuena CMV-petunia TSWV-crisantemo Tipos de propagación asexual Esquejes Bulbos Rhizomas Hijuelos Cultivo de tejidos Propagación por rizomas o bulbos Especies como Zingiberales y Zantedeschia aethiópica se reproducen por rizomas. Los rizomas son plantados directamente en campo o en almácigos. Propagación por bulbos/cormos Lillium spp se reproducen por bulbos. La siembra de bulbos siempre se realiza de forma directa a las camas de siembra. Narcizo Propagación por rizomas o bulbos Especies del orden Zingiberales y Araceae se reproducen naturalmente por rizomas. Por ello es necesario realizar la practica de deshije a fin de mantener una densidad de siembra apropiada. Los hijuelos son utilizados como semilla para siembras nuevas. La herramienta debe estar limpia , afilada y desinfectada a fin de que el corte sea limpio y se evite la entrada de patógenos que puedan causar la muerte de la planta madre. Al terminar el deshije de una planta se debe desinfectar la herramienta antes de proceder a realizar la labor en otra, ya que patógenos como bacterias y virus se propagan por medio de herramienta infectada. Para la desinfección se utiliza Hipoclorito de sodio al 20%, Agrodyne al 5% o Timsem 2 gramos por litro de agua, asperjado sobre la herramienta. Propagación por esquejes Especies como clavel y crisantemo, aunque pueden ser reproducidas por semilla, a nivel de cultivo comercial se reproducen por esqueje a fin de evitar la variabilidad genética. Las plantas madre libres de virus no se destinan a la producción de flor si no a la obtención de material de propagación por lo que se mantienen en invernaderos aislados, libres de infecciones y pulgones (transmisores de virus). Los esquejes de plantas madres jóvenes enraízan más rápidamente y tienen mejor desarrollo que los procedentes de plantas viejas, en clavel el tiempo es máximo de 15 meses. Solamente se utilizan para propagación aquellos esquejes totalmente sanos. Propagación por enraizamiento de esquejes los esquejes recién cosechados deben ser llevados a los bancos de enraizamiento para evitar la deshidratación. El enraizamiento se debe realizarse en invernadero bajo un sistema de nebulización intermitente con humedad relativa del 100% hasta que hayan emitido raíces. El sustrato utilizado debe ser inerte, poroso y estar libre de patógenos como arena, grava , piedra pómez pulverizada o minerales como perlita y vermiculita. Para acelerar el enraizamiento de los esquejes se aplicación de ácido naftalenacético (ANA) bien sea por inmersión de los esquejes en una solución con hormona o aplicando directamente la hormona en polvo en la base de la estaca. crisantemo Injerto de rosal Multiplicar un Rosal por injerto consiste sencillamente en tomar una yema de una variedad e injertarla sobre un rosal silvestre que actúa como patrón o portainjerto (ejs. de patrones son la Rosa canina,la Rosa englantería o el híbrido 'Manetti'). De esta yema que injertemos saldrá un brote que dará lugar a la copa (ramas, hojas y flores). En el campo se tienen largas lineas plantados de patrones a los que se injertá la variedad que se quiera. Esquejes de ornamentales Esquejes leñosos Esquejes de hoja Saintpaulia, Peperomia, Afelandra. Esquejes semi leñosos Propagación de tulipan Desinfección del bulbo Se sumerge el bulbo en una solución de thiabendazol 2 gr / lt de agua durante 10 min. Para acelerar la brotación y emergencia de la planta, agregar 200 ppm de ácido giberélico. Propagación del gladiolo DESINFECCIÓN DE BULBOS: Mediante la inmersión de los bulbos en una solución preparada a base de Tecto-60 o Bavistin o Cercobin o Amistar, en dosis de 5 gr/lt de agua durante un periodo de 10 minutos Propagación de lisiantus El lisianthus es una planta originaria de la zona meridional de los Estados Unidos y norte de México. Pertenece a la familia de las Gencianáceas, su nombre científico es Eustoma grandiflorum. Su reproducción se realiza normalmente por semilla aunque también se puede hacer por esqueje o por cultivo in vitro de tejidos Propagación de Nochebuena La Nochebuena se propaga por esquejes suaves tomados de la planta madre, la propagación con semilla, la utilizan los mejoradores para el cruzamiento y obtención de nuevas variedades. Los esquejes de poinsettias son susceptibles a muchas enfermedades como Botrytis, Erwinia, Rhizoctonia, mosquita negra (mosquita de los hongos). Torres s/f Propagación de Alcatraz (Zantedetechia spp) Por semilla Por división de bulbo Separación de hijuelos Cultivo in vitro Hernandez,2013) Propagación de Alstroemeria spp Los cultivares de Alstroemeria se propagan sólo vegetativamente, por división de rizomas. Normalmente deben ser removidas y divididas cada tercer o cuarto año, dependiendo del cultivar y de las características del crecimiento. Previo a la desinfección, la zona de corte de los explantes fue asperjada con una solución que contenía dos fungicidas (Bentale®-Captan®, 2g l1); Su desinfección se inició con un lavado y un cepillado para remover los catafilos, y se les sumergió en una solución de hipoclorito de sodio (NaOCl) al 2,5% por 30 min, Se llevaron a cabo tres enjuagues en agua destilada estéril, lo que corresponde a una modificación del método de desinfección de brotes florales inmaduros utilizado por Olate et al. (2009) en Alstroemeria lutea y Alstroemeria pseudospathulata. Letelier, 2012 Previo a la desinfección, la zona de corte de los explantes fue asperjada con una solución que contenía dos fungicidas (Bentale®-Captan®, 2g l-1); su desinfección se inició con un lavado y un cepillado para remover los catafilos, y se les sumergió en una solución de hipoclorito de sodio (NaOCl) al 2,5% por 30 min, se llevaron a cabo tres enjuagues en agua destilada estéril, lo que corresponde a una modificación del método de desinfección de brotes florales inmaduros utilizado por Olate et al. (2009) en Alstroemeria lutea y Alstroemeria pseudospathulata. Micropropagación de Heliconia standleyi Se aplicó un protocolo que permitió la micropropagación de la especie ornamental Heliconia standleyi Macbride. Se estudiaron variantes de desinfección, medios de cultivo y manejo de explantes durante las diferentes etapas del proceso y finalmente su aclimatación. Durante la fase de establecimiento in vitro de la especie, se logró una desinfección óptima con hipoclorito de sodio (NaOCl) al 2%, durante 20 min en medio liquido, y los mejores resultados durante la multiplicación se lograron con el medio suplementado con 6–BAP (2.0 mg·litro–1), AIA (0.65 y 1.3 mg·litro–1) y cuando las vitroplantas tenían un tamaño mayor de 1.0 cm en medio semisólido, mismas que alcanzan un coeficiente de multiplicación de 4.6 explantes por ápice. Éstos llegan a enraizar adecuadamente con la adición de ácido indolacético (1.3 mg·litro–1) al medio y se aclimatan satisfactoriamente a los 45 días siempre que las vitroplantas tengan entre 3 – 5 cm de altura. Sosa 2009 Micropropagación de gerbera La gerbera se puede propagar por medio de semilla, división de planta, esqueje o cultivo in vitro. Este último método de propagación ofrece la posibilidad de obtener plantas homogéneas, en mayor cantidad, libres de patógenos y en cualquier época del año. Olivera-Ortega 2000 Micropropagación de Gerbera jamessonii Losresultados mostraron que con el empleo de Hipoclorito de Sodio al 0.5% durante 10 minutos, se logró una alta desinfección de los ápices. Combinando el 6 encilaminopurina (1.0 mg.l-1) y el ácido giberélico (0.1 mg.l-1) en el medio de cultivo fue posible incrementar el número de brotes por explantes durante el establecimiento. En la multiplicación los mejores resultados se obtuvieron con la combinación de 6-BAP (2.0 mg.l-1) con AIA (0.65 y 1.3 mg.l-1), subcultivando los explantes mayores de 1.0 cm individualmente y en medio de cultivo semisólido. Una influencia significativa sobre el número de raíces y el crecimiento de los explantes se obtuvo adicionándole ácido indolacético al medio de cultivo de enraizamiento y utilizando para el subcultivo explantes mayores de 3.0 cm. La calidad de los explantes influyó significativamente en la aclimatización, demostrando que las plantas in vitro enraizadas deben tener más de 3.0 cm de altura. Machado,2002 Virus en orquídeas Los virus reportados en orquídea son virus mosaico amarillo del frihol (BYMV), Virus mosaico del cymbidium (CymMV), viru de los puntos anillados del odontoglossum (ORSV) y el virus mosaico del pepino (CMV) NORMA Oficial Mexicana NOM-007-FITO-1995, Por la que se establecen los requisitos fitosanitarios y especificaciones para la importación de material vegetal propagativo PAIS DE ORIGEN COLOMBIA ORNAMENTALES Ejemplo de exportación a otro pais IMPORTACION DE MATERIAL ORNAMENTAL A ECUADOR PAIS N.PRODUCTO N.BOT REQUISITO FITOSANITARIO MEX Gypsophila G. paniculata • • • • CERTIFICADO FITOSANITARIO INTERNACIONA L (CFI). INSPECCION. TRATAMIENTO. TOMA DE MUESTRA DECALRACION ADICIONAL TRATAMIENTO FUENTE LIBRE DE: Liriomyza hudobrensis TCS-33 Abamectin a dosis 1 gr de ia/100 L. Deberá especificar el tratamiento Hoja de requisito no. 11625 SAGARPA -MEXICO 5 OCT, 2009. PROPAGACION POR CULTIVO DE TEJIDOS Micropropagación in vitro En fresco esteril Aclimatación Cámara de cultivo Plántula enraizada Propagación in vitro La micropropagación A partir de una planta madre, se obtienen numerosos explantes que, sujetos a condiciones y medios de cultivo adecuados, darán lugar a nuevas plantas iguales o similares a la planta original, permitiendo su multiplicación. Adaptado de “Biotecnología”, UNQ 2006 Micropropagación La micropropagación, constituye uno de los métodos biotecnológicos que mayores logros ha aportado al desarrollo de la agricultura. El número de especies hortícolas, frutícolas, ornamentales y forestales que se multiplican por algunas de las técnicas del cultivo in vitro, es cada vez mayor, así son más numerosas las empresas comerciales que se dedican a la producción de plantas por medio de esta técnica (Razdan, 2003). La propagación in vitro permite: La obtención de gran número de plantas Elimina infecciones causadas por virus Incorporar genes de resistencia a diferentes enfermedades. Esta técnica se utiliza para propagar plantas a partir de plantas madres por lo que las plántulas obtenidas son idénticas entre si a la planta madre (clones). Las técnicas de cultivo de tejidos permiten solucionar el problema fitosanitario, ya que favorecen la conservación de genotipos y la regeneración de materiales vegetales uniformes y libres de plagas y enfermedades. El cultivo de meristemos es un método comúnmente utilizado para la propagación clonal y para la erradicación de patógenos, en especial, hongos y virus en numerosas ornamentales Cultivos como el crisantemo, con alta susceptibilidad a las virosis y enfermedades como la roya blanca son propagados in Vitro para obtener plantas madre de donde posteriormente se obtendrán los esquejes para cultivo. Propagación in vitro Cultivos como el crisantemo, con alta susceptibilidad a las virosis y enfermedades como la roya blanca son propagados in Vitro para obtener plantas madre de donde posteriormente se obtendrán los esquejes para cultivo. Como material inicial para el cultivo de meristemos se deben utilizar vástagos jóvenes en crecimiento de 10 - 15 cm de longitud, que acaben de desarrollarse sus hojas. Los vástagos utilizados para sacar los explantes se deben limpiar previamente para lo cual se retiran las hojas siempre que sea posible, y entonces los vástagos (o yemas, si no se han retirado las hoja) se sumergen durante unos minutos en alcohol de 70 % para eliminar el aire que pueda haber atrapado. Después se realiza la esterilización en Ca (OCl)2 y finalmente se lava con agua estéril. Se retiran las hojas, trabajando con la ayuda de un estereomicroscopio (aumento de 20 - 40 x) y se repite el procedimiento de limpieza con tiempos de exposición más cortos o concentraciones mas bajas de Ca (OCl)2. se usa alcohol de 70 % (v/v) para la segunda esterilización, no haciéndose en este caso ningún aclareo más. Se retiran entonces uno por uno los primordios foliares y hojas restantes, trabajando con la ayuda del estereomicroscopio y bisturí y se obtienen los explantes, generalmente pequeños cuadros de tejido que se siembran inmediatamente en el medio de cultivo. Aunque en principio todos los meristemos de vástago de una planta son adecuados como material inicial, en realidad, la posibilidad de éxito depende del tipo de yema o vástago (terminal o axilar) y / o de la posición de la yema (basal o terminal). Cada especie vegetal diferente, e incluso distintas variedades de una misma especie pueden requerir un medio nutritivo diferente. Los meristemos se aíslan sobre medio sólido, aunque en algunos casos se utilizan medios líquidos. El pH por lo general se sitúa entre 5.4 y 6, siendo la sacarosa el azúcar habitual (2 - 5 % p/v). Frecuentemente se utiliza vitaminas: Vitamina B1, piridoxina, ácido nicotínico, ácido pantoténico. Los reguladores suelen utilizarse en bajas concentraciones (0.1 - 0.5 mg l -1); la auxina puede ser necesaria para la formación de raíces, auxinas y citoquininas para estimular la división celular; el GA3 se añade a veces para lograr la elongación del vástago Planta de Clavel libre de virus por cultivo de meristemos Virus presentes en clavel: Virus Mosaico de las nervaciones del clavel (CaVM) Virus Jaspeado del Clavel ( CaERV) Virus del Moteado Necrótico del clavel (CaNFV) Virus Moteado del clavel (CarMV) La prueba ELISA detectó la presencia del virus moteado del clavel (CarMV) en esquejes de 5 varieades de clavel. la concentración del virus se redujo utilizando el método combinado de termoterapia y cultivo in vitro de meristemos Es de suma importancia establecer cultivos de clavel libres del virus CarMV, ya que la calidad y cantidad de las flores se ve aumentada en compración del material infectado con el virus Afanador Pérez 2005 MICROPROPAGACION DE CLAVEL DESINFECCION DE APICES ESTADIO II PROLIFERACION DISECCION DE MERISTEMOS ESTADIO I CULTIVO DE MERISTEMOS EN MEDIO SOLIDO ESTADIO IV ADAPTACION Y TRANSFERENCIA A SUELO Pérez S/F ESTADIO III ENRAIZAMIENTO DE PLANTAS EN MS MICROPROPAGACION DE AVE DE PARAISO Pérez S/F Propagación in vitro para obtención de planta sana Se pueden obtener también plantas libres de hongos y de bacterias por el cultivo de meristemos. Los géneros importantes de bacterias que se pueden eliminar son: Erwinia, Pseudomonas, Xanthomonas y Bacillus. Los géneros mas importantes de hongos son: Fusarium, Verticillium, Phythophthora y Rhizoctonia. Se puede utilizar un medio rico en nutrientes, en algunas ocasiones conteniendo peptona, triptona y extracto de levadura, para determinar de una forma rápida si una planta esta libre o no de bacterias y hongo ventajas de la propagación in Vitro: Multiplicación masiva y rápida. Permite propagar especies que no pueden ser multiplicadas en forma tradicional. Obtención de plantas con mayor vigor Obtención de planta libres de enfermedades. Homogeneidad del material. Debido a que se necesita una cantidad de material relativamente pequeña para iniciar un cultivo in Vitro, se puede realizar una cuidadosa selección del mismo. Ahorro de espacio con respecto de los sistemas tradicionales. Conservación del material genético. Fácil transporte e intercambio de material vegetal. Desventajas de la propagación in Vitro: En algunos sistemas de propagación in vitro la estabilidad genética es débil. Las plantas producidas in vitro pueden mostrar características poco convenientes in vivo: Excesiva producción de ramas laterales y paso total a la fase juvenil. La aclimatación (endurecimiento) de las plántulas al medio ambiente exterior es un proceso difícil en el que se puede tener un porcentaje elevado de pérdida de material. Variación de respuesta entre los genotipos. Alto costo de establecimiento de laboratorio, lo que incide indirectamente en el precio final de la planta producida de esta manera. Propagación in vitro de papa /Termoterapia 1 2 3 4 5 Eliminación de virus de plantas de papa Producción de Plantas de Papa Libres de Virus Usando Cultivo de Meristemo La disponibilidad de material inicial libre de patógenos es un pre-requisito para cualquier programa de micropropagación. Las plantas producidas por medio de cultivo de meristemos, libres de patógenos, pueden mantenerse indefinidamente por cultivo de tejidos, las cuales garantizan un constante flujo de plantas libres de enfermedades. Para la confirmación y mantenimiento de la identidad clonal, tal stock in vitro necesita, regularmente, estar sujeto a pruebas, por lo menos una vez por un año. La micropropagación es un método de cultivo de tejidos (in vitro) usado para una rápida multiplicación de plantas en medios nutritivos artificiales bajo El ambiente controlado. El ambiente controlado y aséptico del laboratorio de cultivo de tejidos proporciona las condiciones óptimas para la multiplicación de plantas Lab. Cultivo de Tejidos de FCA, UAEM Diagnosticó/Indexación: ELISA Ocampo, 2013 Diagnóstico/ Indexación: PCR Ocampo, 2013 Diagnóstico/ indexación: biológicos Ocampo, 2013 Pruebas para producir planta libre de virus (Indexación biológica, Serológica, Molecular) ESTAPA CLAVEL PELARGONIUM MATERIAL INICIAL Dos indexaciones por año: Una indexación por año - Prueba biológica -Pruebas biológicas _ C. quinoa/CarMV, CRSV, CVMV, CLV C. quinoa/Todos los virus _ Silenearmeria/ ICNFV - ELISA/ PFBV, PLPV - Inspección visual - Inspección visual MATERIAL DE PROPAGACION (Mat. Prebase) Una indexación por año: - ELISA: CarMV - Inspección visual Indexación por sondeos - ELISA: PFBV - Inspección visual MATERIAL CERTIFICADO Indexaciones periódicas: - ELISA: CarMV - Inspección visual Indexación - ELISA: PFBV - Inspección visual Albouy & Devergne, 2000 Producción in vitro de Dalia Indexación Multiplicación Fragmantación de nudos Cultivo de meristemos Conservación Recolección Cultivo en campo Indexación Aclimatación Albouy & Devergne, 2000 Producción de material vegetal libre de patógenos Plantas “candidatas” Controles virológicos Planta infectada Planta sana Material Inicial (S0) Micropropagacion In vitro Planta sana Controles virológicos Material de propagación (S1, S2, Sn) Controles virológicos Lote sano Planta madre certificada (Sn) (Material de base) Lotes conformes Controles virológicos Material Certificado Comercializado (bulbos, esquejes, injertos) Albouy & Devergne, 2000 Callogénesis Se puede definir el callo en cultivo de tejidos como un tejido obtenido por medio del aislamiento de órganos o tejidos diferenciados, los cuales posteriormente son llevados a una desdiferenciación celular, presentando estas células una proliferación continua, acelerada y de apariencia desorga-nizada, que da origen a una masa amorfa de tejido. Inducción Callogénesis Envejecimiento Proliferación Diferenciación Cultivo de meristemos A partir de un meristemo aislado, se puede obtener una planta completa. Adaptado de “Biotecnología”, UNQ 2006 Antivirales en propagación in vitro La producción de plantas libres de virus a partir de plantas madre infectadas también se puede mejorar aplicando químicos que inhiben o interfieren con la replicación o el movimiento del virus. Estos químicos antivirales, generalmente, se incorporan en los medios de cultivo de meristemos. Se ha probado una variedad de compuestos naturales o sintéticos por su potencial en la eliminación de DNA y ARN de virus de plantas. La guanosina análoga de ribavirina (Virazole, 1-D-ribofuranosyl-1,2,4triazole-3-carboxamide), el uracilo análogo del DHT (5dihydroazauracil) y el DHT derivado, diacetyl-5-dihydroazauracil (DADHT) son las tres substancias que han demostrado ser particularmente eficaces inhibiendo diferentes virus de plantas (Hansen 1988). Cassells (1987) observó que la quimioterapia in vitro de explantes meristemáticos con el químico antiviral ribavirina fue el más prometedor para la eliminación de virus en papa. CORRIENTE ELECTRICA EN CONTROLDE VIRUS EN PROPAGACION El uso de la corriente eléctrica en el saneamiento de enfermedades virales en diversas especies vegetales. Sin embargo, no existe hasta la fecha, un conocimiento profundo de los fenómenos biofísicos que intervienen en este proceso. El Instituto de Investigaciones en Viandas Tropicales establecio programas de saneamiento de material vegetal que utilizan la corriente eléctrica directa con buenos resultados. Con el uso de la metodología de saneamiento a enfermedades virales del grupo de los Potivirus en ñame (Dioscorea spp.), 15 volts durante cinco minutos, en 25 segmentos nodales del genotipo Pacala Duclos¨ (D. alata) se midió la corriente eléctrica individual en cada explante, para determinar la relación entre los valores de absorvancia (VA), obtenidos como salida del ensayo micro-ELISA y las potencia eléctrica (P) aplicada en cada caso. Los resultados obtenidos demuestran la existencia de una relación hiperbólica VA=f(1/P) demostrándose que el efecto de saneamiento es consecuencia del aumento de la temperatura a que son sometidas las partículas virales en el interior del tejido vegetal. CONTAMINACION MICROBIOLOGICA CONTAMINANTE MAT T.PROPAGACIO PROPAGACION N FUENTE B.subtilis Banana micropropagación Carranza, et Pseudomonas picketti, Klebsiella planticola, B. subtilis, Streptococcus intermedius, Pediococcus sp. Y Streptomyces sp. Aspergillus niger, A. oryzae, Chaenophora cucurbitarum, Trichoderma viride, Mucor mucedo, Monilia sitophila, Penicillium spp., Colletotrichum gloesporioides, Botrytis cinerea, Chaetopsis griseus y Cladosporium cladosporiodes Musa spp. Fase multiplicación Carranza et al.,2006 E.herbicola Gypsophila Propagacion en suelo Noreña,2002 Rhizoctoniz solani Pythium sp. Gyspsophila enraizamiento Garces,2014 al., 2006 Cultivo de Meristemo en un Programa de certificación Cultivo de Meristemo en un Programa de certificación Cultivo de Meristemo en un Programa de certificación Certificación de empresas propagadoras. Plántulas, esquejes, bulbos, estacas, material injertado. Bancos de Germoplasma de ornamentales in vitro Son sitios para la conservación de los recursos genéticos en condiciones controladas de laboratorio y que involucran diversas técnicas de cultivo y almacenamiento in vitro. Se busca maximizar la diversidad de ejemplares recolectados de poblaciones en campo o en su centro de origen. La unidad de colección que se mantiene en condiciones controladas puede ser la semilla botánica o explantes vegetativos, dependiendo principalmente del hábito de crecimiento de la especie. Conclusiones Establecer programas de certificación de material propagativo Aumentar el numero de empresas de propagación certificada Mas apoyo en el diagnostico con técnicas moleculares en material propagativo Capacitación en el manejo de material propagativo Establecer control regional en toda la cadena productiva Cultura de prevención y certificación Con todo lo señalado, se espera hacer de la horticultura ornamental del siglo XXI sea una actividad altamente productiva, eficiente y de alta calidad fitosanitaria.