La responsabilidad del LNR ante la presencia de enfermedades
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La responsabilidad del LNR ante la presencia de enfermedades
Dirección General de Epidemiología/InDRE Subsecretaría de Prevención y Promoción de la Salud Agenda La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos de LNR y OPS Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna) Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia epidemiológica en el LNR InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades Emergentes (EVE) Perspectivas (activos y no reactivos) Agenda La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos de LNR y OPS Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna) Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia epidemiológica en el LNR InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades Emergentes (EVE) Perspectivas (activos y no reactivos) La vigilancia de Arbovirus en el contexto de LNR/OPS/RELDA En 2009 se acuerda oficializar la Red-InDRE forma parte de la Red Se define comité consultivo RELDA, 4 Coordinadores regionales y Laboratorios nacionales Actualmente 30 países involucrados (México incluido) La vigilancia de Dengue y otros Arbovirus en el contexto de OPS/RELDA Estructura organizativa y funcional de la RELDA COORDINADOR SECRETARÍA TÉCNICA Programa Regional de Dengue OPS/OMS Dra. Guadalupe Guzmán, IPK, Cuba COMITÉ TÉCNICO CONSULTIVO NML Canada CDC Puerto Rico Dr. Harvey Arstob Dr. Elizabeth Hunsperger Canadá Puerto Rico NORTE AMÉRICA NML (CAN) – CDC (PUR) IPK Cuba Dr. Delfina Rosario Dr. Susana Vázquez Dr. Pedro Vasconcelos Dr. Ana Cecilia Cruz Cuba COORDINADORES SUBREGIONALES MÉXICO Y CENTRO AMÉRICA InDRE (MEX) – INCIENSA (COR) CANADA: NML COSTA RICA: INCIENSA PUERTO RICO: CDC Dengue Branch EL SALVADOR: ULC USA: CDC- Atlanta IEC Brazil Brasil ANDINA Y CONO SUR INHRR (VEN) – LCSP (PAR) INEVH Argentina Dr. Delia Enria Dr. Silvana Levi Argentina EL CARIBE PASTEUR (FRG) -JAMAICA BOLIVIA: CENETROP BELIZE: CML COLOMBIA: INS CAREC: COUNTRY MEMBERS GUATEMALA: LNS ECUADOR HONDURAS: LNV PERÚ: INS MÉXICO: InDRE VENEZUELA: INHRR NICARAGUA: CNDR ARGENTINA PANAMÁ: ICGES BRAZIL: IEC FRENCH GUYANA: PASTEUR GUYANA: NPHRL OTRAS REGIONES - OMS JAMAICA EURO WPRO SEARO MARTINICA: CHU ESPAÑA ISC III CHILE: ISP REP. DOMINICANA: LNSPDD PARAGUAY: LCSP SURINAME: CLPH URUGUAY La vigilancia de Arbovirus en el contexto de OPS/RELDA Reunión Dengue Net La Habana Cuba 2004 1ra Reunión RELDA Buenos Aires Argentina Taller de diagnóstico y caracterización de virus dengue Tegucigalpa, Honduras Taller de buenas prácticas de laboratorio . TDR/OMS/OPS Taller de buenas prácticas de laboratorio . TDR/OMS/OPS Panamá, Panamá La habana, Cuba Curso para Instructores para diagnóstico dengue, CDC Atlanta, Georgia EEUU agosto 2529,2014 Reunion en México D.F. InDRE Para analizar paneles de evaluación serológica y molecular y 2015 La vigilancia de Arbovirus en el contexto de LNR/OPS/RELDA Fortalecer las capacidades técnicas y científicas de cada uno de los laboratorios de Dengue y otros Arbovirus en la Región Homologar los protocolos de laboratorio Promover evaluaciones de estuches comerciales y métodos de diagnóstico Intercambiar reactivos de referencia Apoyar con la implementación de Sistemas de Gestión de la Calidad Integrar toda la capacidad científica y técnica para responder oportunamente en brotes y epidemias La vigilancia de Dengue, CHIK, ZIKA, promovida por OPS/RELDA en el contexto de EGI Componentes técnicos: 1.Epidemiología - Vigilancia integrada y preparación a brotes 2. Laboratorio (incluye la vigilancia para DENV, CHIKV y ZIKAV) 3.Atención al paciente 4.Manejo Integrado de Vectores (MIV) 5.Gestión del ambiente 6.Vacuna (preparación ante la eventual introducción) Agenda La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos de LNR y OPS Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna) Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia epidemiológica en el LNR InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades Emergentes (EVE) Perspectivas (activos y no reactivos) Retos para la Vigilancia Epidemiológica por Laboratorio de Arbovirus Mejores Metodologías: Mayor desempeño (sensibilidad y especificidad) – Estuches comerciales Con capacidad para de brindar resultados oportunos para la toma de acciones (rápidos y precisos) Que sean accesibles para todos los laboratorios Contar con metodologías de referencia en todos los países (LNR) DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serología Retos para la Vigilancia Epidemiológica por Laboratorio para Arbovirus Mejores Algoritmos: Que contemplen marcadores inmunológicos y moleculares con mayor capacidad de entender la enfermedad e interpretar formas graves Que contemplen la detección diferencial bajo una buena definición de caso sospechoso – Lo que no es Dengue, es CHIK, lo que no es CHIK es Zika, lo que no es Zika; que es?? Que promuevan metodologías multidetección (DENV, CHIKV, ZIKAV, WNV, y otros-Leptospira, Rickettsia DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serología Retos para la Vigilancia Epidemiológica por Laboratorio para Arbovirus Mejores estrategias con carácter anticipatorio: Dengue Detección de virus en mosquitos (Vigilancia entomo- ZIKA virológica) puede promover la detección oportuna de la circulación de un Arbovirus y facilitar la toma oportuna de acciones de control. Ir detrás de los casos promueve en ocasiones llegar tarde Existencia de reacciones cruzadas entre Arbovirus promueve la necesidad de contar con mejores pruebas serológicas Promover la toma de calidad en muestras en fase aguda DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serologíaón de CHIK WNV Capacidad metodológica para Arbovirus en el LNR VIROLÓGICOS MOLECULARES SEROLÓGICOS AISLAMIENTO VIRAL RT- PCR punto final Células C6/36 RT- PCR tiempo real (“Singleplex”, “Duplex” “Multiplex”) Secuenciación ANTICUERPOS IgM IgG BHK21 Vero DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serología ANTÍGENO NS1 MNT Pruebas rápidas Evolución de las metodologías = Evolución de algoritmos 1985 Aislamiento viral (15 días) 1995 RT-PCR punto final (72-96 hrs), análisis post amplificación 2005 2015… RT-qPCR normal (48 hrs) RT-qPCR multiplex, fourplex, duplex… (varios blancos) Capacidad Instalada en México: El éxito de la vigilancia epidemiológica por laboratorio RNLSP con capacidad de Vigilancia Molecular RNLSP con capacidad de Vigilancia Serológica Baja California y Tlaxcala no tienen implementado el RT-qPCR. Aguascalientes (amarillo) esta en fase de implementación por evidencia de circulación vectorial DGE/InDRE 15 Agenda La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos de LNR y OPS Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna) Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia epidemiológica en el LNR InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades Emergentes (EVE) Perspectivas (activos y no reactivos) Algoritmos proactivos Muestras de 0-5 días de iniciada la fiebre Muestras de ≥ 6 hasta 12 días de iniciada la fiebre POS ELISA NS1 ELISA IgM NEG NO POS Se confirma caso NEG De 4 a 5 Días de Evolución (IgM) ELISA IgG POS Se confirma caso SI POS ELISA IgM NEG ELISA POS IgG (de 0-5 días de evolución) NEG Se confirma caso Con base en definición de caso Continuar con Dx diferencial FD: Chikungunya, ZIKA EFE´s FHD: Leptospirosis Ricketsiosis Fiebre amarilla ( en caso de viaje a zona endémica) NEG Métodos serológicos para Arbovirus Vigilancia serológica por MAC ELISA en InDRE Y estuche comercial en LESP Para implementar y sostener la vigilancia de Referencia con este tipo de metodologías se requiere autonomía: Muchos laboratorios son dependientes de CDC u otras instituciones Se necesitan producir antígenos en instalaciones especificas (BSL3) DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Serología Kit RT-qPCR Dengue - CDC: Ejemplo de homologación metodológica propuesta por OPS para el diagnóstico de Dengue Implementación a toda la RNLSP en 2016 Santiago, 2013 , CDC Validado en InDRE para uso en dos plataformas de amplificación (Applied 7500 y CFX96) Kit RT-qPCR Dengue - CDC (robustez en la vigilancia) Applied 7500 Cuatro serotipos y RP DENV-2 DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo RP DENV-3 DENV-1 DENV-4 Nuevas y mejores Metodologías: Protocolo dúplex DENV/CHIKV • Una mezcla de reacción • Mismo protocolo de amplificación para ambos virus • Se identifican simultáneamente co-infecciones con DENV(serotipo)/CHIKV-ZIKAV • Optimización de reactivos (enzima) e insumos • Aplicado a muestras de humanos y moscos. DENV2 DENV1 DENV4 DENV3 CHIKV Protocolo de Amplificación DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Curvas de Amplificación Gráficos “DUPLEX” DENV/CHIKV CHIKV DENV1, 2, 3, 4 CHIKV/DENV1, 2, 3, 4 CHIKV DENV1/CHIKV DENV2/CHIKV DENV3/CHIKV DENV4/CHIKV DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo NEGATIVO Inclusión del RP (control interno) en la reacción de RT-qPCR para detección de Virus Chikungunya CHIKV-RP CHIKV-RP Escala lineal Escala logarítmica CHIKV RP DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Verificación de metodologías en InDRE para uso en dos plataformas de amplificación (Applied 7500 y CFX96) DENV-1 DENV-2 Eficiencias de reacción correctas DENV-3 DENV-4 -1 -2 -3 -4 -5 -6 DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Coeficientes de Variación correctas Ct obtenido 15.12 18.5 21.53 25.07 28.31 31.12 Ct esperado 18.32 21.62 24.82 28.02 31.22 Sistema de Gestión de la Calidad, aplicado En el Diagnóstico y Referencia “DUPLEX” DENV-ZIKAV B En una sola reacción detección de cinco virus Ahorro de insumos E A D C Ahorro de tiempo Detección simultanea Gráfico de amplificación reacción dual (Controles positivos en la misma mezcla de reacción): A) DENV-1, B) DENV-2, C) DENV-3, D) DENV-4 Y E) ZIKAV. DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Arbovirus y virus hemorrágicos División Biología Molecular/ Innovación y Desarrollo “DUPLEX” DENV/ZIKA DENV 1/ZIKAV B DENV 2/ZIKAV A A B DENV 3/ZIKAV B DENV 4/ZIKAV B A A DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Arbovirus y virus hemorrágicos División Biología Molecular/ Innovación y Desarrollo “DUPLEX” Dengue/ZIKA Precisión, Coeficiente de variación y pendiente dentro de los estándares 25 x 10-7 copias de genoma 25 copias de genoma Dilución Curva 1 Curva 2 Curva 3 Concentrado 11.84 12.13 12.66 10-1 15.15 14.53 15.30 10-2 18.69 18.33 18.89 10-3 22.07 21.77 21.56 10-4 25.05 25.03 25.68 10-5 28.05 28.27 27.84 10-6 32.10 31.90 32.20 10-7 34.83 34.17 34.67 Selectividad con otro patógenos Única amplificación para ZIKAV Arbovirus y virus hemorrágicos División Biología Molecular/ Innovación y Desarrollo Chikungunya Encefalitis Equina de Venezuela Dengue 1-4 Sarampión Fiebre Amarilla Rubeóla Encefalitis del Nilo Occidental Influenza PDM Encefalitis Equina del Este Leptospira Encefalitis Equina del Oeste Rickettsia Plataforma Multi-diagnóstico en desarrollo para Arbovirus Basado en micro-fluidos En un mismo proceso extrae material genético y realiza proceso de amplificación Detección de hasta diez agentes etiológicos (virus por separado, familias de virus) DENV CUATRO SEROTIPOS, CHIKV, ZIKV, WNV, LEPTOSPIRA, RICKETTSIAS, MALARIA, SARAMPION, RUBEOLA… DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Genotipificación de DENV DENV-2 DENV-1 Cosmopolita Americano /africano Asiático Pacifico Sur América/Asia Asiático DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Genotipificación de DENV DENV-3 DENV-4 Genotipo I Genotipo III Genotipo II Genotipo II Genotipo IV DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo CRONOLOGÍA DEL INGRESO DE LOS CUATRO SEROTIPOS DEL VIRUS DENGUE EN MÉXICO 2015 2014 DENV-2 ASIATICO/AMERICANO DENV-3 GEN-III DENV-4 GEN-II DG ?? DG DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Genotipificación de CHIK EU703760.1 Malaysia 2006 HM045797.1 Indonesia 1985 HM045789.1 Thailand 1988 HM045814.1 Thailand 1975 FJ807897.1 Indonesia 2007 HM045808.1 Thailand 1978 EU703759.1 Malaysia 2006 HM045791.1 Indonesia 1983 66 HM045790.1 Philippines 1985 MEX Jalisco 2014 - Cultivo KJ451622.1 YAP 2013 62KJ451624.1 British Virgin Islands 2014 KC488650.1 Philippines 2012 KF318729.1 China Zhejiang 2012 73 MEX Coahuila 2014 - Cultivo MEX Chiapas 2014 - Muestra HM045796.1 Thailand 1995 97 HE806461.1 New Caledonia:2011 HM045810.1 Thailand 1958 HM045803.1 India 1963 95 HM045813.1 India 1963 HM045788.1 India 1973 HM045809.1 DR Congo 1960 82HM045784.1 Central African Republic 1984 67 HM045812.1 Uganda 1982 HM045822.1 Central African Republic 1978 HM045823.1 Angola 1962 JF274082.1 India 2006 EU244823.2 Italy 2007 99 GU189061.1 Sri Lanka 2006 HQ456251.1 Comoros 2005 FJ445510.2 Singapore 2008 AF490259.3 Tanzania 1953 HM045786.1 Nigeria 1974 HM045818.1 Ivory Coast 1981 100 90 AY726732.1 Senegal 1983 0.02 DGE/InDRE BIMO Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Ya se cuentan con secuencias de genoma completo Asiático East/Central/South African (ECSA) West African Vigilancia Entomovirológica El éxito y los resultados provienen del trabajo en Conjunto y multidisciplinario ENTOMOLÓGICA VIROLÓGICA DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Vigilancia con carácter ACTIVO y no reactivo Vigilancia Entomovirológica 2012.- Detección de DENV-4 en moscos antes de que se detectaran los casos en humanos 2013.- Detección de DENV-4 en humanos Aislamiento viral Detección molecular Detección de antígeno NS1 Biol. DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serología Especie Serotipo identificado por RT-qPCR Jojutla A. aegypti♀ DENV-1 Jojutla A. aegypti♀ DENV-1 Puerto Municipio Vallarta Municipi o Vigilancia Entomovirológica 2011 No. De grupo Serotipo identificado por RT-PCR Fourplex en tiempo real 16 3 2 DENV-2/DENV-4 Localidad de captura. DENV-2 Col. Repobladores Col. Emiliano Zapata Col. Emiliano Zapata DENV-4 Sinaloa Distrito Federal Estado de México Estado de México Aguascalientes Nayarit Yautepec Zacatecas E C Te mi xco Cozumel B A C Tepalcingo Jojutla A D B Axochiapan Tlaquiltenango Michoacán Quintana Roo F Colima Puebla Guerrero Biol. DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Serotipo identificado por RT-PCR Fourplex en tiempo real DENV-2 DENV-1/DENV-2 DENV-1 Resultados de la vigilancia entomovirológica 2014 Año 2014 ESTADO NO. DE GRUPOS RESULTADO Chiapas 36 10 POSITIVOS A CHIK Durango 1 NEGATIVO Guanajuato 1 NEGATIVO Guerrero 8 8 POSITIVOS A CHIK Jalisco 43 NEGATIVO Michoacán 33 NEGATIVO Morelos 8 3 NEGATIVOS, 4 DENV-1, 1 DENV-4 Nuevo León 3 NEGATIVO Tamaulipas 22 NEGATIVO Veracruz 10 NEGATIVO TOTAL 165 DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorragicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo ESTADO Chiapas Chiapas Chiapas Chiapas Chiapas Chiapas Chiapas Chiapas Chiapas Chiapas LOCALIDAD Tuxtla Gutiérrez Tuxtla Gutiérrez Tuxtla Gutiérrez Tuxtla Gutiérrez La Libertad La Libertad Rayón Rayón Rayón La Libertad ESTADO Guerrero Guerrero Guerrero Guerrero Guerrero Guerrero Guerrero Guerrero CHIKUNGUNYA MUNICIPIO Tuxtla Gutiérrez Tuxtla Gutiérrez Tuxtla Gutiérrez Tuxtla Gutiérrez Suchiate Suchiate Suchiate Suchiate Suchiate Tuxtla Chico CHIKUNGUNYA LOCALIDAD RESULTADO Vicente Guerrero Positivo (29.30) Vista Hermosa Positivo (26.84) Niños Héroes Positivo (27.68) Libertad Positivo (21.66) Juchitán Positivo (33.90) Sin dato Positivo (17.37) Sin dato Positivo (34.60) Sin dato Positivo (18.05) RESULTADO Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Resultados de la vigilancia entomovirológica 2015 Necesario intensificar la vigilancia entomo virologica Aprovechar la ventaja de esta vigilancia. AÑO 2015 ESTADO NO. DE GRUPOS RESULTADO Chiapas 28 22 NEGATIVO Y 6 POSITIVOS Morelos Amacuzac (Teacalco) 41 1 POSITIVO A DENV-1 Tabasco 5 NEGATIVO Veracruz 1 NEGATIVO Guerrero 17 14 POSITIVOS CHIK, 3 NEGATIVOS TOTAL 92 DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Búsqueda anticipada y preventiva ZIKA Panel de Evaluación Externa del Desempeño para Arbovirus en la RNLSP de México Panel exclusivo para serología (IgM e IgG) Envío anual Panel exclusivo para serología (IgM, IgG) Envío semestral DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serología Panel exclusivo para serología (IgM, IgG) Se incluye NS1 Panel exclusivo para serología (PAN-SER-DEN) y Biología Molecular RT-qPCR por separado (NAT-DEN) Panel para Serología Algorítmico) y Biología Molecular RT-qPCR Por separado Panel algorítmico y diferencial (IgM, IgG, NS1) y RT-qPCR y Serología DENV Y CHIKV) “SMART-ARBO” Panel algorítmico (IgM, IgG, NS1 y RT-qPCR) “SMART-DEN” Paneles de Evaluación Externa del Desempeño Internacional al LNR – Propuesto por CDC y RELDA 100% de concordancia en Biología Molecular (RT-qPCR) y Serología (MAC ELISA) DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serología Paneles de Evaluación Externa del Desempeño Internacional - ENIVD • • DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serología Análisis serológico MAC ELISA, ELISA Comercial InBIOS Análisis Molecular qRT-PCR y qRT-PCR “DUPLEX” Agenda La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos de LNR y OPS Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna) Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia epidemiológica en el LNR InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades Emergentes (EVE) Perspectivas (activos y no reactivos) InDRE a la vanguardia en el estudio de infecciones virales emergentes y reemergentes Para el estudio y Diagnostico por Laboratorio, el InDRE ha diseñado la colaboración interdisciplinaria. DENV ZIKAV CHIKV El InDRE ha participado en Wet Lab para la detección de Filovirus a nivel internacional (2011) . El InDRE forma parte de la iniciativa en seguridad para la salud global. El InDRE participa en paneles internacionales para el estudio de patógenos desconocidos. **Se cuenta con personal altamente capacitado y con protocolos estandarizados. Preparación proactiva Para el Diagnostico por Laboratorio, el InDRE ha diseñado la colaboración interdisciplinaria. DGE BIMO DGE BSL3 DGE DVIR LARB DGE Infraestructura: Laboratorio de Bioseguridad Nivel 3 Inactivación de muestras en una CBS tipo III Área completamente contenida Manejo en una CBS tipo II Algoritmo para la Vigilancia de EVE Estándar de servicio de máximo 48 horas Toma de muestra con menos de 7 días de evolución Recepción de muestras en InDRE ………….. Buenas prácticas de Laboratorio Nivel 3 Inactivación de muestra Extracción de RNA FIlovirus negativo Diagnóstico diferencial: Dengue, Fiebre amarilla, Leptospira spp, Rickettsias spp. FIlovirus positivo Secuenciación RT-PCR para Identificación de especie: [Zaire y Sudan] InDRE InDRE Envío CDC Informe de resultados http://www.who.int/csr/bioriskreduction/interim_recommendations_filovirus.pdf?ua=1 Estándar de servicio de máximo 72 horas RT-PCR para Filovirus Clasificación: Base para la identificación Familia Filovirus Género Ébola Especie Zaire Sudan Reston Budinbunyo Tai Forest (EBOV) (SUDV) (RESTV) (BDBV) (TAFV) Identificación de Familia (Filovirus) 1 Iniciadores para identificación de Filovirus Amplifican un fragmento de 419 pb del gen L que codifica para la polimerasa Identifican todos los Filovirus conocidos (Ebola/Marburg) Punto final Filo A 5` ATCGGATTTTTCTTTCTCATT 3` 13214-13235 Filo B 5` ATGTGGTGGGTTATAATAATCACTGACATG 3` 13558-13587 Identificación del género Ébola virus Ebo Sud BMG + 5` GCCATGGNTTCAGGTTTGAG 3` Ebo Sud BMG - 5` GGTNACATTGGGCAACAATTCA 3` Ebo Sud BMG Probe 5` FAM ACGGTGCACATTCTCCTTTTCTCGGA BHQ-1 3` 2 3 Iniciadores para identificación de la cepa Sudán Amplifican un fragmento del gen NP que codifica para la Nucleoproteína Tiempo Real Iniciadores para identificación de la cepa Bundibugyo Amplifican un fragmento del gen NP que codifica para la Nucleoproteína Tiempo Real EboU965 + 5` GAGAAAAGGCCTGTCTGGAGAA 3` EboU1039 - 5` TCGGGTATTGAATCAGACCTTCTT 3` EboU989Probe 5` FAM TTCAACGACAAATCCAAGTGCACGCA BHQ-1 3` Identificación de las especies de Ébola virus Especies Zaire Gen NP que codifica para la ZAI-NP1 Nucleoproteína (Punto final) (EBOV) 268 pb Sudan Gen NP que codifica para la Nucleoproteína (Tiempo real) (SUDV) Reston (RESTV) Budinbunyo (BDBV) Tai Forest (TAFV) Gen NP que codifica para la Nucleoproteína (Punto final) 337 pb ZAI-NP2 5´-GGACCGCCAAGGTAAAAAATGA-3´ 5´-GCATATTGTTGGAGTTGCTTCTCAGC-3´ EboU965 + 5` GAGAAAAGGCCTGTCTGGAGAA 3` EboU1039 - 5` TCGGGTATTGAATCAGACCTTCTT 3` EboU989Pro be 5` FAM TTCAACGACAAATCCAAGTGCACGCA BHQ1 3` RES-NP1 5´-GTATTTGGAAGGTCATGGATTC -3´ RES-NP2 5’ –CAAGAAATTAGTCCTCATCAATC-3´ Gen NP que codifica para la Nucleoproteína (Tiempo real) Ebo Sud BMG + 5` GCCATGGNTTCAGGTTTGAG 3` Ebo Sud BMG - 5` GGTNACATTGGGCAACAATTCA 3` Ebo Sud BMG Probe 5` FAM ACGGTGCACATTCTCCTTTTCTCGGA BHQ-1 3` Documentación establecida 24/26 Agenda La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos de LNR y OPS Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna) Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia epidemiológica en el LNR InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades Emergentes (EVE) Perspectivas (activos y no reactivos) Perspectivas DENV (CUATRO SEROTIPOS, GENOTIPOS) CHIKV ZIKA WNV MAYARO Implementación de vigilancia proactiva Algoritmo de diagnóstico SIKA Algoritmo en fase aguda Algoritmo en fase aguda Laboratorio certificado y Acreditado Por algoritmo de diagnóstico Certificación ISO 9001:2008 Acreditación ISO 15189, por la Entidad Mexicana de Acreditación (EMA) Detección de Antígeno NS1 Detección de anticuerpos IgM (ELISA de captura) Detección de Anticuerpos IgG (ELISA de captura) Detección de RNA de virus dengue mediante RT-qPR “Multiplex” Detección de RNA de virus dengue mediante RT-qPCR “Fourplex” DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarroll División Serología o Laboratorio de Arbovirus y virus hemorrágicos QFB. Alma Núñez León QBP. Rosalba Pérez Meza QFB. Yanelli Adriana Torres Olmos QFB. Claudia Rosales Jiménez T.L. Adela Monserrat Aparicio Antonio Apoyo Admvo. Rosa María Herrera Bautista M. en C. María de la Luz Torres Rodríguez M. en C. Mauricio Vázquez Pichardo DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División de serología GRACIAS Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos CISCO: 59410, 59591 [email protected]