La responsabilidad del LNR ante la presencia de enfermedades

Transcripción

La responsabilidad del LNR ante la presencia de enfermedades
Dirección General de Epidemiología/InDRE
Subsecretaría de Prevención y Promoción de la Salud
Agenda
 La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos
de LNR y OPS
 Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores
algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna)
 Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia
epidemiológica en el LNR
 InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades
Emergentes (EVE)
 Perspectivas (activos y no reactivos)
Agenda
 La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos
de LNR y OPS
 Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores
algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna)
 Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia
epidemiológica en el LNR
 InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades
Emergentes (EVE)
 Perspectivas (activos y no reactivos)
La vigilancia de Arbovirus en el contexto de LNR/OPS/RELDA
 En 2009 se acuerda oficializar la Red-InDRE forma parte de la
Red
 Se define comité consultivo RELDA, 4 Coordinadores regionales
y Laboratorios nacionales
Actualmente 30 países involucrados (México incluido)
La vigilancia de Dengue y otros Arbovirus en el contexto
de OPS/RELDA
Estructura organizativa y funcional de la RELDA
COORDINADOR
SECRETARÍA TÉCNICA
Programa Regional de Dengue OPS/OMS
Dra. Guadalupe Guzmán,
IPK, Cuba
COMITÉ TÉCNICO CONSULTIVO
NML
Canada
CDC
Puerto Rico
Dr. Harvey Arstob
Dr. Elizabeth Hunsperger
Canadá
Puerto Rico
NORTE AMÉRICA
NML (CAN) –
CDC (PUR)
IPK
Cuba
Dr. Delfina Rosario
Dr. Susana Vázquez
Dr. Pedro Vasconcelos
Dr. Ana Cecilia Cruz
Cuba
COORDINADORES SUBREGIONALES
MÉXICO Y CENTRO AMÉRICA
InDRE (MEX) – INCIENSA (COR)
CANADA: NML
COSTA RICA: INCIENSA
PUERTO RICO:
CDC Dengue Branch
EL SALVADOR: ULC
USA: CDC- Atlanta
IEC
Brazil
Brasil
ANDINA Y CONO SUR
INHRR (VEN) – LCSP (PAR)
INEVH
Argentina
Dr. Delia Enria
Dr. Silvana Levi
Argentina
EL CARIBE
PASTEUR (FRG) -JAMAICA
BOLIVIA: CENETROP
BELIZE: CML
COLOMBIA: INS
CAREC: COUNTRY
MEMBERS
GUATEMALA: LNS
ECUADOR
HONDURAS: LNV
PERÚ: INS
MÉXICO: InDRE
VENEZUELA: INHRR
NICARAGUA: CNDR
ARGENTINA
PANAMÁ: ICGES
BRAZIL: IEC
FRENCH GUYANA:
PASTEUR
GUYANA: NPHRL
OTRAS REGIONES - OMS
JAMAICA
EURO
WPRO
SEARO
MARTINICA: CHU
ESPAÑA ISC III
CHILE: ISP
REP. DOMINICANA:
LNSPDD
PARAGUAY: LCSP
SURINAME: CLPH
URUGUAY
La vigilancia de Arbovirus en el contexto de OPS/RELDA
Reunión Dengue
Net
La Habana Cuba
2004
1ra Reunión
RELDA
Buenos Aires
Argentina
Taller de
diagnóstico y
caracterización de
virus dengue
Tegucigalpa,
Honduras
Taller de buenas
prácticas de
laboratorio .
TDR/OMS/OPS
Taller de buenas
prácticas de
laboratorio .
TDR/OMS/OPS
Panamá, Panamá
La habana, Cuba
Curso para
Instructores para
diagnóstico
dengue, CDC
Atlanta, Georgia
EEUU agosto 2529,2014
Reunion en
México D.F.
InDRE
Para analizar
paneles de
evaluación
serológica y
molecular y
2015
La vigilancia de Arbovirus en el contexto de LNR/OPS/RELDA
 Fortalecer las capacidades técnicas y científicas de cada
uno de los laboratorios de Dengue y otros Arbovirus en la Región
 Homologar los protocolos de laboratorio
 Promover evaluaciones de estuches comerciales y
métodos de diagnóstico
 Intercambiar reactivos de referencia
 Apoyar con la implementación de Sistemas de Gestión
de la Calidad
 Integrar toda la capacidad científica y técnica para responder
oportunamente en brotes y epidemias
La vigilancia de Dengue, CHIK, ZIKA, promovida por
OPS/RELDA en el contexto de EGI
Componentes técnicos:
1.Epidemiología - Vigilancia integrada y
preparación a brotes
2. Laboratorio (incluye la vigilancia para
DENV, CHIKV y ZIKAV)
3.Atención al paciente
4.Manejo Integrado de Vectores (MIV)
5.Gestión del ambiente
6.Vacuna (preparación ante la eventual introducción)
Agenda
 La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos
de LNR y OPS
 Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores
algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna)
 Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia
epidemiológica en el LNR
 InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades
Emergentes (EVE)
 Perspectivas (activos y no reactivos)
Retos para la Vigilancia Epidemiológica por
Laboratorio de Arbovirus
Mejores Metodologías:
Mayor desempeño (sensibilidad y especificidad) –
Estuches comerciales
Con capacidad para de brindar resultados oportunos
para la toma de acciones (rápidos y precisos)
Que sean accesibles para todos los laboratorios
Contar con metodologías de referencia en todos los países (LNR)
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
División Serología
Retos para la Vigilancia Epidemiológica por
Laboratorio para Arbovirus
Mejores Algoritmos:
Que contemplen marcadores inmunológicos y moleculares con
mayor capacidad de entender la enfermedad e interpretar formas
graves
Que contemplen la detección diferencial bajo una buena definición
de caso sospechoso – Lo que no es Dengue, es CHIK, lo que no es
CHIK es Zika, lo que no es Zika; que es??
Que promuevan metodologías multidetección (DENV, CHIKV,
ZIKAV, WNV, y otros-Leptospira, Rickettsia
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
División Serología
Retos para la Vigilancia Epidemiológica por
Laboratorio para Arbovirus
Mejores estrategias con carácter
anticipatorio:
Dengue
 Detección de virus en mosquitos (Vigilancia entomo-
ZIKA
virológica) puede promover la detección oportuna de la
circulación de un Arbovirus y facilitar la toma
oportuna de acciones de control.
 Ir detrás de los casos promueve en ocasiones llegar tarde
 Existencia de reacciones cruzadas entre Arbovirus promueve
la necesidad de contar con mejores pruebas serológicas
 Promover la toma de calidad en muestras en fase aguda
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
División Serologíaón de
CHIK
WNV
Capacidad metodológica
para Arbovirus en el LNR
VIROLÓGICOS
MOLECULARES
SEROLÓGICOS
AISLAMIENTO VIRAL
RT- PCR punto final
Células C6/36
RT- PCR tiempo real
(“Singleplex”,
“Duplex” “Multiplex”)
Secuenciación
ANTICUERPOS
IgM
IgG
BHK21
Vero
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
División Serología
ANTÍGENO NS1
MNT
Pruebas rápidas
Evolución de las metodologías = Evolución de algoritmos
1985
Aislamiento viral
(15 días)
1995
RT-PCR punto final
(72-96 hrs), análisis post
amplificación
2005
2015…
RT-qPCR normal
(48 hrs)
RT-qPCR multiplex,
fourplex, duplex…
(varios blancos)
Capacidad Instalada en México: El éxito de la
vigilancia epidemiológica por laboratorio
RNLSP con capacidad de
Vigilancia Molecular
RNLSP con capacidad de
Vigilancia Serológica
Baja California y
Tlaxcala no tienen
implementado el RT-qPCR.
Aguascalientes (amarillo) esta
en fase de implementación por
evidencia de circulación
vectorial
DGE/InDRE
15
Agenda
 La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos
de LNR y OPS
 Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores
algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna)
 Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia
epidemiológica en el LNR
 InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades
Emergentes (EVE)
 Perspectivas (activos y no reactivos)
Algoritmos proactivos
Muestras de 0-5 días de
iniciada la fiebre
Muestras de ≥ 6 hasta 12
días de iniciada la fiebre

POS
ELISA
NS1
ELISA
IgM
NEG
NO
POS
Se confirma
caso

NEG
De 4 a 5 Días
de Evolución (IgM)
ELISA
IgG
POS
Se confirma
caso

SI
POS
ELISA
IgM
NEG
ELISA
POS
IgG (de 0-5 días
de evolución)
NEG

Se confirma
caso
Con base en definición de caso
Continuar con Dx diferencial
FD: Chikungunya, ZIKA
EFE´s
FHD: Leptospirosis
Ricketsiosis
Fiebre amarilla
( en caso de viaje a
zona endémica)
NEG

Métodos serológicos para Arbovirus
Vigilancia serológica por
MAC ELISA en InDRE
Y estuche comercial en
LESP
Para implementar y sostener la vigilancia de Referencia con este tipo de metodologías se
requiere autonomía: Muchos laboratorios son dependientes de CDC u otras instituciones
Se necesitan producir antígenos en instalaciones especificas (BSL3)
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Serología
Kit RT-qPCR Dengue - CDC: Ejemplo de homologación metodológica
propuesta por OPS para el diagnóstico de Dengue
Implementación a toda la RNLSP en 2016
Santiago, 2013 , CDC
Validado en InDRE para uso en dos plataformas de amplificación (Applied 7500 y
CFX96) Kit RT-qPCR Dengue - CDC (robustez en la vigilancia)
Applied 7500
Cuatro serotipos y RP
DENV-2
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
RP
DENV-3
DENV-1
DENV-4
Nuevas y mejores Metodologías: Protocolo dúplex
DENV/CHIKV
• Una mezcla de reacción
• Mismo protocolo de amplificación para ambos virus
• Se identifican simultáneamente co-infecciones con
DENV(serotipo)/CHIKV-ZIKAV
• Optimización de reactivos (enzima) e insumos
• Aplicado a muestras de humanos y moscos.
DENV2
DENV1
DENV4
DENV3
CHIKV
Protocolo de Amplificación
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Curvas de Amplificación
Gráficos “DUPLEX” DENV/CHIKV
CHIKV
DENV1, 2, 3, 4
CHIKV/DENV1,
2, 3, 4
CHIKV
DENV1/CHIKV
DENV2/CHIKV
DENV3/CHIKV
DENV4/CHIKV
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
NEGATIVO
Inclusión del RP (control interno) en la reacción de RT-qPCR para
detección de Virus Chikungunya
CHIKV-RP
CHIKV-RP
Escala
lineal
Escala
logarítmica
CHIKV
RP
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Verificación de metodologías en InDRE para uso en dos plataformas
de amplificación (Applied 7500 y CFX96)
DENV-1
DENV-2
Eficiencias de reacción
correctas
DENV-3
DENV-4
-1
-2
-3
-4
-5
-6
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Coeficientes de
Variación correctas
Ct obtenido
15.12
18.5
21.53
25.07
28.31
31.12
Ct esperado
18.32
21.62
24.82
28.02
31.22
Sistema de Gestión
de la Calidad, aplicado
En el Diagnóstico y
Referencia
“DUPLEX” DENV-ZIKAV
B
 En una sola reacción
detección de cinco virus
 Ahorro de insumos
E
A
D
C
 Ahorro de tiempo
 Detección simultanea
Gráfico de amplificación reacción dual (Controles
positivos en la misma mezcla de reacción): A) DENV-1, B)
DENV-2, C) DENV-3, D) DENV-4 Y E) ZIKAV.
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Arbovirus y virus hemorrágicos
División Biología Molecular/
Innovación y Desarrollo
“DUPLEX” DENV/ZIKA
DENV 1/ZIKAV
B
DENV 2/ZIKAV
A
A
B
DENV 3/ZIKAV
B
DENV 4/ZIKAV
B
A
A
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Arbovirus y virus hemorrágicos
División Biología Molecular/
Innovación y Desarrollo
“DUPLEX” Dengue/ZIKA
Precisión, Coeficiente
de variación y
pendiente dentro
de los estándares
25 x 10-7 copias
de genoma
25 copias
de genoma
Dilución
Curva 1
Curva 2
Curva 3
Concentrado
11.84
12.13
12.66
10-1
15.15
14.53
15.30
10-2
18.69
18.33
18.89
10-3
22.07
21.77
21.56
10-4
25.05
25.03
25.68
10-5
28.05
28.27
27.84
10-6
32.10
31.90
32.20
10-7
34.83
34.17
34.67
Selectividad con otro patógenos
Única amplificación
para ZIKAV
Arbovirus y virus hemorrágicos
División Biología Molecular/
Innovación y Desarrollo
Chikungunya
Encefalitis Equina de
Venezuela
Dengue 1-4
Sarampión
Fiebre Amarilla
Rubeóla
Encefalitis del Nilo Occidental
Influenza PDM
Encefalitis Equina del Este
Leptospira
Encefalitis Equina del Oeste
Rickettsia
Plataforma Multi-diagnóstico en desarrollo para Arbovirus
Basado en micro-fluidos
En un mismo proceso extrae material genético y realiza proceso de amplificación
 Detección de hasta diez agentes etiológicos (virus por separado, familias de virus)
DENV CUATRO SEROTIPOS, CHIKV, ZIKV, WNV, LEPTOSPIRA, RICKETTSIAS,
MALARIA, SARAMPION, RUBEOLA…
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Genotipificación de DENV
DENV-2
DENV-1
Cosmopolita
Americano /africano
Asiático
Pacifico Sur
América/Asia
Asiático
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Genotipificación de DENV
DENV-3
DENV-4
Genotipo I
Genotipo III
Genotipo II
Genotipo II
Genotipo IV
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
CRONOLOGÍA DEL INGRESO DE LOS CUATRO SEROTIPOS
DEL VIRUS DENGUE EN MÉXICO
2015
2014
DENV-2
ASIATICO/AMERICANO
DENV-3
GEN-III
DENV-4
GEN-II
DG ??
DG
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Genotipificación de CHIK
EU703760.1 Malaysia 2006
HM045797.1 Indonesia 1985
HM045789.1 Thailand 1988
HM045814.1 Thailand 1975
FJ807897.1 Indonesia 2007
HM045808.1 Thailand 1978
EU703759.1 Malaysia 2006
HM045791.1 Indonesia 1983
66 HM045790.1 Philippines 1985
MEX Jalisco 2014 - Cultivo
KJ451622.1 YAP 2013
62KJ451624.1 British Virgin Islands 2014
KC488650.1 Philippines 2012
KF318729.1 China Zhejiang 2012
73 MEX Coahuila 2014 - Cultivo
MEX Chiapas 2014 - Muestra
HM045796.1 Thailand 1995
97
HE806461.1 New Caledonia:2011
HM045810.1 Thailand 1958
HM045803.1 India 1963
95 HM045813.1 India 1963
HM045788.1 India 1973
HM045809.1 DR Congo 1960
82HM045784.1 Central African Republic 1984
67 HM045812.1 Uganda 1982
HM045822.1 Central African Republic 1978
HM045823.1 Angola 1962
JF274082.1 India 2006
EU244823.2 Italy 2007
99 GU189061.1 Sri Lanka 2006
HQ456251.1 Comoros 2005
FJ445510.2 Singapore 2008
AF490259.3 Tanzania 1953
HM045786.1 Nigeria 1974
HM045818.1 Ivory Coast 1981
100
90 AY726732.1 Senegal 1983
0.02
DGE/InDRE
BIMO
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Ya se cuentan con secuencias
de genoma completo
Asiático
East/Central/South
African (ECSA)
West African
Vigilancia Entomovirológica
El éxito y los resultados
provienen del trabajo en
Conjunto y multidisciplinario
ENTOMOLÓGICA
VIROLÓGICA
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Vigilancia con carácter
ACTIVO y no reactivo
Vigilancia Entomovirológica
2012.- Detección de DENV-4 en moscos antes
de que se detectaran los casos en humanos
2013.- Detección de DENV-4 en humanos
Aislamiento viral
Detección molecular
Detección de antígeno NS1
Biol.
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
División Serología
Especie
Serotipo
identificado
por RT-qPCR
Jojutla
A. aegypti♀
DENV-1
Jojutla
A. aegypti♀
DENV-1
Puerto
Municipio
Vallarta
Municipi
o
Vigilancia Entomovirológica 2011
No. De
grupo
Serotipo identificado
por RT-PCR Fourplex
en tiempo real
16
3
2
DENV-2/DENV-4
Localidad de captura.
DENV-2
Col. Repobladores
Col. Emiliano Zapata
Col. Emiliano Zapata
DENV-4
Sinaloa
Distrito Federal
Estado de México
Estado de
México
Aguascalientes
Nayarit
Yautepec
Zacatecas
E
C
Te
mi
xco
Cozumel
B
A
C
Tepalcingo
Jojutla
A
D
B
Axochiapan
Tlaquiltenango
Michoacán
Quintana
Roo
F
Colima
Puebla
Guerrero
Biol.
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Serotipo
identificado
por RT-PCR
Fourplex en
tiempo real
DENV-2
DENV-1/DENV-2
DENV-1
Resultados de la vigilancia entomovirológica 2014
Año
2014
ESTADO
NO. DE
GRUPOS
RESULTADO
Chiapas
36
10 POSITIVOS A
CHIK
Durango
1
NEGATIVO
Guanajuato
1
NEGATIVO
Guerrero
8
8 POSITIVOS A CHIK
Jalisco
43
NEGATIVO
Michoacán
33
NEGATIVO
Morelos
8
3 NEGATIVOS, 4
DENV-1, 1 DENV-4
Nuevo León
3
NEGATIVO
Tamaulipas
22
NEGATIVO
Veracruz
10
NEGATIVO
TOTAL
165
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorragicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
ESTADO
Chiapas
Chiapas
Chiapas
Chiapas
Chiapas
Chiapas
Chiapas
Chiapas
Chiapas
Chiapas
LOCALIDAD
Tuxtla Gutiérrez
Tuxtla Gutiérrez
Tuxtla Gutiérrez
Tuxtla Gutiérrez
La Libertad
La Libertad
Rayón
Rayón
Rayón
La Libertad
ESTADO
Guerrero
Guerrero
Guerrero
Guerrero
Guerrero
Guerrero
Guerrero
Guerrero
CHIKUNGUNYA
MUNICIPIO
Tuxtla Gutiérrez
Tuxtla Gutiérrez
Tuxtla Gutiérrez
Tuxtla Gutiérrez
Suchiate
Suchiate
Suchiate
Suchiate
Suchiate
Tuxtla Chico
CHIKUNGUNYA
LOCALIDAD
RESULTADO
Vicente Guerrero Positivo (29.30)
Vista Hermosa
Positivo (26.84)
Niños Héroes
Positivo (27.68)
Libertad
Positivo (21.66)
Juchitán
Positivo (33.90)
Sin dato
Positivo (17.37)
Sin dato
Positivo (34.60)
Sin dato
Positivo (18.05)
RESULTADO
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Resultados de la vigilancia entomovirológica 2015
Necesario intensificar
la vigilancia entomo
virologica
Aprovechar la ventaja
de esta vigilancia.
AÑO
2015
ESTADO
NO. DE GRUPOS
RESULTADO
Chiapas
28
22 NEGATIVO Y 6 POSITIVOS
Morelos
Amacuzac
(Teacalco)
41
1 POSITIVO A DENV-1
Tabasco
5
NEGATIVO
Veracruz
1
NEGATIVO
Guerrero
17
14 POSITIVOS CHIK, 3 NEGATIVOS
TOTAL
92
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
Búsqueda anticipada
y preventiva
ZIKA
Panel de Evaluación Externa del
Desempeño para Arbovirus en la RNLSP de México
Panel exclusivo
para serología
(IgM e IgG)
Envío anual
Panel exclusivo
para serología
(IgM, IgG)
Envío semestral
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
División Serología
Panel exclusivo
para serología
(IgM, IgG)
Se incluye NS1
Panel exclusivo
para serología
(PAN-SER-DEN)
y Biología
Molecular
RT-qPCR
por separado
(NAT-DEN)
Panel para
Serología
Algorítmico)
y Biología
Molecular
RT-qPCR
Por separado
Panel algorítmico
y diferencial
(IgM, IgG, NS1) y
RT-qPCR y
Serología
DENV Y CHIKV)
“SMART-ARBO”
Panel algorítmico
(IgM, IgG, NS1 y
RT-qPCR)
“SMART-DEN”
Paneles de Evaluación Externa del
Desempeño Internacional al LNR – Propuesto por CDC y RELDA
100% de concordancia en Biología Molecular (RT-qPCR)
y Serología (MAC ELISA)
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
División Serología
Paneles de Evaluación Externa del
Desempeño Internacional - ENIVD
•
•
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
División Serología
Análisis serológico MAC ELISA, ELISA Comercial InBIOS
Análisis Molecular qRT-PCR y qRT-PCR “DUPLEX”
Agenda
 La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos
de LNR y OPS
 Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores
algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna)
 Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia
epidemiológica en el LNR
 InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades
Emergentes (EVE)
 Perspectivas (activos y no reactivos)
InDRE a la vanguardia en el estudio de infecciones virales
emergentes y reemergentes
Para el estudio y Diagnostico por Laboratorio,
el InDRE ha diseñado la colaboración
interdisciplinaria.
DENV
ZIKAV
CHIKV
El InDRE ha participado en Wet Lab para la
detección de Filovirus a nivel internacional (2011) .
El InDRE forma parte de la iniciativa en seguridad
para la salud global.
El InDRE participa en paneles internacionales para
el estudio de patógenos desconocidos.
**Se cuenta con personal altamente capacitado y
con protocolos estandarizados.
Preparación proactiva
Para el Diagnostico por Laboratorio, el InDRE ha diseñado la colaboración interdisciplinaria.
DGE
BIMO
DGE
BSL3
DGE
DVIR
LARB
DGE
Infraestructura: Laboratorio de Bioseguridad Nivel 3
Inactivación de muestras en una CBS tipo III
Área completamente contenida
Manejo en una CBS tipo II
Algoritmo para la Vigilancia de EVE
Estándar de servicio de máximo 48 horas
Toma de muestra
con menos de 7 días de evolución
Recepción de
muestras en InDRE
………….. Buenas prácticas de Laboratorio Nivel 3
Inactivación de
muestra
Extracción de
RNA
FIlovirus negativo
Diagnóstico diferencial:
Dengue, Fiebre amarilla,
Leptospira spp, Rickettsias spp.
FIlovirus positivo
Secuenciación RT-PCR para Identificación
de especie: [Zaire y Sudan]
InDRE
InDRE
Envío CDC
Informe de
resultados
http://www.who.int/csr/bioriskreduction/interim_recommendations_filovirus.pdf?ua=1
Estándar de servicio de
máximo 72 horas
RT-PCR para
Filovirus
Clasificación: Base para la identificación
Familia
Filovirus
Género
Ébola
Especie
Zaire
Sudan
Reston
Budinbunyo
Tai Forest
(EBOV)
(SUDV)
(RESTV)
(BDBV)
(TAFV)
Identificación de Familia (Filovirus)
1
Iniciadores para identificación de Filovirus
Amplifican un fragmento de 419 pb del gen L
que codifica para la polimerasa
Identifican todos los Filovirus conocidos
(Ebola/Marburg)
Punto final
Filo A
5` ATCGGATTTTTCTTTCTCATT 3`
13214-13235
Filo B
5` ATGTGGTGGGTTATAATAATCACTGACATG 3`
13558-13587
Identificación del género Ébola virus
Ebo Sud BMG +
5` GCCATGGNTTCAGGTTTGAG 3`
Ebo Sud BMG -
5` GGTNACATTGGGCAACAATTCA 3`
Ebo Sud BMG Probe
5` FAM ACGGTGCACATTCTCCTTTTCTCGGA BHQ-1 3`
2
3
Iniciadores para identificación de la cepa Sudán
Amplifican un fragmento del gen NP que codifica
para la Nucleoproteína
Tiempo Real
Iniciadores para identificación de la cepa Bundibugyo
Amplifican un fragmento del gen NP que codifica para
la Nucleoproteína
Tiempo Real
EboU965 +
5` GAGAAAAGGCCTGTCTGGAGAA 3`
EboU1039 -
5` TCGGGTATTGAATCAGACCTTCTT 3`
EboU989Probe
5` FAM TTCAACGACAAATCCAAGTGCACGCA BHQ-1 3`
Identificación de las especies de Ébola virus
Especies
Zaire
Gen NP que codifica para la ZAI-NP1
Nucleoproteína (Punto final)
(EBOV)
268 pb
Sudan
Gen NP que codifica para la
Nucleoproteína (Tiempo
real)
(SUDV)
Reston
(RESTV)
Budinbunyo
(BDBV)
Tai Forest
(TAFV)
Gen NP que codifica para la
Nucleoproteína (Punto final)
337 pb
ZAI-NP2
5´-GGACCGCCAAGGTAAAAAATGA-3´
5´-GCATATTGTTGGAGTTGCTTCTCAGC-3´
EboU965 +
5` GAGAAAAGGCCTGTCTGGAGAA 3`
EboU1039 -
5` TCGGGTATTGAATCAGACCTTCTT 3`
EboU989Pro
be
5` FAM TTCAACGACAAATCCAAGTGCACGCA BHQ1 3`
RES-NP1
5´-GTATTTGGAAGGTCATGGATTC -3´
RES-NP2
5’ –CAAGAAATTAGTCCTCATCAATC-3´
Gen NP que codifica para la
Nucleoproteína (Tiempo
real)
Ebo Sud BMG +
5` GCCATGGNTTCAGGTTTGAG 3`
Ebo Sud BMG -
5` GGTNACATTGGGCAACAATTCA 3`
Ebo Sud BMG Probe
5` FAM ACGGTGCACATTCTCCTTTTCTCGGA BHQ-1 3`
Documentación establecida
24/26
Agenda
 La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos
de LNR y OPS
 Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores
algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna)
 Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia
epidemiológica en el LNR
 InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades
Emergentes (EVE)
 Perspectivas (activos y no reactivos)
Perspectivas
DENV (CUATRO SEROTIPOS,
GENOTIPOS)
CHIKV
ZIKA
WNV
MAYARO
Implementación
de vigilancia
proactiva
Algoritmo de diagnóstico SIKA
Algoritmo en fase aguda
Algoritmo en fase aguda
Laboratorio certificado y Acreditado
Por algoritmo de diagnóstico
Certificación ISO 9001:2008
Acreditación ISO 15189, por la Entidad Mexicana
de Acreditación (EMA)
Detección de Antígeno NS1
Detección de anticuerpos IgM (ELISA de captura)
Detección de Anticuerpos IgG (ELISA de captura)
Detección de RNA de virus dengue mediante RT-qPR “Multiplex”
Detección de RNA de virus dengue mediante RT-qPCR “Fourplex”
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarroll
División Serología o
Laboratorio de Arbovirus y virus hemorrágicos
QFB. Alma Núñez León
QBP. Rosalba Pérez Meza
QFB. Yanelli Adriana Torres Olmos
QFB. Claudia Rosales Jiménez
T.L. Adela Monserrat Aparicio Antonio
Apoyo Admvo. Rosa María Herrera Bautista
M. en C. María de la Luz Torres Rodríguez
M. en C. Mauricio Vázquez Pichardo
DGE/InDRE
Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos
División Biología Molecular/Innovación y desarrollo
División de serología
GRACIAS
Laboratorio de Arbovirus y
Virus Hemorrágicos
CISCO: 59410, 59591
[email protected]

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