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TRABAJO PRÁCTICO Nº 5 ESTUDIO DE ANEMIAS Emilse Ledesma Achem - 2016 - EVALUACIÓN CLÍNICA: ¿Cuándo fue el último análisis sin anemia? Origen étnico Antecedentes personales y heredofamiliares ESTUDIO DE LAS ANEMIAS Tratamiento previo con hierro, ácido fólico, vitamina B12. ESTUDIOS DE LABORATORIO: 1) Hemograma. Buena observación del frotis. 2) Reticulocitos 3) Estudio del metabolismo del hierro 4) Determinaciones especiales: - Electroforesis de Hb - ROE Toma de muestra Hemograma Reticulocitos Frotis Electroforesis de Hb • Fe • TIBC • % Saturación •Ferritina ROE RECUENTO DE RETICULOCITOS 3 gotas de sangre entera + 3 gotas de Azul Brillante de Cresilo Reticulocitos % = Ret. corregidos = Incubar 37 ºC 15 minutos Extendido Nº Reticulocitos Contados x 100 Nº Hematíes observados Reticulocitos Contados % x Hto pac. Hto. Promedio Normal RETICULOCITOS Estudio del Metabolismo del hierro Determinación de la concentración de hierro sérico • Método Colorimétrico: Fundamento Fe3+ Fe3+ Buffer – ph 3,7 Reductor TF Fe2+ + Fe2+ PBTS Fe2+ TF + Fe2+ Complejo coloreado • Muestra • TECNICA H2O •Limpieza del material Blanco Standard ----- Desconocido --------- Standard 500 ul ---- 500 ul Muestra ---- ---- 500 ul 2 ml 2 ml Buffer/Reductor PBTS 2 ml Mezclar y leer a 560 nm 1 gota Mezclar y leer a 560 nm contra agua destilada 1 gota Blanco de suero 1 gota Varones: 65-175 μg/dL Mujeres: 50-170 μg/dL Niños (1-12 años): 35-135 μg/dL TIBC : CAPACIDAD TOTAL DE UNIÓN DE HIERRO A TRANSFERRINA Fe3+ Fe3+ Fe3+ Fe3+ Fe3+ Fe3+ Fe3+ TF TF Fe3+ + Fe3+ Fe3+ Fe3+ TF Fe3+ + Agente quelante Fe3+ Fe3+ Fe3+ TF TF Fe3+ TF Fe3+ Fe3+ TF Fe3+ ph>7,2 Fe3+ TF Fe3+ Fe3+ Fe3+ Fe3+ Fe3+ TF r.p.m. SEGUIR CON TECNICA DE HIERRO SERICO VR: 250 – 400 ug/dL % de Saturación de la Transferrina % Saturación = Fe sérico ug/dL x 100 VR: 20 – 55 % Transferrina ug/dL INTERPRETACIÓN Anemia ferropénica A.T.C. Fe sérico TIBC % Saturación Talasemia Anemia Sideroblástica No No N No N Estadios de la deficiencia de hierro Estadio 1 PARÁMETROS Hemoglobina Fe sérico TIBC Ferritina Estadio 2 Depleción de Depleción del los depósitos de transporte de Fe Fe Estadio 3 Depleción del Fe funcional N N ↓ N ↓ ↓ N ↑ ↑ ↓ ↓ ↓ Anemia Ferropénica RESISTENCIA OSMÓTICA ERITROCITARIA Medida de la capacidad de una población de hematíes para resistir el efecto hipotónico del medio. Prueba 1 2 9g/L 0 % de hemolisis 3 4 5 6 7 8 9 10 Soluciones de NaCl de concentración decreciente 11 12 0 g/L [NaCl] 100 % de hemolisis Para cada eritrocito la ROE depende de la relación existente entre su superficie y el volumen. Esta prueba proporciona información sobre el cambio de forma del eritrocito (relación superficie / volumen) a partir de su forma normal (disco bicóncavo). -Esferocitosis hereditaria -AHA Anemias microcíticas hipocrómicas ROE Normal ROE Disminuida ROE Aumentada La ROE se expresa como la concentración de NaCl necesaria para producir un 50% de hemólisis (H50). Valores de Referencia Hemólisis 50% inmediata: 4,0 – 4,5 g/L Hemólisis 50% post-incubación: 4,6 – 5,9 g/L 1 2 3 1-Paciente Talasémico: disminución de la fragilidad osmótica (aumento de la ROE) H50% = 3,4g/L. 2-Paciente Normal: H50%= 4,4 g/L. 3-Paciente con Esferocitosis hereditaria: Aumento de la fragilidad osmótica (disminución de la ROE) H50 %= 5,9 g/L. ELECTROFORESIS DE HEMOGLOBINA • Electroforesis de hemoglobina a ph alcalino • Electroforesis de hemoglobina a ph ácido • Muestra: sangre entera (EDTA, heparina). Las muestras deben ser lavadas 3 veces en solución salina isotónica. • Hemolizado: se puede usar una solución lisante (EDTA, KCN y agua) o lisar por congelamiento y descongelamiento en el freezer. • Siempre procesar, simultáneamente, una muestra control. • Tiras de acetato de celulosa o gel de agar •Coloración PATRÓN ELECTROFORÉTICO A PH ALCALINO + - NORMAL b-TALASEMIA MENOR RASGO FALCIFORME ENFERMEDAD SC SANGRE NORMAL DE CORDÓN RASGO C CONTROL º CA1 A2 S C D E-O G F A º: Indica el origen PATRÓN ELECTROFORÉTICO A PH ÁCIDO + NORMAL RASGO FALCIFORME RASGO D ENFERMEDAD SC ENFERMEDAD SE SANGRE NORMAL DE CORDÓN RASGO C CONTROL C S º A D-O E-G F º: Indica el origen ELECTROFORESIS DE HB A PH ALCALINO 1 2 3 A F A2 1-b-talasemia menor (Hb A2 aumentada) 2-b-talasemia homocigota (Hb F únicamente , Hb A y Hb A2 ausentes) 3-Normal Hb disminuida IPR ≥3 Regenerativas A. Posthemorrágicas Agudas Intracorpusculares A. Hemolíticas HPN (HAM) Fe-Tf-Ferritina D-A-D D-D ó N-A (A.Ferropénica) (ATC) Extracorpusculares N/A VCM PCD P. Especiales (ROE, Elect. Hb) ≤1 Arregenerativas D (A.SideroblásticaInmunes No Inmunes R. de Perls) N (A.Aplásica, por ocupación) A (A.Megaloblástica) D= disminuido A= Aumentado N=Normal Anemia Ferropénica RBC: 1.66 M/µL HGB: 3.0 g/dL HCT: 11.0 % MCV: 63 fL MCH: 18.1 pg MCHC: 28.0 g/dL RDW: 20.0 % RBC 50 100 150 200 Anemia Megaloblástica RBC: 2.94 M/µL HGB: 10.2 g/dL HCT: 31.8 % MCV: 108 fL MCH: 34.7 pg MCHC: 32.1 g/dL RDW: 22.8 % Hemoglobinopatía S heterocigota GRACIAS POR SU ATENCIÓN!